清江河多鳞白甲鱼胚胎发育观察

李 松，李 宏，张明建，王仁泉，李 鑫，秦开华

（1.广元市水产技术推广站，四川广元 628017；2.青川县农业农村局，四川青川 628100）

多鳞白甲鱼（Onychostoma macrolepis）隶属于鲤形目、鲤科、鲃亚科、白甲鱼属（Onychostoma GÜnther）[1]。多鳞白甲鱼具有丰富的地理遗传资源，其原因是分布区域的不连续性，它主要分布于渭河水系，嘉陵江和汉水水系的中上游，淮河上游，山东泰山、伊河和洛河[2]等不同地理区域的水系。资料显示，分布我国最北的一种鲃亚科鱼类是多鳞白甲鱼，它对研究鱼类生态适应性以及地理分布机制具有重要的作用[3]。另外，调查资料表明多鳞白甲鱼是秦巴山区[4]、长青自然保护区[5]和清江河特有鱼类国家级水产种质资源保护区的鱼类资源多样性重要物种。

当前，多鳞白甲鱼的生态习性与开发利用[6]、亲鱼仿生态培育[7]和人工繁殖[3，8]都取得成功，同时对其资源保护[9]、生物学特性[10]、形态组织学[11]、脂肪代谢[12]、营养需求[13]和饵料[14-15]等方面也进行了相关的研究和报道。虽然，2008年陈红菊等对泰山地区的多鳞白甲鱼胚胎发育进行了研究[16]，但关于不同生活水系的环境差异对该鱼在早期生活史的发育是否存在影响，未见报道。基于此，本文以清江河多鳞白甲鱼为实验对象，对其胚胎发育进行观察和描述，同时记录发育过程中的水温，旨在详细了解该鱼的胚胎发育规律，对保护鱼类资源和探索该鱼室内工厂化苗种培育具有重要的实践意义，同时也为人工繁殖和养殖提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 受精卵的来源及孵化

2019年4-6月，在四川龙洋渔业有限公司繁殖场，挑选出驯养成熟的多鳞白甲鱼亲鱼，经干法授精获得受精卵。将受精卵放入孵化框（50cm×25cm×20cm）中进行流水孵化。孵化期间，水流量为0.4-0.7t/h，水温为18.0-20.0℃，溶解氧为7.5-9.0mg/L，氨氮<0.05mg/L。

1.2 胚胎的观察及数据测量

用SZM体视显微镜对胚胎进行观察及拍照。在人工授精后的1min内及时取部分卵放置于玻璃皿中以观察其发育，大致上按开始阶段每30min观察一次受精卵，每次随机取30粒。随后根据其发育情况，可隔1-2h观察一次。实际上，平常要经常观察，还要根据胚胎发育实际情况加密观察。每次观察、照相的同时，详细记录好其形态发育特征、时间、温度。因达到各发育期的时间存在个体差异，各发育期的划分参照文献[17]的方法，按照50%以上个体达到该时期特征的时间来划分[18]。

用电子游标卡尺（永康市飞尔工贸有限公司，精确度0.01mm，测量范围0-150mm）测量卵径。用Corel DRAW X4 SP2软件处理胚胎照片。胚胎发育各时期的积温为胚胎某发育阶段的时间与水温的乘积[19]。

2 结果

2.1 胚胎发育各阶段经历时间和积温

在水温（19±1）℃条件下，多鳞白甲鱼整个胚胎发育过程可分为受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成及出膜7个阶段共26个时期（表1，图1），胚胎从受精卵到孵化出膜历时80h，积温1 551.98h·℃，其中受精卵耗时1h 20min，积温26.67h·℃，卵裂期耗时9h5min，积温173.82h·℃，囊胚期耗时5h 30min，积温100.25h·℃，原肠期耗时11h 51min，积温228.75h·℃，神经胚期耗时2h 14min，积温43.67h·℃，器官形成期耗时33h，积温638.82h·℃，出膜期耗时17h，积温340.00h·℃。

2.2 多鳞白甲鱼胚胎发育分期及特征

2.2.1 胚盘隆起阶段

受精卵圆球形，呈金黄色，卵膜坚韧，卵径1.90±0.02mm。遇水产生较强黏性，20min后充分吸水，黏性减弱，卵周隙逐渐变大，吸水后卵径2.60±0.03mm（图1A）。受精后1h20min，原生质集中在卵子的动物极而形成隆起的胚盘（图1B）。

2.2.2 卵裂阶段

受精后2h4min，胚盘表面出现明显的分裂沟，胚盘进行第1次卵裂形成大小相等的2个卵裂球（图1C）。3h11min胚盘第2次分裂为4个相同的细胞（图1D）。3h50min进行第3次卵裂，两条分裂沟平行分裂一次，形成两列，每列四个，进入8细胞期（图1E）。受精后4h47min和5h56min，胚胎发育分别进入32细胞期（图1F）和64细胞期（图1G）。此后，随着细胞的不断分裂，受精后10h25min，胚胎发育进入多细胞期（图1H），细胞很小，排列极不规则。

