不同类型HPV 与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的关系探讨

蔡方萍

（海门市第二人民医院妇产科，江苏 南通 226100）

宫颈癌是一种可预防及可治愈的恶性肿瘤。近年来，随着宫颈癌筛查力度的加大，提高了临床早期病变的检出率，也有助于尽早采取干预措施，提高患者生存率。宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宫颈癌的癌前病变，如不及时处理，易发展成宫颈癌，影响患者预后[1]。临床研究发现，人乳头状瘤病毒（HPV）感染可引起子宫组织病变，导致CIN 及宫颈癌的发生[2]。临床将HPV 类型分为高危型与低危型，高危型有20 多种，其中16 和18 型是发生宫颈病变的主要类型，而低危型以6 型、11 型为主，可引发良性病变，从HPV 感染发展到CIN，再发展到宫颈癌要经历10 年左右的演变期，因此，了解不同类型HPV 感染情况，便于临床早期对宫颈病变做出准确判断，对早期预防CIN 及宫颈癌的发生起到积极作用[3]。本文回顾性研究2017 年2 月至2019 年10 月海门市第二人民医院妇科门诊就诊的300 例已确诊的CIN和宫颈癌患者，均采用实时荧光聚合酶链式反应（PCR）技术进行HPV 分型检测，探讨不同类型HPV 病毒感染情况，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取海门市第二人民医院2017 年2 月至2019 年10 月就诊的300 例已确诊的CIN 和宫颈癌患者，对其资料进行回顾性分析，纳入标准：①符合《临床肿瘤内科手册》[4]中CIN 和宫颈癌相关诊断标准者；通过细胞学及病理学确诊为CIN 及宫颈癌。②患者临床资料完整。③无精神疾病。排除标准：①癌细胞转移。②生存时间不足6个月。③合并严重器质性疾病。患者年龄19～74岁，平均（41.25±4.21）岁；其中CIN Ⅰ级患者75例（25.00%），CIN Ⅱ～Ⅲ级患者148 例（49.33%），宫颈癌患者77 例（25.67%）。院内医学伦理委员会审核并批准此研究，患者或家属对研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与处理采集的检测样本为受检者的宫颈上皮细胞，使用无菌棉拭子进行采集，并放入离心管中，加入适量无菌生理盐水，静置10 min，取出采集样本的棉拭子，并对样本进行离心处理，离心时间为5 min，转速14 000 r/min。完成上述操作后，留取沉淀，并将其置于-70 ℃冰箱内保存。

1.2.2 PCR 技术进行HPV 分型检测主要针对于HPV亚型中的低危型HPV6、HPV11 及高危型HPV16 和HPV18 4 种类型进行检测，使用的试剂来自华美生物工程公司。首先将样本从冰箱内取出，然后加入50 μL 裂解液进行裂解处理，将裂解液与处理后的样本溶液充分摇匀混合后，先进行加热处理，100 ℃加热1 min，然后再次进行离心处理，14 000 r/min，离心5 min，将适量（2 μL 左右）上层清液取出后，放置于反应管中，将此作为反应模板。然后进行PCR 检测，将温度调整为94 ℃，在5 min 内进行变性循环，共35 个循环，循环完成后，再将温度调整为72 ℃，进行5 min 的延伸处理。整个处理期间，注意要建立好阳性、阴性以及对照分析。最后，对PCR 产物进行凝胶电泳处理，置于2%琼脂糖凝胶进行30 min 的电泳，设置参数为8～100 V，然后使用凝胶成像仪在302 nm紫外线处进行观察，在紫外线下会发生溴化反应，DNA呈现红橙色的现象。根据对照分析，观察是否有红橙色光带，有红橙色光带者判定为阳性。

1.3 观察指标①分析不同宫颈病变患者年龄分布情况。②分析不同年龄患者HPV 分型结果。③分析不同宫颈病变患者HPV 分型结果。

1.4 统计学方法采用SPSS 20.0 统计软件分析数据，计数资料用[例(%)]表示，采用χ2检验。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同宫颈病变患者年龄分布情况CIN I 及CIN II～III患者中，发病年龄集中在20～35 岁，分别占比为49.33%及41.89%；宫颈癌患者中，发病年龄集中在36～50 岁，占比为38.96%，见表1。

2.2 不同年龄患者HPV 分型结果检测结果显示，300 例患者中，HPV 感染213 例，阳性率为71.00%，其中20～35 岁共感染94 例，占HPV 总感染例数的44.13%（94/213）,为感染高发年龄段。低危型HPV 6/11 感染的高峰年龄为＜20 岁、20～35 岁，占这两个年龄段阳性总例数的53.13%（51/96）；高危型HPV16 感染高峰年龄段为51～65 岁，占该年龄段阳性总例数的15.79%（6/38）；HPV18 感染高峰年龄段为＞65 岁，占该年龄段阳性总例数的40.00%（14/35）；混合感染以20～35岁年龄段占比较高，占该年龄段阳性总例数的24.47%（23/94），见表2。

