知母初加工及炮制过程中质量变化研究

2021-03-01张洪坤黄玉瑶郭长达杨美华路丽高贯彪吴韶辉

安徽农业科学 2021年3期

张洪坤黄玉瑶郭长达杨美华路丽高贯彪吴韶辉

摘要 [目的]探索知母初加工及炮制過程中黄酮类成分的变化规律。[方法]采用一测多评的方法，以芒果苷、新芒果苷、异芒果苷为指标，对产地炮制一体化加工所得的知母片、知母个、传统工艺知母个润切片以及盐知母等炮制品进行研究，探究知母初加工和炮制过程中黄酮类成分变化。[结果]产地炮制一体化所得知母片与新鲜知母相比，新芒果苷具有显著性差异（P<0.01），平均增幅91.2%;传统工艺所得知母个与新鲜知母相比，芒果苷、新芒果苷具有显著性差异（P<0.01），芒果苷平均增幅225.4%，新芒果苷降幅82.7%，而相对应的新芒果苷的含量明显下降;知母个再润切之后，变化趋势与传统工艺加工知母个一致，但是幅度小;经炮制成盐知母可知，产炮片经盐水润制后，芒果苷含量明显上升，新芒果苷含量明显下降，炮制后，由产炮片炮制所得的盐知母与传统片炮制所得的盐知母的成分含量处于同一水平，所得炮制品最终质量趋于一致。[结论]知母的初加工及其炮制过程中一直伴随着芒果苷和新芒果苷的成分转化。产地炮制一体化知母片与传统工艺所得的知母片黄酮类成分存在明显的差异，但这2种知母片炮制所得的盐知母最终质量趋于一致，而转化的程度取决于药材本身的物质基础。

关键词知母;炮制;初加工;黄酮类;质量变化

中图分类号 R283 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2021）03-0189-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.03.050

Abstract [Objective]To explore the variation of flavonoids during the primary processing and processing of Anemarrhena asphodeloides.[Method]One test and multiple evaluation method was used， with mangiferin， neomangiferin， and isomangiferin as indicators， research on processed products such as salt Anemarrhena asphodeloides， to explore the change of ingredients in Anemarrhena asphodeloides. [Result]Compared with fresh Anemarrhena asphodeloides produced by the integrated processing of Anemarrhena asphodeloides tablets from the origin， neomangiferin had significant differences （P<0.01）， with an average increase of 91.2%. Traditional mothers obtained from traditional Anemarrhena asphodeloides were compared with fresh mothers， there was a significant difference between mangiferin and neomangiferin （P<0.01）， the average increase of mangiferin was 225.4%， and the decrease of neomangiferin was 82.7%， neomangiferin content decreased significantly. After recutting， the change trend was the same， but the range was small. It could be seen from the processing of salted motherinlaw that the content of mangiferin increased significantly and the content of new mangiferin decreased significantly after the production of the tablet was humidified with salt water. The content of the ingredients of Anemarrhena asphodeloides was at the same level， and the final quality of the processed products tends to be the same. [Conclusion]The initial processing of Anemarrhena asphodeloides and its processing have been accompanied by the conversion of mangiferin and neomangiferin. There are obvious differences in the flavonoid composition between the integrated Anemarrhena asphodeloides tablets produced in the origin and the Anemarrhena asphodeloides tablets obtained by traditional techniques， but the final quality of the salt Anemarrhena asphodeloides prepared by the two Anemarrhena asphodeloides tablets tends to be consistent， and the degree of conversion depends on the medicinal materials.

Key words Anemarrhena asphodeloides;Processing;Primary processing;Flavonoids;Quality change

