兔病实验室诊断

时少磊

（山东省莒南县农业农村局，山东 莒南 276600）

1 病毒性疾病

1.1 病毒分离技术 该技术能检测被检材料中存活的、能在体外复制的传染性病毒。病毒分离技术特异性强，假阳性少，但需时较长，对实验室要求较高。

1.2 病毒检测

1.2.1 红细胞凝集试验 有些病毒具有凝集某些动物红细胞的能力，利用这种特性设计的试验称血凝试验。

兔出血症简单而准确的诊断方法就是进行血凝试验，利用兔的肝脏、脾等组织进行红细胞凝集试验能较快确诊是否感染。

1.2.2 血清学诊断 是利用阳性血清检测病毒性感染。常用的有直接凝集试验、间接凝集试验、琼脂免疫扩散试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。

1.2.3 包涵体检测 有些病毒感染细胞后会产生包涵体，对此可通过组织切片或涂片检查包涵体进行诊断。如兔的黏液瘤病可通过检查其皮肤组织中的包涵体来确诊。

1.2.4 电镜技术某些病毒感染早期可在标本中用电镜检查到病毒颗粒，并可从形态学上鉴别病毒的种类。

1.2.5 病毒核酸检测 核酸探针杂交法和聚合酶链反应（PCR）是检测病毒核酸的常用方法。

核酸探针杂交法的基本原理是使彼此准确互补的两条核苷酸序列在一定条件下牢固地相互结合形成双链核苷酸，用放射自显影可证实靶序列的存在。

PCR法灵敏度高，可以检出单个受感染细胞内的病毒核酸甚至单个分子的DNA，但假阳性率相对较高。

2 细菌性疾病

2.1 细菌分离培养技术 即无菌取病兔心血、肝脏、淋巴结、肠内容物等接种到合适的培养基上，挑取可疑的单个菌落纯化培养，再通过生化试验或血凝试验进行验证。

2.2 组织触片镜检 取病兔心血涂片或肝脏触片在火焰上固定后，用美蓝染色，再通过显微镜观察有无细菌存在。

2.3 动物试验 在进行细菌分离纯化试验、生化试验的基础上，利用实验动物进行接种试验，以进一步明确所分离细菌的致病力。

3 寄生虫性疾病

3.1 虫体检查法 对寄生在家兔体表的寄生虫，如痒螨、疥螨等，可采用肉眼观察和显微镜观察相结合的方法进行检查。

可取患兔头、耳、鼻、足等易感染寄生虫部位的毛发、皮屑等，或刮取病、健皮肤交界处皮屑，置载玻片上，滴加50%甘油溶液后置显微镜下检查。

3.2 虫卵检查法

3.2.1 肝球虫检查 将肝结节置于载玻片上，加盖玻片后置显微镜下观察，如见大量球虫卵囊，则可诊断为感染肝型球虫。

3.2.2 肠内容物检查 取患兔肠内容物置于载玻片上涂抹，再滴几滴蒸馏水后，于低倍显微镜下观察，如见球虫卵囊，则可诊断为感染肠球虫。

3.2.3 粪便检查 许多寄生虫，特别是寄生于消化道的寄生虫，其虫卵、卵囊或幼虫均可通过粪便排出体外。通过检查兔的粪便，可以确定其是否感染寄生虫及感染强度。

直接涂片法：取50%甘油水溶液1～2滴滴于载玻片上，再取黄豆大小的被检粪便与之混匀后盖上盖玻片镜检。直接涂片法简便，但检出率不高。

漂浮集卵法：取5～10 g 被检粪便置于烧杯中，加入少量饱和盐水搅拌混合后，加入约20 倍的漂浮液，再用金属筛或纱布滤去粪渣。滤液静置30～60 min，用直径0.5～1 cm的金属圈蘸取表面液膜抖落于载玻片上，并加盖片后镜检。

沉淀集卵法：取1～2 g 被检粪便置于试管中，加5倍量的水制成悬浮液后，经铜筛过滤到离心管中，再以800 r/min 离心3～5 min 后，弃上清液，将沉渣置载玻片上镜检虫卵。

麦氏计数法：是常用的虫卵计数方法。取被检粪样2 g放入三角烧瓶内，加饱和盐水58 mL和玻璃珠若干充分震荡制成混悬液。吸取混悬液注入麦氏计数室，置显微镜下计数计数室（1 cm2）内虫卵数。由于每室混悬液等于0.15 mL，结果乘以200，即为每克粪便虫卵数。通常一次计数4室，然后按平均值计算。