河南信阳规模化猪场仔猪腹泻的诊断和疗效观察

余洪涛，马超锋，周应海

（1.淮滨县畜产品检验检测中心，河南 信阳 464400；2.信阳市动物疫病预防控制中心，河南 信阳464000；3.潢川县动物卫生监督所，河南 信阳 465150）

腹泻是养猪生产中较常见的疾病，能够引起不同阶段猪群发病，发病猪主要出现呕吐、腹泻、精神沉郁、食欲下降等症状，严重者会造成猪只特别是仔猪的死亡，给养殖场带来较大经济损失[1-2]。猪群发生腹泻的原因很多，有病原微生物感染造成的：如病毒、细菌、寄生虫等微生物的感染，也有饲料发生变质引起霉菌毒素中毒等因素引起的腹泻[3-6]。王瑞等2013年对河南信阳地区仔猪腹泻开展流行病学调查，流行性腹泻病毒阳性率为61.82%、传染性胃肠炎病毒阳性率为10.91%[7]。目前，治疗猪腹泻疾病主要采用疫苗免疫和抗生素防治，并且有一定疗效，但由于病毒或者细菌毒株发生变化，会使疫苗保护力下降；大量抗生素的使用又会造成猪群的细菌耐药性增加，降低治疗效果[3-4]。因此，研制中药治疗猪腹泻是行业发展的一个趋势。猪腹泻按照中医理论可分为热泻、寒泻、虚泻和食伤泻等[8]，根据中兽医扶正驱邪、标本兼治的理论，组织人员研制双葛止泻口服液用于猪腹泻的治疗，以期为该病的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 猪群发病情况及病料采集 2019年2—3月，河南信阳某规模化猪场部分哺乳仔猪开始出现腹泻症状，主要表现为精神沉郁、食欲减退、排黄色或黑色水样粪便、有较大腥臭气味，病猪鼻镜干燥，口渴贪饮，病情较严重的猪只出现死亡，死亡130头。无菌取病死猪肛门拭子、肠内容物、新鲜粪便等样品10份，低温保存（0～4 ℃）备检。

1.1.2 主要检测试剂及使用药物 主要检测试剂：猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（批号：18101803）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（批号：18101803）、猪轮状病毒（PoRV）核酸检测试剂盒（荧光P C R法）（批号：18101803），购自广州维伯鑫生物科技股份有限公司；核酸提取试剂盒（批号：E0119020211），购自西安天隆科技有限公司；血琼脂平板、麦康凯培养基、革兰氏染色试剂等，购自郑州安图绿科生物公司。

使用药物：双葛止泻口服液，批号：20180201，规格：每1 mL相当于原生药0.45 g，洛阳某公司生产；白头翁口服液，批号：20180906，规格：每1 mL相当于原生药1 g，广东某公司生产。

1.1.3 主要仪器设备 超净工作台（SW-CJ-2FD），苏州安泰空气技术有限公司；全自动核酸提取仪（NP968-C），西安天隆科技有限公司；荧光PCR仪（C1000 Touch），美国Bio-Rad公司；高速微量离心机（mikro185），德国hettich公司；移液器（5-1000 μL），德国Eppendorf公司；HH数显恒温水浴锅，江苏金坛晶玻实验仪器厂；SPX-150B智能型生化培养箱，上海琅轩实验设备有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 临诊观察 观察并记录病死猪发病情况，剖检病死猪、观察其病理变化。

1.2.2 病原菌分离与鉴定 取病死猪粪便及肠内容物涂片、革兰氏染色后镜检，然后将病料无菌划线接种于血琼脂平板、麦康凯平板上，37 ℃二氧化碳培养箱培养，24～48 h观察菌落形态，挑取单个培养基菌落涂片，革兰氏染色后镜检。

1.2.3 病料的荧光PCR鉴定 采集的肛门拭子、粪便及肠内容物等样品RNA的提取及PEDV、TGEV、PoRV的检测，操作方法参照试剂盒说明书进行。

检测判定标准：阴性质控品Ct值＞38或无Ct值显示，阳性质控品扩增曲线有明显指数生长期且Ct值≤32，以上条件同时满足则试验成立。样品检测结果Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线为阳性；样品检测结果35＜Ct值≤38为可疑，应重测；样本检测结果Ct值＞38或无Ct值为阴性。

1.2.4 猪群治疗方案 选取确定发生腹泻的病猪150头，分为5个组，每组30头，各给药组根据体重确定每头试验猪给药量，分别为双葛止泻口服液低剂量组、中剂量组、高剂量组、白头翁口服液药物对照组、空白对照组，空白对照组给予不含药物的洁净水和给食观察治疗效果，具体见表1，使用死亡率和治愈率两个指标评价治疗效果，治愈标准根据《中药新药临床指导原则》[9]制定，用药结束后发病症状是否消失为判定依据。

表1 试验动物分组及给药方法

死亡率（%）=组内死亡病猪数/组内用药病猪数×100；治愈率（%）=组内治愈病猪数/组内用药病猪数×100。统计结果采用SPSS 19.0软件分析各试验组差异显著性，P≤0.01时差异极显著，P≤0.05差异显著，P＞0.05时差异不显著。