知母为百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge.）的干燥根茎，始载于《本经》，列为中品，《别录》载：“知母生河内川谷，二月八月采根暴干”，黄酮类为其主要药效成分，具有清热泻火、滋阴润燥的功效，是常用大宗品种[1]。知母初加工有2种方式，一种是亳州地区习惯的产地炮制一体化加工，即趁鲜切片，另一种是河北地区的传统个子货干燥，而对应的知母片就有2种来源（趁鲜切片和个子货润切片）。根据市场调研情况，目前市场上知母产地趁鲜切片占60%～70%，企业多从市场上采购这种趁鲜切片，而这种加工方式的知母片出现不合格片的比重较高，而经知母片炮制所得的盐知母片基本不会出现不合格现象。有文献报道，药监抽检的市面上40批知母片和21批盐知母中，知母片不合格5批，盐知母不合格1批，总不合格率为9.8%，其中知母片不合格项均为芒果苷[2]。不同加工炮制的知母的质量情况是否存在一定的联系值得探究。目前已有文献研究发现芒果苷等成分存在转化[3-5]，但是未明确知母整个加工炮制环节的质量变化关系。为了探寻知母在加工炮制中，鲜知母、知母片、盐知母之间的质量变化，研究其存在的“炮制转化”[6]，该研究于产地收集鲜知母（经新鲜采挖，除去泥沙、毛须等），进行产炮片（产地炮制一体化加工所得的知母片，简称产炮片，为鲜知母趁鲜切片后干燥所得）、知母个（鲜知母直接整个干燥而成）、传统片（传统工艺知母个润切片，简称传统片，为取知母个，经软化后切制、干燥所得）、盐知母（取知母片，经盐炙法炮制所得）等的加工和炮制，选择质量差异较大的黄酮类成分为指标，通过一测多评的方法，测定芒果苷、新芒果苷、异芒果苷等成分的含量，研究黄酮类成分的质量变化规律。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器和设备。

DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱系统;色谱柱Waters XBridge C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）;XS204型電子天平（d=0.1 mg，Mettler Toledo）;MX5型电子天平（d=0.001 mg，Mettler Toledo）;RHP-100型高速多功能粉碎机（浙江永康市荣浩工贸有限公司）;DHG-9245A型电热鼓风干燥箱（上海市一恒科学仪器有限公司）;KQ-500DA型数控超声波清洗仪（40 kHz & 500 W，昆山市超声仪器有限公司）;电热炒药机。

1.1.2 试剂。

芒果苷（111607-200402，中国食品药品检定研究院）;新芒果苷（MUST-16042232，成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度大于98%）;异芒果苷（MUST-15100910，成都曼思特生物科技有限公司，纯度99.81%）;乙腈（色谱纯，Merck）;冰乙酸（HPLC级，阿拉丁）;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

1.1.3 原料。

知母为2018年3月采集自安徽某些乡镇的知母，经亳州市沪谯药业有限公司郭长达副主任中药师鉴定均为百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge.）的根茎。所收集的样品类型为新鲜知母（6批）。样品信息见表1。

1.2 试验方法

1.2.1 测定方法。

该研究参照黄玉瑶等[4]的含量测定方法，以芒果苷和新芒果苷、异芒果苷为评价指标，方法学考察内容不再赘述，具体的含量测定方法如下。

1.2.1.1 色谱条件与系统适应性试验。色谱柱Waters XBridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相乙腈（A）和0.2%冰乙酸（B），按表2中的规定进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为258 nm。理论塔板数以芒果苷色谱峰计在50 000以上。

1.2.1.2 对照品溶液的制备。取芒果苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶解，配制成0.05 mg/mL的溶液，即得。

1.2.1.3 供试品溶液的制备。取知母粉末（过3号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，称定重量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀。用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

1.2.1.4 测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定，以芒果苷为参照，以其相应的峰为S峰，计算新芒果苷、异芒果苷的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%范围内，以芒果苷的峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算新芒果苷、异芒果苷的含量，计算公式为Wm=Wk×Amf×Ak（Ak为参照物峰面积，Wk为参照物浓度，Am为其他组分m峰面积，Wm为其他组分m浓度）。相对保留时间和校正因子见表3。

1.2.2 产炮片成分变化研究。

取鲜知母，清洗泥沙，去除毛须后直接切片，置烘箱中50 ℃干燥，备用，共6批（样品序号1～6）。按照一测多评法测定，得新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的含量。

1.2.3 知母个成分变化研究。

取鲜知母，清洗泥沙，去除毛须后直接置烘箱中50 ℃干燥，备用，共6批（样品序号1～6）。按照一测多评法测定，得新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的含量。

