母猪乳汁样本与血清样本中圆环病毒抗体的相关性检测分析

2021-03-07张涛涛

现代畜牧兽医 2021年12期

张涛涛，张超

（石家庄市兽用生物制品供应站，河北石家庄 050000）

随着我国养猪业的集约化、规模化发展，以圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）为主的病毒病已成为规模养猪场危害较大的传染病。该病主要损害动物机体的免疫器官，严重感染PCV-2猪群的蓝耳病和伪狂犬病免疫抗体的阳性率较低，表明感染PCV-2在一定程度上影响了机体的免疫功能[1]。自PCV-2 发现以来，其发病率一直呈上升趋势，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。

有实验室曾针对中国部分地区PCV-2 流行病学进行调查，对福建省、江西省、河北省等共12个省（区、市）的健康猪群和发病猪群共452份样本进行病原学检测，试验结果显示其中354 份样品检测为PCV-2 阳性，感染率高达78.3%[2]。PCV-2的病死率为10%～20%，常与猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染[3]，是其他疾病的基础疾病。有研究表明，母猪接种圆环病毒疫苗后，育肥猪圆环病的发病率大幅度降低，圆环病毒对免疫系统伤害的减少，同样使副猪嗜血杆菌病和链球菌病的发病率降低[4]。有数据显示，圆环病毒的免疫可间接提高猪瘟和口蹄疫的免疫抗体水平[5]。母猪接种疫苗后，PCV-2抗体不能通过胎盘传递，新生仔猪哺乳前基本无母源抗体，通过吮吸乳汁才可以获得母源抗体[6]。Kedkovid 等[7]首次对泰国已感染PCV3的母猪群的初乳进行PCV3的检测鉴定，并就血清及初乳中抗体滴度的关系进行了探讨。

本试验采用ELISA 检测方法对河北省某规模化猪场送检的76 份产房母猪血清及对应的76 份乳汁样本进行PCV-2 抗体检测。通过检测血清、乳汁样本中PCV-2 抗体水平，旨在统计分析乳汁、血清抗体水平之间的相关性，优化免疫程序，提高猪场圆环病毒病防控能力。

1 材料和方法

1.1 样本来源

样本来自河北省某规模化养猪场，共计152份，分别为产后母猪血清样本76 份及其对应乳汁样本76 份；其中1～46 号为初产母猪血清及其对应乳汁样本，47～76 号为2～3胎经产母猪血清及其对应乳汁样本。

1.2 试剂与仪器

猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）抗体酶免检测试剂盒（北京世纪元亨动物防疫技术有限公司）。

全自动酶标仪（Bio-Tek 仪器有限公司）、微量移液器（艾本德股份公司）、全自动洗板机、离心机、振荡器、恒温培养箱等。

1.3 试验方法

1.3.1 样本及检测试剂的制备

血清样本：全血样本1 000 r/min 离心10 min，取上清备用。乳汁样本：全乳样本1 000 r/min 离心10 min，取上清液备用。

检测试剂：所使用试剂恢复至25 ℃，使用前轻轻旋转或振荡混匀。

1.3.2 抗体检测

采用ELISA 抗体检测试剂盒对母猪血清样本及其对应乳汁样本进行PCV-2抗体检测，检测方法参照试剂盒说明书进行。

检测结果判定：置酶标仪450 nm 波长处测定各孔OD450nm值。试验成立的条件是阴性对照孔平均OD450nm值小于等于0.150，阳性对照平均OD450nm值大于等于0.600。样品OD450nm值＜阳性对照平均OD450nm×0.25时，判定为阴性；样品OD450nm值≥阳性对照平均OD450nm×0.25 时，判定为阳性。

1.4 数据统计与分析

数据采用Excel软件进行初步整理，采用SPSS软件进行统计分析。母猪血清和对应乳汁2 个样本采用Pearson相关系数分析。当母猪血清和对应乳汁2个样本数据正态性检验的显著性P＞0.05，表示服从正态分布，可采用Pearson 相关系数分析；当2 个样本的Pearson 相关系数0.8＜R＜1.0，表示2 个样本之间存在正相关且强相关，P＜0.01表示差异极显著。

初产母猪血清和2～3胎次母猪血清样本采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 母猪乳汁和血清PCV-2抗体检测结果（见表1）

由表1可知，1～76号样品的血清及乳汁样品检测结果对应，根据公式计算，本试验的临界值为0.421，即大于等于0.421判为阳性，小于0.421判为阴性。其中10号、63号血清和乳汁样本均为阴性，12 号、13 号、35 号母猪的乳汁样本为阳性，血清样本为阴性，其余样本检测结果均为阳性。

表1 母猪乳汁和血清PCV-2抗体检测结果Tab.1 Results of PCV-2 antibody detection in serum samples and ow milk samples

2.2 试验母猪血清样本和对应乳汁样本中PCV-2抗体水平之间的正态性检验、相关系数、显著性检验分析

2.2.1 母猪血清样本和对应乳汁样本PCV-2 抗体水平之间的正态性检验（见表2）

由于母猪血清样本和对应乳汁样本量均大于50，故以Kolmogorov-Smirnov检验结果为准。由表2可知，母猪血清样本及其对应乳汁样本2 组数据均服从正态分布（P＞0.05），可继续进行Pearson相关性分析。

表2 母猪血清样本和对应乳汁样本PCV-2抗体水平之间的正态性检验Tab.2 Normality test of PCV-2 antibody level between sow serum sample and corresponding milk sample

