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枫杨叶挥发油的提取及化学成分研究

2021-02-22薄新党余科义

湖北农业科学 2021年1期
关键词:枫杨石竹挥发油

薄新党,余科义

(河南应用技术职业学院,郑州 450042)

枫杨(Pterocarya stenopteraC.DC)属于胡桃科(Juglandaceae)枫杨属(Pterocarya)植物木本落叶大乔木。枫杨属植物主要分布在南亚热带和暖温带地区,共有9种[1]。据记载,枫杨叶和树皮具有解热杀虫、祛风除湿等功效;主要在皮肤过敏、牙痛以及细菌性脓疮等方面有显著的治疗效果[2]。现代研究表明,枫杨属植物含有挥发油、萜类、甾体类、黄酮类等化学成分[1,3-6],枫杨的生物活性和药用价值有抗菌[7,8]及抗氧化[9]、抗肿瘤等活性[10-12]、农用防治杀虫[13]、防治元胡霜霉病[14]、引诱棉铃虫处女雌蛾[15]、灭螺[16]、防治鱼类的细菌性烂鳃病、赤皮病等[17]。枫杨变种很多,不同的产地其成分和生物活性存在一定的差异。枫杨对生长环境要求不高,生命力强,分布广。因其枝干粗壮,枝叶旺盛,常做行道树栽培。枫杨挥发油的研究和应用很少有报道。试验对河南当地产枫杨叶挥发油的提取和化学成分进行研究,为当地枫杨植物的开发、应用以及进一步研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

枫杨叶2018年10月采摘于河南应用技术职业学院郑州校区校园内。

HH-1型电热恒温水浴锅,北京科伟永兴仪器有限公司;CS-700型超帅高速多功能粉碎机,武义海纳电器有限公司;FA2004N型电子天平,上海精密科学仪器有限公司;KQ-800KDE型高功率数控超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司;QP-2010PLUS型岛津气质联用仪,日本岛津仪器设备有限公司;去离子水,郑州春晴乐饮品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 单因素试验探究枫杨叶挥发油的提取 将采摘的新鲜树叶用去离子水洗净,放置通风处自然晾干表面水分,然后放入多功能粉碎机进行粉碎;称取一定质量粉碎过的枫杨树叶放入烧瓶中,加入去离子水,在100 W、40 kHz条件下超声处理一定时间。将超声处理过的样品置于安装好的挥发油提取装置,在一定的温度下用水蒸气蒸馏一段时间,自然冷却至室温后,收集挥发油,加入少量无水硫酸钠干燥除水,去除干燥剂,得到枫杨叶挥发油,颜色为淡黄色,称重并计算产率。挥发油提取率=挥发油质量/提取物质量×100%[18]。

1)超声时间对枫杨叶挥发油提取率的影响。精确称取粉碎的新鲜枫杨叶80 g,加入到500 mL单口烧瓶中,同时加入300 mL去离子水,放入超声波清洗器中,以100 W功率超声,设置超声时间分别为10、20、30、40、50 min。超声结束后,进行水蒸气蒸馏提取。单口烧瓶上部连接挥发油提取器与回流冷凝管,向挥发油提取器提取管加水至挥发油提取器刻度部分,以刚刚溢流入烧瓶为好。将烧瓶置于恒温油浴锅中,设定蒸馏温度为120℃,保持微沸状态提取6 h;待提取结束后,放置片刻,冷却至室温,取下挥发油提取器,收集挥发油,加入无水硫酸钠除去水分,精密测量挥发油的质量计算挥发油的提取率。

2)蒸馏温度对枫杨叶挥发油提取率的影响。其他条件和操作同上,以100 W功率超声30 min,蒸馏温度分别为 110、115、120、125、130 ℃,保持微沸状态提取6 h;收集并称量挥发油,计算不同的蒸馏温度下枫杨叶挥发油提取率。

3)蒸馏时间对枫杨叶挥发油提取率的影响。其他条件和操作同上,以100 W功率超声30 min,蒸馏温度为 128 ℃,蒸馏时间分别为 4、5、6、7、8 h,收集并称量挥发油,计算不同的蒸馏时间下枫杨叶挥发油提取率。

1.2.2 正交试验 基于上述单因素试验,以总挥发油提取率为指标,探究超声时间(A)、蒸馏温度(B)和蒸馏时间(C)对其影响,设计L9(34)进行正交试验如表1所示。

表1 正交试验因素与水平

1.2.3 验证试验 根据正交试验获得的枫杨叶挥发油最佳提取工艺条件,进行3次平行验证试验取平均值,获得枫杨叶挥发油提取率。

1.2.4 枫杨叶挥发油GC-MS成分鉴定与分析

1)GC条件。色谱柱 RXI-SiL-MS(30 m×250 mm×0.25 μm);升温程序为柱温 45 ℃,保持 1 min,以3℃/min升至 120℃,保持 5 min,以 5℃/min升至220℃,保持10 min;进样口温度250℃,载气为高纯氦气(99.999%),流量为 2 mL/min,分流比 2∶1,进样量 1 μL。

