芪天扶正胶囊的薄层鉴别*

2021-02-15郭慧辉李惠民惠选柱李玉琴冯锁民

化工科技 2021年6期

曹斌，郭慧辉，张拓，李惠民，惠选柱，李玉琴，冯锁民**

(1.陕西医药控股集团山海丹药业股份有限公司，陕西西安 710075；2.西安医学院药学院，陕西西安 710021；3.商洛职业技术学院，陕西商州 726000)

芪天扶正胶囊由黄芪、天冬、胡芦巴、山茱萸、陈皮、女贞子等药物组成，具有益气滋阴，补肾固本的功效。临床上与规范方案的抗肿瘤化学药物配合，用于非小细胞肺癌属气阴两虚，症见神乏疲力，少气懒言，口干咽燥，自汗盗汗，面色晄白，或咳嗽咯痰，或纳呆，或痰中带血等症状的辅助治疗；同时也可减轻由化疗药物引起的免疫功能低下，以及白细胞减少及恶心、呕吐、脱发等不良反应，提高肿瘤化疗效果，改善患者的生活质量[1-2]。由于该品种质量标准执行的是原国家药品试行标准[3](YBZ13362006)，按照国家药典委员会的要求，必须限期进行该品种质量标准的转正，为此，重点对处方中胡芦巴、山茱萸、陈皮等药材，进行了薄层色谱鉴别方法的研究，为该产品质量标准转正提供基础研究数据和实验依据。

1 实验部分

1.1 原料、试剂与仪器

胡芦巴对照药材：批号121609-201001，胡芦巴碱对照品：批号110883-201604，含量78.4%计，山茱萸对照药材：批号121495-200702，熊果酸对照品：批号110742-201823，陈皮对照药材：批号120969-200507，橙皮苷对照品：批号110721-200613,均购于中国食品药品检定研究院；芪天扶正胶囊：规格0.3 g/粒，批号为20061001、20061002、20061003，陕西医药控股集团山海丹药业股份有限公司生产。

石油醚、乙酸乙酯、甲醇、正丁醇、三氯化铁、碘化铋钾：均为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；薄层硅胶G：化学纯，青岛海洋化工有限公司；水:高纯水。

电子天平：FA1004B，上海越平科学仪器有限公司；旋转蒸发器：SENCO，上海申生科技有限公司；电热恒温水浴锅：HSYZ-SP，北京市永光明医疗仪器厂；数控超声波清洗仪：AS10200AD,天津奥特赛恩斯仪器有限公司；三用紫外分析仪：ZF-7：上海嘉鹏科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 芪天扶正胶囊中胡芦巴药材的薄层鉴别

(1)胡芦巴碱对照品溶液的制备：精密称取胡芦巴碱对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：取芪天扶正胶囊内容物5 g，研细，加石油醚(30～60 ℃)30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液弃去，药渣挥干，再加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。

(3)对照药材溶液的制备：取胡芦巴对照药材1.0 g，按1.2.1(2)供试品溶液的制备方法，最后加甲醇2 mL溶解。

(4)阴性供试品溶液的制备：按芪天扶正胶囊制备方法，去掉处方中胡芦巴药材，制备缺葫芦巴药材的胶囊，按1.2.1(2)方法制备缺葫芦巴的阴性样品溶液。

(5)薄层方法：按照《中国药典》2020版四部0502薄层色谱法实验[4]，吸取供试品、阴性供试品溶液和胡芦巴对照药材溶液各20 μL，胡芦巴碱对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-乙酸乙酯体积比(8∶3∶1)为展开剂，展开，取出，热风吹干，于105 ℃烘6 min，取出立即喷以碘化铋钾试液-三氯化铁试液体积比(2∶1)配制的显色剂，在日光下检视。

1.2.2 芪天扶正胶囊中山茱萸的薄层鉴别

(1)对照品溶液的制备：称取熊果酸对照品，加无水乙醇制成质量浓度1 mg/1 mL的熊果酸对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：取芪天扶正胶囊内容物5 g，加乙酸乙酯30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL无水乙醇溶解，作为供试品溶液。

(3)对照药材溶液的制备：取山茱萸对照药材1 g，按1.2.2(2)供试品溶液的制备方法，最后加无水乙醇2 mL溶解。

阴性供试品溶液的制备：按芪天扶正胶囊处方，去掉山茱萸制成胶囊，按1.2.2(2)方法制成不含山茱萸药材的阴性样品溶液。

(4)显色剂的配制：取浓硫酸5 mL,加无水乙醇稀释至100 mL,即得。

(5)薄层方法：按照《中国药典》2020版四部0502薄层色谱法实验[4]，吸取供试品、阴性供试品溶液和山茱萸对照药材溶液各2 μL，熊果酸对照品溶液1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇体积比(20∶5∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1.2.2(4)配制的显色剂，于105 ℃烘6 min，置日光下检视。

1.2.3 芪天扶正胶囊中陈皮的薄层鉴别

(1)供试品溶液的制备：取芪天扶正胶囊内容物1 g，加甲醇20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

(2)对照药材溶液的制备：取陈皮对照药材1 g，按1.2.3(1)供试品溶液的制备方法，最后加甲醇1 mL溶解。

(3)对照品溶液的制备：称取橙皮苷对照品5 mg，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。

(4)阴性供试品液的制备：取按芪天扶正胶囊处方制成不含陈皮药材的阴性对照药品1 g，处理方法同1.2.3(1)。

(5)显色剂的配置：称取三氯化铝1 g,加乙醇稀释至100 mL,即得。

(6)薄层方法：按照《中国药典》2020版四部0502薄层色谱法实验[4]，吸取供试品和对照品溶液各3 μL，分别点于同一用0.5%(g/mL)氢氧化钠液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水体积比(100∶17∶13)为展开剂，展开约3 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水体积比(20∶10∶1∶1)的上层液为展开剂，展开约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。

