肝内胆管细胞癌患者血清CA199、DKK1预测淋巴结转移的价值

王友春，陈宏伟，杨甜，马建党

（郑州大学附属洛阳中心医院消化内科，河南 洛阳471000）

肝内胆管细胞癌（Intrahepatie cholangiocarcinoma,ICC）是发生于肝内胆管上皮细胞的原发性腺癌,在原发性肝癌中发病率仅次于肝细胞癌[1]。由于肿瘤的侵袭性,ICC患者的预后很差,晚期诊断和治疗缺乏有效的选择,与肝细胞癌比较更易发生淋巴结转移，有临床显示,行淋巴结清扫显著增加了术后并发症发生率。因此，研究者认为对于淋巴结转移阴性的ICC患者不应常规行淋巴结清扫凹，因此,术前诊断淋巴结转移对术中手术方式的选择有重要意义[2,3]。早期发现肿瘤可使手术切除作为唯一可能的治疗方法，不幸的是，尽管最近成像方式和实验室测试的发展，ICC的诊断仍然具有挑战性，当不能提供手术时，病人往往处于晚期。此外，准确的评估疾病负担对治疗及预后至关重要。ICC特定的诊断和预后生物标志物已经成为科研人员和医学工作者关注的焦点,Dickkopf相关蛋白1(Recombinant Dickkopf Related Protein 1,DKK1)属于Dickkopf家族。DKK1是一种分泌蛋白，可抑制Wnt信号通路,进而在胚胎发育中起作用,已有研究表明[4]骨髓血浆和外周血中高水平的DKK1与多发性骨髓瘤患者存在溶骨病变有关。DKK1的诱导有助于由β-淀粉样蛋白触发的病理级联反应，并显著参与tau蛋白磷酸化的发展,在人类胰腺癌中，DKK1的表达降低[5]，这也意味着DKK1在该肿瘤中起着肿瘤抑制基因的作用,但对于DKK1与ICC的关系的研究较少。糖蛋白抗原199（Carbohydrate antigen 19-9,CA199）在正常胎儿中的胰腺、肝、肠等部位分布,在成年人中分布于胰腺和胆管上皮细胞等处，它是胃肠道肿瘤的相关抗原,还被认为是对胰腺癌敏感性最高的指标物[6,7]。本研究通过检测DKK1、CA199在ICC患者血清中的表达水平,分析DKK1、CA199表达水平与ICC患者临床特征的关系以及在预测淋巴结转移中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2019年1月在我院治疗的肝内胆管细胞癌患者103例为观察组，纳入标准：⑴均经病理学确诊；⑵在我院行手术切除及联合淋巴结清扫术；⑶患者临床资料保存完整。排除标准：⑴术前接受过化疗、放疗等抗肿瘤治疗；⑵合并有其他恶性肿瘤者；⑶临床资料欠缺。同时选取健康志愿者100例作为对照组，观察组和对照组一般资料比较见表1。

1.2 检测方法 收集所有受试者空腹时静脉血2ml,3500r/min离心10min，取血清置于EP管中，

表1 观察组和对照组一般资料比较

存储于零下-20℃冰箱中待测,采用全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物CA19-9水平。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中DKK1表达水平，按照DY1906试剂盒（R&D公司）说明书操作。对血清CA199、DKK1水平作ROC曲线预测患者淋巴结转移。

1.3 统计学处理 数据分析统计采用SPSS22.0软件，CA199、DKK1等计量资料采用均数±标准差表示，两组间比较使用t检验，性别比较使用卡方检验，预测价值采用受试者工作特征（ROC）曲线分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 二组血清CA199、DKK1水平比较 观察组血清CA199、DKK1水平明显高于对照组(P＜0.05)。见表2。

表2 观察组和对照组血清CA199、DKK1水平比较

2.2 观察组有无淋巴结转移患者血清CA199、DKK1水平比较 有淋巴结转移患者血清CA199、DKK1水平明显高于无淋巴结转移患者（P＜0.05）。见表3。

表3 观察组有无淋巴结转移患者血清CA199、DKK1水平比较

2.3 血清CA199、DKK1水平预测淋巴结转移价值血清CA199、DKK1预测患者淋巴结转移的ROC曲线下面积分别为0.665和0.765，P＜0.05，CA199、DKK1截断值分别为247.60U/ml和3.71ng/ml，灵敏性分别为42.40%和66.70%，特异性分别为84.29%和78.57%，见图1。