2.2.3 囊胚期

受精后12h 50min，胚盘开始变高，表面趋近光滑，只有个别细胞及边缘的分裂细胞能够看清，整个胚层如小丘，胚体进入囊胚早期（图1I）。随着胚胎进一步发育，高耸的细胞团开始降低，受精后14h 40min，囊胚层变矮变平，胚胎进入囊胚中期（图1J）。此后，囊胚层继续降低，受精后15h 55min，整个胚层更为扁平，囊胚细胞向卵黄部分下包1/3，胚胎发育进入囊胚晚期（图1K）。

2.2.4 原肠胚期

受精后22h 24min，胚层内卷，形成胚环，胚层下包卵黄囊近1/2进入，胚胎发育进入原肠早期（图1L）。随着胚胎细胞继续下包并向内卷入，受精后24h 10min，囊胚层细胞下包卵黄囊约2/3，胚盾出现，胚胎发育进入原肠中期（图1M）。受精后27h 46min，胚盘下包3/4，胚盾膨大，胚胎发育进入原肠晚期（图1N）。

2.2.5 神经胚期

神经胚期（图10）是出现在受精后的29h，此时胚层几乎完全下包，仅剩卵黄栓，神经板初步形成，胚体明显隆起及处于侧卧状态。受精后30h，随着胚盘的继续下包，胚体前端隆起，后端变宽变薄，卵黄栓逐渐变小，胚体延长，胚孔封闭，胚胎发育进入胚孔封闭期（图1P）。

2.2.6 器官形成期

受精后33h 21min，在胚体中前部出现1-4对肌节，脑区膨大，整个胚体处于侧卧状态（图1Q）。眼基（图1R）和眼囊（图1S）分别于受精后36h 36min和38h 49min出现，肌节13±2～17±2对。41h 48min尾端略突出，脑明显分化，尾芽逐渐游离卵黄囊（图1T）。受精后43h 51min，肌节增至20-22对，卵黄囊开始拉长，头尾距离增加，脑区显著隆起，此时胚胎发育进入听囊期（图1U）。受精后53h 13min，胚体微弱地抽搐（21次/min），脑区发达，明显隆起，胚体和卵黄囊继续拉长，此时胚胎发育进入肌肉效应期（图1V）。57h 22min胚体和卵黄拉得更长，胚体摆动，头部与卵黄连接处出现心脏原基（图1W）。耳石出现在受精后的59h 37min，此时胚体伸直，头部仍卷曲于卵黄囊前端，胚体摆动加强，卵黄囊呈棒槌形，前宽后窄（图1X）。受精后63h，心脏开始跳动，胚体不断翻滚（图1Y）。

2.2.7 出膜期

受精后80h，胚体在卵膜内剧烈翻滚，尾部破膜而出，心跳85～90次/min（图1Z）。初孵仔鱼体透明，卵黄囊棒槌状，常静止水底。

3 讨论

3.1 四川省青川县清江河与泰山多鳞白甲鱼胚胎发育的比较

陈红菊等[16]（2008年）报道了泰山赤鳞鱼（多鳞白甲鱼）的胚胎发育特征，获得了泰山赤鳞鱼卵径、孵化时间、胚胎发育时序等基础数据。本研究的孵化水温（19±1℃）与陈红菊等[16]（2008年）基本保持一致。比较发现，清江河和泰山的多鳞白甲鱼胚胎发育都经历受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成及出膜7个阶段，但清江河多鳞白甲鱼卵径（1.90mm）稍大于泰山多鳞白甲鱼（1.65～1.82mm）。同样的，清江河多鳞白甲鱼受精卵孵化历时长于泰山多鳞白甲鱼（80h>46h 50min）。功能器官的发育时序，清江河多鳞白甲鱼也要长于泰山多鳞白甲鱼。综上所述，清江河和泰山多鳞白甲鱼的胚胎发育存在差异，可能是由于生活的环境条件不同，如海拔高度（西部山区普遍高于东部山区）、水文条件、营养条件等，而自身做出的一种生活策略选择。

3.2 多鳞白甲鱼胚胎发育与鲃亚科其他鱼类的比较

鱼类胚胎发育具有种的特异性[9]，在不同的水温条件下，胚胎发育历时以及胚胎发育到某个时期的时间都是不相同的。多鳞白甲鱼与鲃亚科其他鱼类胚胎发育比较见表2。

表2 多鳞白甲鱼与鲃亚科其他鱼类胚胎发育特点比较