2.2.2 母猪血清样本和对应乳汁样本PCV-2 抗体水平之间的相关性及显著性检验（见表3）

由表3 可知，母猪血清样本和对应乳汁样本之间存在极显著的线性相关关系（P＜0.01），母猪在免疫接种PCV-2疫苗后，可以通过检测母猪乳汁抗体水平来推断同期母猪血清抗体水平。母猪血清样本和对应乳汁样本PCV-2 抗体水平存在正相关且强相关（R=0.815，0.8＜R＜1），结果表明，母猪乳汁抗体水平越高，同期母猪血清抗体水平越高。

表3 母猪血清样本和对应乳汁样本PCV-2抗体水平之间的相关性及显著性检验Tab.3 Relevance and sgnificance test of PCV-2 antibody level between sow serum smple and corresponding milk sample

2.3 不同胎次母猪群血清中PCV-2抗体结果（见表4）

由表4可知，初产母猪血清（1～46号）抗体OD450nm均值为1.082，明显高于2～3 胎次母猪血清（47～76 号）抗体OD450nm均值0.726，表明胎次越高的母猪，体内抗体水平越低。但2～3 胎次母猪血清的阳性率为96.7%，高于初产母猪血清的阳性率。

表4 不同胎次母猪群抗体结果Tab.4 PCV-2 antibody results of different parities of sow serum smple

2.3.1 初产母猪血清和2～3胎次母猪血清样本的方差齐性检验（见表5）

由表5 可知，初产母猪血清和2～3 胎次母猪血清样本之间的方差为齐性（P＞0.05），可使用单因素方差分析方法。

表5 初产母猪血清和2～3胎次母猪血清样本的方差齐性检验Tab.5 Test for homogeneity of variance of primiparous sow serum and 2～3 parity sow serum sample

2.3.2 初产母猪血清和2～3胎次母猪血清样本单因素方差分析（见表6）

由表6 可知，初产母猪血清和2～3 胎次母猪血清样本之间是存在极显著性差异（P＜0.01），结果表明，不同胎次母猪体内血清PCV-2抗体水平差异显著。

表6 初产母猪血清和2～3胎次母猪血清样本单因素方差分析Tab.6 Single factor analysis of variance of primiparous sow serum and 2～3 parity sow serum sample

3 讨论

通过检测与统计结果分析可知，该场母猪群PCV-2免疫抗体阳性率较高，免疫效果整体良好。其中10号、63号血清及对应乳汁抗体结果呈双阴性，12 号、13 号、35 号血清抗体结果呈阴性，乳汁抗体结果呈阳性，因OD450nm值处于临界值边缘，这些结果均可判定为免疫失败。本试验结果与马铭等[8]检测新疆某规模化猪场PCV-2 抗体以及张家瑞等[9]检测新疆部分地区PCV-2 抗体的结论一致。引起免疫失败的原因很多，包括漏免、免疫过程中剂量掌控不当或者动物自身情况等。郑逢梅[10]曾针对猪场免疫失败做过详细论述。黎先伟等[11]指出，任何继发感染或并发疾病引起机体免疫抑制因素均可降低PCV-2 疫苗的接种效果。针对上述两种情况应对母猪及其出生仔猪进行及时补免。

通过对初产母猪血清（1～46 号）和2～3 胎次母猪血清（47～76号）中PCV-2抗体结果的单因素方差分析可知，不同胎次母猪体内PCV-2抗体水平差异显著，胎次越高的母猪，体内抗体水平越低。初产母猪配种前一般做基础免疫2次，间隔3 w，生产1个月前加强免疫一次；经产母猪一般仅在生产1个月前跟胎免疫一次，主要防控母猪因PCV-2引起的繁殖障碍等问题，因此经产母猪抗体水平不如初产母猪，但抗体水平依然在保护范围之内，且经产母猪由于产前的反复免疫，群体阳性率高于初产母猪。吴波平[12]对福建省一起种猪场母猪生产异常情况进行调查，结合调查情况推断，木乃伊胎异常升高因母猪PCV-2免疫失败和免疫空白导致，并通过对1～7胎次母猪的生产性能分析发现，随着胎次增加，木乃伊胎个体发病率下降，此调查结果与本文结论一致。

根据Pearson 相关系数分析，可知血清和乳汁抗体检测结果呈正相关且强相关；根据显著性判断可知，血清抗体水平和乳汁抗体水平存在极显著线性相关性，即血清抗体水平和乳汁抗体水平之间存在极显著的强性正相关。结果表明，母猪在免疫接种PCV-2 疫苗后，可通过检测乳汁中抗体水平评估母猪同期血清抗体水平，并根据检测结果及时调整仔猪的免疫计划。采集血清样本过程中会导致母猪应激，应激反应强烈使垂体后叶分泌催产素受阻，导致母猪分娩后可能减乳或无乳[13]。研究乳汁检测代替常规检测已有很多成功案例，如，万积成等[14]研究发现，奶牛乳汁中孕酮的水平所反映的发情周期阶段与直肠检查法所评估的结果相一致。杨玉英等[15]研究建立了一种牛乳中检测结核抗体的方法，结果符合率达83.33%。相对于血清，乳汁的采集不仅减轻采样人员的工作量，提高工作效率，也减少了对动物的应激和损伤。因此，研究更快捷、方便的检测技术对疫病防控具有重要意义。