2.3 不同宫颈病变患者HPV 分型结果在CINI 组患者中，低危型HPV6/11 占比最高，为84.48%，显著高于CIN II～III 及宫颈癌患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；在CINII～III 患者中，以低危型HPV6/11 占比最高，为43.00%，其次为混合感染，为25.00%；宫颈癌患者中，以高危型HPV18 占比最高，为34.55%，其次为混合感染，为30.91%，见表3。

3 讨论

临床认为宫颈癌的发生与发展是一个渐变的过程，最终有两种结局，好的结局是自然消退，坏的结局是发生癌变，渐变过程为CIN 发展到原位癌，再发展到早期浸润癌，最终发展为宫颈癌。由于宫颈癌的发病过程较为缓慢，因此早期采取干预措施，可逆转其结局[5]。可见，早期对宫颈癌进行筛查对疾病预后有利。

表1 不同宫颈病变患者年龄分布情况[例(%)]

表2 不同年龄患者HPV 分型结果[例(%)]

表3 不同宫颈病变患者HPV 分型结果[例(%)]

HPV 存在于自然界，目前有多个亚型，是一种与皮肤或黏膜增生性病变有关的DNA 病毒，其中HPV6、11 及42 等均为低危型，不会产生癌变，常见于生殖道良性疾病中；HPV16、18 及31 等均为高危型，会产生癌蛋白，使得细胞周期失控进而发生癌变。宫颈癌发病与高危型HPV 感染有关，其以隐性感染为主，引发不典型增生，其他协同因子参与其中即可发生癌变[6-7]。但显性感染在临床易发现，因此不能忽视隐性感染者追踪，需加大筛查力度。本次研究结果显示，CIN I 及CIN II～III 患者中，发病人群集中在20～35 岁，而宫颈癌患者，发病人群集中在36～50 岁。可见宫颈病变程度随着年龄增长而不断加重，宫颈癌发展为一个连续发展的过程，从正常宫颈过度到宫颈上皮内瘤变，最后发展为宫颈癌需要5～10 年的渐变过程。本次研究结果显示，HPV 感染高峰年龄为35 岁以下，而与宫颈癌的高峰年龄相比，有10 岁以上的差异，但两类患者的发展时间相似。应当将36～50 岁的群体作为高危人群，给予重点防治宣教。同时从研究中可知，HPV 阳性率逐渐低龄化，低危型HPV 6/11 感染的年龄较低，峰值＜35 岁，可见应当加强对年轻女性的健康指导，让年轻女性要注意生殖系统健康，并定期接受HPV 病毒筛查、宫颈细胞检查等。

本次研究结果显示，300例患者中，HPV总感染213例，阳性率71.00%，且低危型HPV6/11 所占阳性例数比例为46.01%，而高危型所占阳性例数比例为53.99%，表明HPV 感染随着宫颈病变的加重而持续升高。在不同宫颈病变中，高危型18 阳性率以宫颈癌最高，为34.55%，低危型6/11 阳性率以CIN I 最高，为84.48%，提示随着CIN 级别的增高，患者的宫颈病变越严重，高危型HPV 的阳性率也越高，此结果与杨惠霞等[8]的文献报道结果相符。有学者认为，宫颈的轻度病变主要由HPV感染细胞形态及结构变异导致，而增加机体抵抗力，HPV感染会消失，且细胞形态会逐渐恢复，反之，病情则会进展，而多数HPV 感染是短暂性的，是有持续HPV 感染才可引发宫颈癌[9]。有研究证实，年轻女性感染高危型16/18 更易引发宫颈癌，且年龄较大的女性，其发生宫颈癌与多种因素有关，如早婚及多产导致宫颈裂伤等，因此，对年轻女性的预防应在预防及治疗HPV 感染方面，尤其是高危型16 与18，检出后需要及时采取有效的治疗措施[10]。PCR 检测技术是检测HPV 的良好技术，其灵敏度高且操作简单，具有较好的阴性预测值，便于临床采用。但目前HPV 检测的成本较高，尚不能大面积用于宫颈癌的筛查中，临床应重视HPV 阳性患者的随访，加强关注力度。

综上，女性生殖道HPV 感染率随宫颈病变程度的加重呈现升高趋势，HPV 感染与年龄、不同程度宫颈病变均存在相关性。临床对重点人群进行PCR 检测，再根据筛查结果，对高危型人群进行密切追踪，了解HPV 感染患者的转归情况，以预防宫颈癌的发生。