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外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与HE4、HO-1的相关性研究

2021-02-15蒋健刚杜晓马兰景良晏程远沈昕

中国现代医生 2021年36期
关键词:外泌体心肌细胞分级

蒋健刚 杜晓马 兰景良 晏程远 沈昕

[摘要] 目的 探討外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与人附睾分泌蛋白4(HE4)、血红素加氧酶-1(HO-1)的相关性研究。 方法 选取2018年5月至2020年8月收治的冠心病心力衰竭患者64例为病例组,并随机选取接受健康体检的健康者64名作为对照组,对其进行彩色多普勒超声检查,以及血清HE4、HO-1及miRNA-155等指标的检测,分析外周血miRNA-155在冠心病心力衰竭患者中的表达及与HE4、HO-1的相关性。结果 病例组HE4、HO-1及miRNA-155的水平均高于对照组(P<0.05),病例组LVEF低于对照组(P<0.05);病例组中心功能分级Ⅳ级患者的HE4、HO-1及miRNA-155水平均明显高于心功能分级Ⅲ级、Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅲ级、Ⅱ级患者(P<0.05),病例组中心功能分级Ⅲ级患者的HE4、HO-1及miRNA-155水平均高于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05),LVEF低于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05);LVEF与血清HE4、HO-1及miRNA-155水平呈负相关(P<0.05);血清HE4和HO-1水平与外周血miRNA-155水平呈正相关(P<0.05)。 结论 冠心病心力衰竭患者存在HE4、HO-1及miRNA-155水平明显升高情况,且其上升幅度随心功能分级升高而升高,HE4、HO-1及miRNA-155升高幅度与冠心病心力衰竭患者心功能损伤严重程度存在相关性。

[关键词] 人附睾分泌蛋白4;血红素加氧酶-1;miRNA-155;冠心病;心力衰竭

[中图分类号] R541.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701(2021)36-0021-04

Research on the expression of miRNA-155 in peripheral blood in patients with coronary heart disease and cardiac failure and its correlation with HE4 and HO-1

JIANG Jian′gang   DU Xiaoma   LAN Jingliang   YAN Chengyuan   SHEN Xin

Department of Cardiology, Zhejiang Chinese Medical University Affiliated Jinhua Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jinhua   321000, China

[Abstract] Objective To investigate the expression of miRNA-155 in peripheral blood in patients with coronary heart disease and cardiac failure and its correlation with human epididymal secretory protein 4 (HE4) and heme oxygenase-1 (HO-1). Methods Patients with coronary heart disease and cardiac failure admitted from May 2018 to August 2020 were selected as the case group (n=64), and healthy people undergoing physical examination were randomly selected as the control group (n=64). The patients were examined by color Doppler ultrasound; and serum HE4, HO-1 and miRNA-155 were detected. The expression of miRNA-155 in peripheral blood and its correlation with HE4, HO-1 in patients with coronary heart disease and cardiac failure were analyzed. Results The levels of HE4, HO-1 and miRNA-155 in the case group were all higher than those in the control group (P<0.05), while LVEF in the case group was lower than that in the control group(P<0.05). The levels of HE4, HO-1 and miRNA-155 in patients with central functional classification Ⅳ were all significantly higher than those with cardiac functional classification III and II, and LVEF was lower than those with cardiac functional classification Ⅲ and Ⅱ(all P<0.05). The levels of HE4, HO-1 and miRNA-155 in patients with grade Ⅲ were all higher than those in patients with grade Ⅱ (P<0.05), LVEF was negatively correlated with serum HE4, HO-1 and miRNA-155 levels (all P<0.05). LVEF was lower than that of patients with cardiac function grade Ⅱ(P<0.05). LVEF was negatively correlated with serum HE4, HO-1 and miRNA-155 levels (P<0.05). The levels of serum HE4 and HO-1 were positively correlated with the level of miRNA-155 in peripheral blood (P<0.05). Conclusion The levels of HE4, HO-1 and miRNA-155 are obviously increased in patients with coronary heart disease and cardiac failure, and their rising range boosts with the increase of functional classification. The rising range of HE4, HO-1 and miRNA-155 is correlated with the severity of cardiac function injury in patients with coronary heart disease and cardiac failure.

[Key words] Human epididymis secretory protein 4; Heme oxygenase-1; MiRNA-155; Coronary heart disease; Cardiac failure