2)MS条件。电子轰击EI为电离源,离子源温度200℃,接口温度250℃,电离能量70 eV,质量扫描范围为 35~350 amu,间隔 0.2 s。

图1 超声时间对挥发油提取率的影响

2 结果与分析

2.1 单因素试验

2.1.1 超声时间的选择 图1是不同超声时间对提取率的影响。由图1可知,随着超声时间的增加,枫杨叶挥发油的提取率明显增高,在超声30 min时达到最大提取率。当超声时间继续增加,整体提取率略呈下降趋势,原因可能是长时间超声处理会破坏某些化学组分的结构,降低挥发油的提取率[19]。因此本试验选择20、30、40 min作为正交试验超声时间的水平。

2.1.2 蒸馏温度的选择 图2是不同提取温度对枫杨叶挥发油提取率的影响。结果表明,随着提取温度的升高,枫杨挥发油的提取率呈上升趋势。但当温度达到125℃后,枫杨挥发油提取率达到最高,之后随着温度的升高,枫杨挥发油提取率呈减少的趋势。分析原因可能由于温度过高其中一些化学成分遭到破坏,溶解于水中[20],且温度过高蒸气量大大增加,超过冷凝负荷,综合两方面原因使得提取率有所下降。同时温度过高也会带来能源浪费和试验的危险性等问题。综合考虑,选取115、120、125℃作为正交试验蒸馏温度的水平。

图2 提取温度对挥发油提取率的影响

2.1.3 蒸馏时间的选择 图3是不同提取时间对提取率的影响。由图3可知,随着提取时间的增加,枫杨叶挥发油的提取率呈上升趋势。提取率在6 h时达到最大,之后提取率略有下降。原因可能为挥发油长时间在高温下与氧气接触被氧化分解挥发出去[21]。所以,本试验选择 5、6、7 h 作为正交试验蒸馏时间的水平。

2.2 正交试验结果

从表2得出,各因素对枫杨叶挥发油提取率的影响的主次顺序为B>C>A,最佳提取工艺条件为A2B3C3。即超声时间30 min、蒸馏温度125℃、蒸馏时间7 h为枫杨叶挥发油的最佳提取工艺。

表2 L9(34)正交试验方案及结果

2.3 验证试验

因优化方案A2B3C3在正交试验中没有出现,需要进行验证试验。按A2B3C3方案,进行3次平行验证试验,取平均值。结果,枫杨叶挥发油的提取率为0.040 62%,高于正交试验的最高值0.039 52%,说明各因素的协同效应提高了挥发油的提取率。故枫杨叶挥发油的最佳提取工艺条件为在100 W功率下超声时间30 min,蒸馏温度125℃,蒸馏时间7 h。

2.4 枫杨叶挥发油化学成分

利用GC-MS对枫杨叶挥发油成分进行分析,通过对谱库NIST11检索、质谱分析确定挥发油的化学成分,其总离子流结果如图4,离子流结果具体分析结果见表3。由图4和表3可知,从河南枫杨叶挥发油中共分析鉴定出56种化合物,主要包含烯、醇、烷、醛、酮、酯等,共占挥发油总量的79.85%。其中,含量最高的成分是氧化石竹烯(40.56%),其次是(1S-cis)1,2,3,5,6,8a-六氢-4,7-二甲基-1-异丙烯基萘(18.29%)和石竹烯(10.22%),含量大于1%的成分还有β-丁子香烯(5.72%)、α-二去氢菖蒲烯(1.30%)、古巴烯(1.27%)、T-木罗醇(1.11%)和α-愈创烯(1.02%)等。与已报道的华南产枫杨挥发油成分相比,华南产枫杨挥发油主要成分也含有丁香烯[10],但不含氧化丁香烯,可能的原因是原料产地不同和叶子采摘的时间不同。与采摘于7月的华南产枫杨叶相比,河南产枫杨叶采摘于10月,叶子更成熟,挥发油中氧化石竹烯含量偏高。所以,氧化石竹烯是枫杨挥发油的主要成分。

表3 挥发油的主要成分

续表3

图4 河南枫杨叶挥发油成分的总离子流

3 结论

采用超声辅助水蒸气蒸馏法提取河南枫杨叶挥发油,通过单因素试验和正交试验探究了超声时间、蒸馏温度,蒸馏时间对枫杨叶挥发油提取的影响。枫杨叶挥发油最佳提取工艺条件是超声功率100 W,超声波频率40 kHz条件下,超声时间30 min,蒸馏温度125℃,蒸馏时间7 h,该条件下枫杨叶挥发油的提取率为0.040 62%。通过GC-MS技术分析鉴定出56种挥发油化学成分,主要包含烯、醇、烷、醛、酮、酯等,占挥发油总量的79.85%。其中,含量最高的成分是氧化石竹烯(40.56%),其次是(1S-cis)1,2,3,5,6,8a-六氢-4,7-二甲基-1-异丙烯基萘(18.29%)和石竹烯(10.22%)。枫杨挥发油具有抗菌、抗氧化等多种生物活性,在农业、渔业等方面有较为广泛的应用。枫杨资源丰富,分布广泛,但枫杨资源利用率很低。本研究成果为枫杨资源的研究和开发利用提供参考。

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