图1 ROC曲线图

3 讨论

ICC是一种罕见但经常发生的由胆道上皮引起的高度致命的恶性肿瘤，ICC具有较高的恶性程度,相比于肝细胞癌而言,ICC淋巴结转移的可能性更大[8],鉴于ICC发病率不断上升及其高死亡率,早期诊断对于改善患者预后至关重要。近年来的研究进展阐明了ICC的分子和遗传特征,为ICC的分子诊断提供了可能[9]。然而,由于缺乏足够的敏感性和特异性,大多数现有标记的临床适用性有限。此外,还需要对ICC进行额外的研究,以验证和确认某些潜在标记物的临床效用。尽管最近关于ICC诊断和预后生物标志物的研究令人鼓舞,但未来的研究需要继续关注对ICC分子发病机制的进一步了解,以期识别具有更高诊断和预后准确性的新型分子生物标志物。根治性手术为临床主要治疗手段,但手术方式的选择则取决于术前诊断结果,故积极开展术前检测,意义重大。本研究旨在分析术前检测肿瘤标志物对预测ICC淋巴结转移的价值。

CA199是一种由正常人胰腺细胞、胆道导管细胞、胃和结肠上皮细胞自然产生的连体Lewis血型抗原。因此，在良性胆道疾病（如胆管炎、原发性胆汁性肝硬化）以及其他胃肠道癌症（如胰腺癌和胃癌）中，它可能升高[10]。因此，大多数研究将CA199作为检测肿瘤的生物标志物进行检查，但其在ICC中的研究较少。

DKKl被认为是WNT通路的抑制因子,其在肿瘤中的作用亦存在争论。有研究[11,12]表明DKK1在肺癌、肝癌、多发性骨髓瘤花在你和血清中表达上升,提示其可能与一些肿瘤的发生、转移密切相关，DKKl可以促进多发性骨髓瘤的溶骨性损害，在肝细胞肝癌中，DKKl也可以促进癌细胞的侵袭能力。而在肾癌及部分乳腺癌中，被认为是起了抑癌作用[13]。关于DKKl在ICC中的作用未见报道。本课题的实验证实了DKKl在ICC中高表达且预示着不良预后。本部分对DKKl促进ICC肿瘤侵袭与转移的机制，进行了更深入的研究。

观察组血清CA199、DKK1水平分别高于对照组,有淋巴结转移患者血清CA 199、DKK1水平分别高于无淋巴结转移患者。作为低聚糖类抗原，CA199主要由癌细胞合成并通过胸导管排入血液，导致外周血中CA199含量增多。它已被用于鉴别胰腺癌,胃癌和结直肠癌等的鉴别诊断。研究结果一定程度说明了CA199也可作为ICC的一项诊断标志物。有研究表明[14]CAl99水平与淋巴结转移相关，CA199的高水平可有效预测淋巴结转移的发生率和生存率。Wnt/βcatenin信号传导途径的激活在许多肿瘤的发展和进展中起重要作用,DKK1可作为该途径的抑制剂,关于其在癌症中的作用受到越来越多的研究。本研究发现DKK1在ICC肿瘤组织中的表达明显高于正常人，提示它可能在ICC的发生和发展中起作用。DKK1的过度表达与恶性表型显著相关,例如无肿瘤包膜，肺门淋巴结的转移和分期，提示DKK1可能是参与ICC侵袭和转移的关键分子。作为分泌蛋白，DKK1在一系列肿瘤患者的血清中显著增加得到证实。血清CA199、DKK1预测患者淋巴结转移的ROC曲线下面积分别为0.665和0.765，P＜0.05，CA199、DKK1截断值分别为247.60U/ml和3.71ng/ml，灵敏性分别为42.40%和66.70%,特异性分别为84.29%和78.57%。CA199是一种由正常人胰腺细胞、胆道导管细胞、胃和结肠上皮细胞自然产生的连体Lewis血型抗原。因此，在良性胆道疾病（如胆管炎、原发性胆汁性肝硬化）以及其他胃肠道癌症（如胰腺癌和胃癌）中，它可能升高[15,16]。因此，大多数研究将CA199作为检测ICC的生物标志物进行检查，发现其准确性不理想，报告的敏感性和特异性差异很大。本研究发现DKK1在ICC患者血清中显著上调,提示DKK1在肿瘤分泌后可稳定存在于外周血中，其检测结果更准确，因此可能成为ICC的诊断和预后判断的一种血清学标志物。

综上所述，ICC癌患者血清CA199、DKK1预测淋巴结转移有一定的价值,其中DKK1预测价值较好。