2 结果与分析

2.1 发病症状及病理变化

发病症状：病初精神委顿、食欲缺乏、不愿走动、常有呕吐、随后迅速腹泻、拉水样或糊状粪便、脱水严重、严重者死亡。病理变化：仔猪胃内充满凝乳块或食物、小肠壁菲薄、半透明、内容物呈灰黄色或灰黑色液状，见图1。

图1 猪发病症状及剖检情况

2.2 细菌分离及鉴定结果

分离菌在麦康凯培养基上培养48 h后，无菌落生长；在血琼脂平板上生长有菌落，菌落周围有不透明的草绿色溶血环。挑取菌落涂片镜检后，有排列成链状或成双的蓝紫色呈圆形或卵圆形的细菌，结合培养基上α溶血现象，判定分离出α型溶血链球菌，无致病性大肠杆菌存在（图2）。

图2 链球菌革兰染色镜检

2.3 病料荧光PCR鉴定结果

采用荧光PCR检测10份样品，结果显示，PEDV和TGEV无明显的荧光扩增信号，无Ct值，均为阴性；PoRV有5份样品（2～6号样品）有明显的指数增长曲线，且Ct值＜35，判为阳性，说明猪群中存在轮状病毒感染（图3）。

图3 样品荧光定量PCR检测结果

2.4 不同试验组治疗效果

试验期间记录各组死亡头数，统计各组的死亡率、治愈率。数据及统计分析见表2所示。从表2中看出，与空白对照组相比，双葛止泻口服液中高剂量组的死亡率均极显著降低（P≤0.01），白头翁口服液组的死亡率显著降低（0.01＜P≤0.05），低剂量组死亡率降低不显著（P＞0.05），4个给药组之间死亡率差异不显著（P＞0.05）；4个给药组的治愈率均极显著提高（P≤0.01）。中高剂量组治愈率均显著高于低剂量组（0.01＜P≤0.05），高中剂量组的治愈率与白头翁口服液组相比，差异不显著（P＞0.05），低剂量组的治愈率与白头翁口服液组相比，差异显著（0.01＜P≤0.05）。

表2 各试验组治疗效果

3 讨论

结合临床症状、剖检变化、细菌分离、荧光PCR鉴定及流行病学调查结果，笔者判定该猪场猪群为轮状病毒感染。轮状病毒是多种幼龄动物的一种急性肠道传染病，以腹泻和脱水为特征，也是引起仔猪腹泻的主要原因之一，病死率可达50%～100%[10]。轮状病毒引起腹泻属于湿热泄泻，本研究从中兽医角度试制防治猪腹泻病的中药配方代替西药，提升猪腹泻的治疗效果，减少抗生素类药物的使用及残留。双葛止泻口服液由金银花、葛根、黄芩、黄连、炙甘草和白芍组成，具有清热解毒、疏散风热、止泻生津之功效[8]。本次治疗试验显示，双葛止泻口服液低剂量组的治愈率为33.3%、中剂量组的治愈率为70%、高剂量组的治愈率为73.3%，能够有效治疗猪群轮状病毒感染。王宏艳等[11]采用葛根、黄连、黄芩、乌梅、车前草等中药组方治疗仔猪腹泻，有效率达94.44%，高于本试验20个百分点；杨久春等[12]采用白术、党参、木香、茯苓等中药配方治疗仔猪腹泻有效率为68%，略低于本试验的双葛口服液中高剂量组；凌霄等[13]研究表明，双葛止泻口服液治疗猪湿热泄泻的机理是通过抗炎和抑制病原增殖减轻感染哺乳期小型猪腹泻，其抗炎作用与减少炎症因子TNF-α和IL-6有关。

近年来，随着集约化养猪的发展，猪病的发生越来越多、越来越复杂，大幅制约了养猪业的可持续发展。而猪腹泻的发病因素多，继发、混合感染情况复杂，涉及猪场环境卫生控制、生物安全管理措施不到位等多方面因素，给控制该病传播带来很大的难度。加之生产上又盲目用药、滥用药造成耐药性、抗药性细菌病、病毒病的增多，终将导致不仅疫病难治、畜产品中药物残留不可控，且直接威胁着畜产品安全。当前，国内许多学者对于中药治疗腹泻做了大量深入研究，研制出了许多有效的药物和方剂，徐劲松等[14]报道使用加味葛根芩连汤治疗湿热型急性腹泻，结果显示加味葛根芩连汤组总有效率91.2%（62/68），显著高于诺氟沙星胶囊对照组80.3%（53/66）。

双葛止泻口服液以0.34 mL/（kg·bw）、0.68 mL/（kg·bw）的剂量灌服使用腹泻仔猪，其治愈率分别为70.0%和73.3%，有效率分别为80.0%和83.3%，说明双葛止泻口服液中、高剂量组可有效治疗仔猪湿热泄泻，可以在养猪生产中推广应用来治疗湿热泄泻引起的猪腹泻。