HPLC法测定蒙成药优日勒-13中栀子苷的含量

李玉华 姜 楠

内蒙古自治区通辽市食品药品检验所,内蒙古 通辽 028000

优日勒-13由栀子、木香等13味药组成，用于“宝日”病，胃肠痧症，呕吐，腹泻，消化不良，虫疾等[1]。栀子(GardeniajasminoidesEllis)是蒙成药常用药材，具有解热镇痛、抗炎[2]、镇静催眠、保肝利胆、防止动脉粥样硬化[3]，以及抗氧化[4]和保护神经系统[5]等多种药理作用。作为临床常用的蒙药医院制剂，优日勒-13疗效确切，未见任何不良反应发生。但目前为止，该成药质量控制的标准还停留在1988年版的《内蒙古蒙成药标准》补充本阶段，只有简单的外观性状和检查项目[6]。建立优日勒-13中主要药效成份栀子苷含量测定的方法，能有效控制该成药的内在质量，为该成药质量标准的提升提供参考[7]。

1 仪器及材料

1.1 仪器 岛津LC-2030C液相色谱仪，岛津LC-16A液相色谱仪，LabSolution工作，92SM-202A型电子天平，XS3DU电子天平，KQ5200DE超声波清洗机。

1.2 材料 水为高纯水，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。栀子苷对照品购于中国食品药品检定研究院，批号为110749—201718，含量97.6%；优日勒-13样品来源如下：样品1由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供，批号为20191028，样品2、3由库仑蒙医医院制剂室提供，批号分别为20170507和20171102。

2 方法学考察

2.1 色谱条件[8]Welch Ultimate Plus C18色谱柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)，Sepax Bio C18色谱柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)，柱温40 ℃，检测波长238 nm。乙腈-水(9∶91)为流动相，流速1.0 mL/min，进样量10 μL。

2.2 对照品溶液与供试品溶液配制[9-10]精密称取栀子苷对照品6.252 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得栀子苷对照品溶液(62.52 μg/mL)。

取样品粉末(过四号筛)约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 Hz)30 min，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.3 专属性试验 取按处方比例制备的不含栀子药材的阴性对照供试品，按2.2项下供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果阴性对照色谱图中在与栀子苷对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明该方法专属性强，其他组分对栀子苷的测定无干扰。色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.4 线性关系 考察精密称取栀子苷对照品 10.30 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得栀子苷对照品贮备液(0.1030 mg/mL)。精密吸取该贮备液50、100、300、500、600、900 μL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述各梯度浓度的对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以对照品峰面积Y为纵坐标，相应的对照的量X为横坐标，进行线性回归。得到栀子苷回归方程为：Y=14121X，r=0.9999。结果表明栀子苷在0.0515～0.927 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 按2.2项下供试品溶液配制方法，精密称取库仑蒙医医院制剂室提供，批号为20171102的样品1.0218 g，配制成精密度试验溶液，精密吸取该溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。重复进样6次，测得峰面积的RSD值为1.13%，表明该方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取库仑蒙医医院制剂室提供，批号为20171102的3号样品1.0183 g，按2.2项下供试品溶液制备方法配制稳定性试验溶液，室温放置，分别在0，1，3，6，12，24 hr进样，记录谱图，测得峰面积。结果24 h内峰面积的RSD值为0.93%，表明该方法提取的样品溶液在24 h内基本稳定。

2.7 重复性试验 取库仑蒙医医院制剂室提供，批号为20171102的3号样品6份，每份约1.0 g，精密称定，按2.2项下供试品溶液制备方法配制重复性试验溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算含量，结果6份平行样的含量RSD值为1.03%。表明该方法重复性良好。

2.8 准确度及范围[8]取已知含量的样品(库仑蒙医医院制剂室提供，批号：20171102，含量为1.4847 mg/g)9份，每份约0.05 g，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，精密加入栀子苷对照品贮备液(0.1030 mg/mL)4.5、9、12 mL，按2.2项下供试品溶液配制方法，配制成高、中、低三个浓度的加标回收溶液，精密量取各加标回收溶液 10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算回收率，结果见表1。三个浓度加标回收率平均值为99.01%，RSD值为0.83%。表明栀子苷含量在0.75～1.90 mg范围内测得结果准确可靠。

表1 回收率试验结果 (n=9)

2.9 色谱柱、仪器设备的耐用性试验 换不同厂家、不同型号的色谱柱及不同的液相色谱仪，取库仑蒙医医院制剂室提供，批号为20171102的3号样品，精密称定，按2.2项下配制样品溶液，精密吸取该样品溶液和2.2项下的对照品溶液各 10 μL 注入液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中栀子苷含量。结果见表2。

从表中数据可以看出，栀子苷的含量变化不大(RSD值0.96%)，表明该方法对不同色谱柱和仪器设备耐用性良好。

3 样品含量测定[11]

分别取3个厂家提供的优日勒-13样品粉末约1.0 g，精密称定，按2.2项下供试品溶液制备方法提取制备样品溶液，精密吸取10 L，注入液相色谱仪，记录峰面积，测定结果见表3。

表2 不同色谱柱、不同仪器的耐用性试验

表3 3批样品中栀子苷含量测定结果

4 讨论

参照《中国药典》2015[6]年版一部“栀子”含量测定项下栀子苷的测定方法，以乙腈-水(15∶85)为流动相，结果目标峰栀子苷与其它干扰组分峰分不开。调整流动相乙腈和水的比例，至乙腈-水(9∶91)，此时目标峰栀子苷与其它干扰组分分离较好，保留时间适宜，理论塔板数较高。故作为检测流动相。

成药粉末以甲醇作为提取溶剂进行超声提取(功率120 W,频率40 kHz)，为保证栀子苷成分提取完全，实验中考察了超声提取15 min、30 min和60 min，结果栀子苷的含量基本一致(RSD 0.51%)，故提取时间定为30 min。

通过专属性，精密度，稳定性、重复性试验，色谱柱及不同仪器设备的耐用性考察，结果表明该方法准确可靠，可作为优日勒-13中栀子苷含量测定的方法。