心力衰竭是各种器质性心脏病发展为终末期的临床症状,有较高的致残率和致死率,对患者身体健康构成严重的威胁,冠心病是导致心力衰竭的主要因素之一[1]。血清微小RNA155(miRNA-155)可以促进心肌细胞的纤维化,损伤心肌细胞的收缩功能,从而导致慢性心力衰竭的发生[2]。人附睾分泌蛋白4(HE4)与恶性肿瘤存在密切联系,其主要存在于神经组织及胚胎上皮细胞中[3]。以往研究证实[4],在心血管疾病患者中同样存在HE4水平明显升高的情况。血红素加氧酶-1(HO-1)对于机体氧化应激反应可以起到诱导作用,其损伤心肌细胞中的线粒体,对心力衰竭的发生发展有促进作用[5]。目前临床关于miRNA-155与HE4、HO-1之间关系的研究较少,且无统一定论[6]。本研究通过纳入冠心病心力衰竭患者及健康人群,对其相关指标进行检测,探讨miRNA-155与HE4、HO-1之间的相关性,以及与患者心肌损伤程度之间的关系,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年5月至2020年8月收治的冠心病心力衰竭患者64例为病例组,并随机选取接受健康体检的健康者64名作为对照组,病例组男36例,女28例;年龄53~72岁,平均(63.5±3.2)岁;心功能分级:Ⅱ级15例,Ⅲ级32例,Ⅳ级17例;体质量指数(BMI):21.6~25.7 kg/m2,平均(23.1±1.8)kg/m2。对照组男33名,女31名;年龄51~72岁,平均(63.8±3.1)岁;BMI:21.4~25.2 kg/m2,平均(23.5±1.9)kg/m2。两组在性别、年龄、心功能分级及BMI方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。病例组纳入标准:①年龄18~80岁者;②纽约心功能分级(NYHA)在Ⅱ级及以上者;③经超声检查显示左室射血分数(LVEF)在50%及以下者。排除标准:①伴有免提功能缺陷者;②伴有恶性肿瘤者;③伴有急慢性感染情况者;④伴有严重的脑血管疾病者;⑤存在精神障碍或沟通障碍者;⑥肝肾功能不全者。所有入选研究者均知情同意,在签署知情同意书后自愿参加。本研究已获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2.1 心脏彩色多普勒检查  对两组入组人员均进行彩色多普勒超声检查,采用彩色多普勒超声诊断仪(PHILIPSIU 22)进行,由经验丰富的医师为患者进行常规心脏超声检查,选用2.5 MHz频率的超声探头,经胸选胸骨旁左心室长轴切面M型对左心房前后径、左心室收缩末期内径、左心室舒张末期内径、右心室舒张末期内径等参数进行测定,选用Simpson法测量LVEF值,同一患者每个测点分别测量3次,取3次的平均值为最终结果。

1.2.2  相关血清指标检测  两组患者均进行相关血清学指标检测,患者入院后次日清晨空腹抽采取肘正中静脉血,并进行离心处理,离心时间设置为10 min,离心机转速设置为3000 r/min,分离血清并保存于-70℃冰箱中待检。采用酶联免疫吸附法对HE4和HO-1水平进行检测。外周血miRNA-155水平的检测,取提前制备好的血清样本,再次对其进行离心处理,离心时间为10 min,将转速设置为10 000 r/min,分离完成后加入裂解液,采用无酶RNA冲洗液进行冲洗,温度条件4℃,裂解后再次进行离心处理,离心条件与上文一致,分离完成后得到RNA。在获得RNA后加入反转录酶,进行60 min的孵育,温度为37℃,逆转录生成cDNA。对cDNA进行PCR扩增,PCR反应条件:温度设置为94℃,时间为2 min,温度为93℃,时间为2 min,温度设置为55℃,时间为2 min,以该反应条件进行40个周期循环,采用酶标仪对OD值进行检测。

1.3 观察指标

对两组的一般临床特点进行分析,同时比较两组的血清人附睾分泌蛋白4和血红素加氧酶-1的水平,以及外周血miRNA-155表达水平的差异。

1.4 统计学方法

所得数据均用SPSS 23.0统计学软件进行分析,其中计数资料以[n(%)]表示,采用χ2检验,计量资料采用(x±s)表示,组间比较采用t或F检验,采用Pearson检验对冠心病心力衰竭患者外周血miRNA-155表达水平与与血清HE4、HO-1水平、LVEF与血清HE4、HO-1及miRNA-155进行相关性分析,以P<0.05為差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组HE4、HO-1、LVEF以及miRNA-155水平分析

病例组HE4、HO-1及miRNA-155均高于对照组(P<0.05),病例组LVEF低于对照组(P<0.05)。见表1。

2.2 不同心功能分级患者HO-1、LVEF、HE4以及miRNA-155水平分析

病例组心功能分级Ⅳ级患者HE4、HO-1及miRNA-155均高于心功能分级Ⅲ级和Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅲ级和Ⅱ级患者(P<0.05);病例组中患者心功能分级Ⅲ级患者HE4、HO-1及miRNA-155均高于心功能分级Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05)。见表2。

2.3 LVEF与血清HE4、HO-1及miRNA-155相关性分析

LVEF与血清HE4(r=-0.613,P=0.027)、HO-1(r= -0.617,P=0.034)、miRNA-155(r=-0.714,P=0.019)呈显著负相关(P<0.05);miRNA-155与血清HE4(r=0.314,P=0.046)、HO-1(r=0.347,P=0.041)呈正相关(P<0.05)。

3 讨论

受我国人口结构的影响,老年人数量激增,进而导致多种老年病发病率明显升高。冠心病心力衰竭属于临床常见疾病,具有较高的死亡率[1,7]。目前临床对于冠心病心力衰竭的诊断缺乏准确的血清学评估指标,导致临床在对冠心病心力衰竭诊断时不够及时,通过对相关血清学指标进行检测,更有利于临床医师对患者疾病进展以及预后情况进行评估,对于诊疗方案的制定具有非常重要的意义[8]。