2 结果与讨论

2.1 结果

2.1.1 芪天扶正胶囊中胡芦巴薄层结果

芪天扶正胶囊3批样品(批号20061001，20061002，20061003)中胡芦巴的薄层色谱结果见图1～图3。从图中可以看出，3批样品的供试品色谱中，在与对照药材和胡芦巴碱对照品色谱相应的位置上，均有相同颜色的棕红色斑点出现，而阴性供试品在此位置无斑点出现，表明该色谱条件分离度良好，阴性供试品无干扰，3批胶囊中均含有胡芦巴药材。另外，3批样品的薄层色谱图基本一致，也显示该薄层色谱条件和方法，重现性良好。

1-胡芦巴碱对照品液；2-胡芦巴对照药材液；3-阴性供试品液；4-供试品液(批号20061001)

1-胡芦巴碱对照品液；2-胡芦巴对照药材液；3-阴性供试品液；4-供试品液(批号20061002)

1-胡芦巴碱对照品液；2-胡芦巴对照药材液；3-阴性供试品液；4-供试品液(批号20061003)

2.1.2 芪天扶正胶囊中山茱萸薄层结果

芪天扶正胶囊3批样品(批号20061001，20061002，20061003)中山茱萸的薄层色谱结果见图4～图6。从图中可以看出，3批样品的供试品色谱中，在与山茱萸对照药材和熊果酸对照品色谱相应的位置上，均有相同颜色的紫红色斑点出现，而阴性供试品在此位置无斑点出现，表明该色谱条件分离度良好，阴性供试品无干扰，3批胶囊中均含有山茱萸药材。另外，3批样品的薄层色谱图基本一致，也显示该薄层色谱条件和方法，重现性比较好。

1-熊果酸对照品液；2-山茱萸对照药材液；3,4-供试品液(批号20061001)；5-阴性供试品液

1-熊果酸对照品液；2-山茱萸对照药材液；3,4-供试品液(批号20061002)；5-阴性供试品液

1-熊果酸对照品液；2,3-供试品液(批号20061003)；4-山茱萸对照药材液；5-阴性供试品液

2.1.3 芪天扶正胶囊中陈皮薄层结果

芪天扶正胶囊3批样品(批号20061001，20061002，20061003)中陈皮的薄层色谱结果见图7～图9。由图可知，3批样品的供试品色谱中，在与陈皮对照药材和橙皮苷对照品色谱相应的位置上，均有相同颜色的荧光斑点出现，而阴性供试品在该位置荧光斑点颜色差异较大，表明3批胶囊中均含有陈皮药材。该色谱条件分离度良好，阴性供试品干扰较小，另外，3批样品的薄层色谱图基本一致，也表明该薄层色谱条件和方法，重现性比较好。

1-陈皮对照药材液；2-供试品液(批号20061001)；3-橙皮苷对照品液；4-阴性供试品液

1-陈皮对照药材液；2-供试品液(批号20061002)；3-橙皮苷对照品液；4-阴性供试品液

1-陈皮对照药材液；2-供试品液(批号20061003)；3-橙皮苷对照品液；4-阴性供试品液

2.2 讨论

2.2.1 芪天扶正胶囊中胡芦巴供试品溶液制备方法及薄层显色剂的筛选

为了获得理想的薄层效果，参照《陕西省中药饮片标准》第一册[5]和2020版中国药典一部[6]胡芦巴药材薄层鉴别中供试品的制备方法，对石油醚脱脂和甲醇提取，分别比较了超声法和回流提取法2种方法的薄层效果，结果表明回流法制备的供试品液薄层色谱图中，薄层斑点圆整、清晰、分离度好，因此，芪天扶正胶囊中胡芦巴供试品溶液的制备采用回流提取法。原因可能是超声法对单味药材简单可行，但对复方制剂因温度低，提取效果差，不如回流法。鉴定的标准物质除胡芦巴对照药材外，还选用其主要成分胡芦巴碱做对照品[7-11]，同时，对薄层显色剂进行了筛选，采用中国药典[6]中稀碘化铋钾试液-三氯化铁试液显色后，薄层色谱底色浅，有拖尾，因此，最终选择碘化铋钾试液-三氯化铁试液体积比(2∶1)作为显色剂。

2.2.2 芪天扶正胶囊中山茱萸供试品溶液制备方法及展开剂的筛选

熊果酸是山茱萸的主要成分和中国药典控制指标，对芪天扶正胶囊中山茱萸的薄层鉴别，实验采用山茱萸对照药材和熊果酸对照品作为比对标准[12-15]。药典中[6]供试品的制备方法是用乙酸乙酯超声提取，实验改为回流提取后供试品溶液在薄层色谱色谱图中，斑点集中、圆整、清晰、分离度好。同时薄层展开的溶剂系统采用环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇体积比(20∶5∶4∶2)，代替2020版中国药典[6]使用的甲苯-乙酸乙酯-甲酸体积比(20∶4∶0.5)，薄层效果更好。

2.2.3 芪天扶正胶囊中陈皮供试品处理方法的筛选

橙皮苷是药材陈皮的主要有效成分，也是质量控制的指标性成分[16-19]。为了鉴别芪天扶正胶囊中主要药材陈皮，实验选用陈皮对照药材和橙皮苷作为对照，并对2020版中国药典陈皮药材[6]供试品溶液的甲醇超声提取方法，与回流提取方法处理的供试品，进行薄层效果的比较，结果甲醇回流提取法制备的供试品溶液，薄层斑点较多，斑点圆整、清晰、分离度好，因此，芪天扶正胶囊中陈皮供试品溶液的制备方法采用甲醇回流提取法。