1.2.4 传统片成分变化研究。

取干燥知母个，共6批（样品序号1～6），抢水洗净之后，置镂空的塑料筐中，每隔1 h喷淋一次，共喷淋4次后，用湿布覆盖，放置6 h后，检查知母个已润透，取出，切片，50 ℃干燥，备用。按照一测多评法测定，得新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的含量。

1.2.5 盐知母成分变化研究。

根据生产经验，盐知母的炮制工艺为：取知母片，加40%盐水（食盐用量为2%）拌匀，闷润，采用电热炒药机炒至盐知母片老黄色～黄色，质硬脆，炒药机温度120 ℃，频率45 Hz。该研究采用产地切片和知母润切片2种知母片原料，考察盐知母闷润、炒制炮制过程中的成分变化。

1.2.5.1 以产炮片为原料炮制盐知母。

（1）润制过程中的成分变化。

取产地切片干燥品（样品序号1）5 kg，喷淋800 mL食盐水至知母片全部湿润润透，于放置0、10、20、30、40、50、60 min后取样，置50 ℃烘箱中干燥至水分合格，比较不同润制时间的成分变化。

（2）炒制过程中的成分变化。

取上述润制好的知母片，置已预热至120 ℃的炒药机中，频率40 Hz，进行炒制。在不同时间点取样，比较不同炒制时间的成分变化。

1.2.5.2 以传统片为原料炮制盐知母。

（1）润制过程中的成分变化。

取传统片干燥品（样品序号1）5 kg，喷淋800 mL食盐水至知母片全部湿润润透，于放置0、10、20、30、40、50、60 min后取样，置50 ℃烘箱中干燥至水分合格，比较不同润制时间的成分变化。

（2）炒制过程中的成分变化。

取润制好的知母片，置已预热至120 ℃的炒药机中，频率40 Hz，进行炒制。在不同时间点取样，比较不同炒制时间的成分变化。

2 结果与分析

2.1 产炮片成分变化研究

产炮片的成分变化见表4。经成对样本t检验（P<0.01）[7]，鲜知母与产炮片相比，芒果苷、异芒果苷无显著性差异，而新芒果苷具有显著性差异，平均增幅91.2%。另外该研究示例的产炮片含4批次不符合中国药典芒果苷规定的含量限度。

2.2 知母个成分变化研究

知母个的成分变化见表5。经成对样本t检验（P<0.01），鲜知母与干燥后的知母个相比，芒果苷、新芒果苷具有显著性差异，而异芒果苷无显著性差异，鲜知母加工干燥個子货之后，芒果苷的含量明显上升，而相对应的新芒果苷含量明显下降，芒果苷平均增幅225.4%，新芒果苷降幅82.7%。知母个为传统的知母产地初加工，与“2.1”项产炮片相比，产炮片是快速风干的过程，而知母个则是在自身水、热参与下的缓慢过程，所表现出来的黄酮类成分的变化情况也不同。即在鲜知母加工成知母个的过程中，明显出现了新芒果苷向芒果苷转化的情况。

2.3 传统片成分变化研究

由表6可知，加工成传统片后，各成分变化幅度较小，成对样本t检验（P<0.01）均无显著性差异。但是从直观数据分析中可以看出，加工成传统片后，芒果苷上升，新芒果苷下降，虽然幅度较小，但是也说明了在知母个润切的过程中，芒果苷和新芒果苷存在转化的情况。个别数据出现润切后芒果苷含量降低，可能是因为水处理损失的问题。

2.4 盐知母成分变化研究

2.4.1 以产炮片为原料炮制盐知母。

2.4.1.1 润制过程中的成分变化。

由表7可知，产炮片经盐水润制后，芒果苷含量逐渐上升，新芒果苷含量逐渐下降，异芒果苷含量变化无明显规律。即在盐水的参与下，随着润制程度的加深，产炮片中新芒果苷逐渐向芒果苷转化。