目前临床常用的评估冠心病心力衰竭的指标包含脑钠肽前体性物质、脑钠肽等,但是已有多项研究证实,对患者脑钠肽前体性物质、脑钠肽等指标进行检测对于患者预后评估价值并不高,无法真正体现患者疾病进展情况以及预后情况[9]。已有研究指出,采用脑钠肽前体和脑钠肽在心力衰竭转归预测中的灵敏度<45%[10]。因此,临床上需要更加准确的预测指标来评估患者的预后。miRNA-155能够调控上皮细胞的代谢,对于机体氧化应激反应以及炎症反应均可产生影响,属于非编码RNA家族成员,在心血管疾病发生发展中发挥着重要作用[11-12]。已有研究指出,机体出现miRNA-155水平明显升高时,会促进线粒体功能障碍的发生,影响线粒体ATP能量的利用,导致心肌细胞出现缺氧、缺血情况,加重心肌细胞损伤[13]。HE4属于临床常用的评估指标,主要用于评估消化系统恶性肿瘤以及生殖系统恶性肿瘤。近年来随着临床研究的不断进步,越来越多的研究指出,HE4与机体基质金属蛋白酶之间存在密切联系,HE4水平上升可能可以激活部分基质金属蛋白酶,促进心肌间质细胞代谢[14-15]。HE4对心肌细胞骨架蛋白合成也会产生影响,阻碍心肌细胞的自我修复,降低心脏泵血功能,通过多种作用机制促进心肌细胞损伤的发生[16]。HO-1可增加氧化自由基对心肌细胞的损伤,影响机体氧化还原反应的正常进行,对心血管系统疾病的发生有促进作用[17]。虽然目前临床关于HO-1与心力衰竭之间关系的研究相对较少,但已有研究指出,在心力衰竭发病过程中存在HO-1水平明显升高的情况[18-19]。

本研究对冠心病心力衰竭患者及健康体检者的HE4、HO-1及miRNA-155水平进行检测。研究结果显示,与健康体检者比较,冠心病心力衰竭患者存在HE4、HO-1及miRNA-155水平明显升高的情况。HE4、HO-1及miRNA-155水平对冠心病心力衰竭的发生发展可能有显著的影响。究其原因,可能miRNA-155表达明显升高,对于自身趋化因子的聚集程度起到促进作用,在心肌细胞中出现大量变形蛋白沉积,对于心肌细胞变性坏死起到促進作用有关。HE4可激活心肌细胞内的NF-ΚB信号通路,而HE4水平明显升高可导致心肌细胞对于ATP的摄取出现障碍,促进一氧化氮的形成,而高浓度的一氧化氮会促进氧化应激反应,加重心肌细胞损伤。而HO-1含量增高提示心力衰竭患者在病理生理条件下,内源性保护体系受某些理化因子的刺激,其活性有所增强,表达明显升高,是机体代偿机制之一。

本研究对不同心功能分级患者相关指标进行了分析。结果显示,冠心病心力衰竭患者心功能分级Ⅳ级患者HE4、HO-1以及miRNA-155水平均高于心功能分级Ⅲ级和Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅲ级和Ⅱ级患者(均P<0.05),心功能分级Ⅲ级患者HE4、HO-1以及miRNA-155水平均高于心功能分级Ⅱ级患者,LVEF低于心功能分级Ⅱ级患者(P<0.05),由此可以看出,HE4、HO-1以及miRNA-155水平与患者心功能分级存在一定联系,随心功能分级增加而增加,推测HE4、HO-1以及miRNA-155可能会导致心肌细胞损伤的发生。可能是因为随着病情的逐渐加重,机体炎症以及氧化应激反应等病理改变加重,对于多种因子的释放、合成增多,使HE4、HO-1以及miRNA-155水平升高[20]。在对各因子之间相关性进行分析时发现,LVEF与血清HE4、HO-1以及miRNA-155呈负相关(P<0.05),血清HE4和HO-1水平与miRNA-155水平呈正相关(P<0.05),由此可以看出,血清HE4、HO-1以及miRNA-155水平与冠心病心力衰竭患者心功能损伤存在密切联系,而HE4和HO-1与miRNA-155之间的相互影响、作用的机制并不明确,仅可证实HE4和HO-1与miRNA-155之间呈正相关性。但是本研究相对纳入的样本量较少,在对其进行分析时未对可能造成研究结果差异的因素进行排除,导致本次研究结果的参考性降低,今后会纳入更多研究样本,对各因子之间的相关性以及相互作用机制进行进行一步分析,探讨各因子之间的关系。

综上所述,冠心病心力衰竭患者存在HE4、HO-1及miRNA-155水平明显升高情况,且其上升幅度随心功能分级升高而升高,HE4、HO-1及miRNA-155升高幅度与冠心病心力衰竭患者心功能损伤成存在相关性。

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(收稿日期:2021-05-17)

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