2.4.1.2 炒制过程中的成分变化。

由表8可知，以产炮片为原料炮制盐知母的炒制过程中，芒果苷、新芒果苷和异芒果苷均呈小幅度的降低。

2.4.2 以传统片为原料炮制盐知母。

2.4.2.1 润制过程中的成分变化。

由表9可知，传统片经盐润制后，芒果苷有小幅度的上升，新芒果苷和异芒果苷均有小幅度的降低。

2.4.2.2 炒制过程中的成分变化。

由表10可知，以传统片为原料炮制盐知母的炒制过程中，芒果苷、新芒果苷和异芒果苷均呈小幅度的降低。

3 结论与讨论

知母初加工及其炮制过程中一直伴随着芒果苷和新芒果苷的成分转化。结合鲜知母、知母片（产炮片、传统片）、知母个、盐知母等炮制过程中的变化规律，芒果苷和新芒果苷间存在转化，其转化的原理是在有水参与的条件下发生水解反应[3-5]。

综合各组数据，可知所得炮制品最终质量可趋于一致，即“鲜知母→产炮片→盐知母”≈“鲜知母→知母个→传统片→盐知母”。2种路线趋同的关键是水的参与，尽管前述产炮片芒果苷含量很低、新芒果苷含量高，但是在水的参与下，经过一定时间润制，激发了这个环节的质量转化，最终与传统片处于同一水平。而各环节转化的程度主要基于2个方面的因素，一是药材本身的原始物质积累，二是水参与的程度（工艺参数的控制）。有研究报道，盐知母先拌盐水后炒比先炒后加盐水的方式所得芒果苷含量也增高[8]，盐知母炮制前后芒果苷含量变化趋势不一致[9-12]，该研究所得的结论也可以解释此种现象。

该试验经研究知母产品加工和炮制过程中的成分转化，再次说明产地炮制一体化并不是所有品种都适用的，需要通过研究验证其可行性、合理性。该研究中知母经产炮一体化加工后，所得的知母片的芒果苷含量低、新芒果苷含量高，该研究项目组跟踪了3年，每月取亳州地块知母样品进行跟踪，所得的结果一致，与传统的加工方式所得相悖。如果不进行再次炮制，是不能满足质量和临床用药要求的，如炮制成盐知母或经润制。但是有文献报道，先将鲜知母干燥至一定的程度（40%含水量），再切片，经验证一体化工艺饮片与传统工艺饮片在化学组成和药效上具有等效性[13]。这一方法与该研究所使用的直接趁鲜切片的方法不同，可能产地农户大部分无法把握这个关键的参数，因此所产出的知母片多有不合格的。

综上所述，知母产地初加工及炮制过程中成分变化复杂，内环境下如何转化的还有待探究，但是通过该试验的研究，可知鲜知母、产炮片、知母个、传统片、盐知母等的质量变化的重要因素是水环境，过多易造成流失，过少反应不完全，因此芒果苷和新芒果苷是可以作为知母加工和炮制过程中的重要质量指征，监测知母的质量变化。

参考文献

[1] 赵小勤，黄晓婧，许莉，等.知母的本草考证和产地调研[J].亚太传统医药，2019，15（4）：77-79.

[2] 戚鹏飞，李洁，张彩霞，等.2018年甘肅省抽验知母饮片质量分析[J].甘肃科技，2019，35（19）：68-70.

[3] 赵小勤，黄晓婧，许莉，等.知母饮片的质量分析与研究[J].中国药事，2018，32（10）：1349-1353.

[4] 黄玉瑶，张洪坤，路丽，等.一测多评法评价不同主产区春知母饮片的质量[J].中药材，2017，40（2）：387-391.

[5] 王晓婷，闫丽，孙冬月，等.星点设计-效应面法优化知母盐制的炮制工艺[J].中国医药科学，2018，8（3）：42-46，50.

[6] 许枬，贾天柱.中药炮制转化——提高中药饮片质量的新思路[J].中华中医药杂志，2016，31（8）：3173-3177.

[7] 张洪坤，黄玉瑶，路丽，等.基于HPLC-ELSD指纹图谱的亳州和河北知母的聚类和判别研究[J].时珍国医国药，2017，28（11）：2670-2673.

[8] 许金凯，李卫飞，支美汝，等.以芒果苷含量考察盐炙知母的加盐方式和盐水比[J].中华中医药杂志，2019，34（7）：3238-3241.

[9] 高慧，侯宇，贾天柱.知母盐制前后化学成分的变化[J].中成药，2009，31（10）：1567-1571.

[10] 陈万生，乔传卓.加工炮制对知母品质的影响[J].中国中药杂志，1997，22（4）：212-214.