ECLIA与ELISA用于乙肝病毒血清学检验效能对比分析

王丽萍

乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是指患者受乙肝病毒(HBV)入侵，致使肝脏发生病变及其他器官受损的一种临床常见慢性传染性疾病，具有发病缓慢、高传染率及传播途径广泛等特征[1]。乙肝主要是通过精液或血液等途径传播，患者若无法得到及时有效的治疗，则较易并发肝癌、肝衰竭及肝硬化等，严重者会直接威胁到生命安全[2]。大多数乙肝患者发病症状不明显，易出现误诊与漏诊现象。因此，给予患者快速准确的诊断具有十分重要的意义。目前，临床对乙肝患者进行诊断及对预后进行评估的主要依据是乙肝病毒DNA与乙肝病毒血清学检测结果。但由于乙肝病毒DNA检测对实验室条件的要求较高，因此临床上大多是给予患者血清学乙肝五项检测方式[3]。酶联免疫吸附试验(ELISA)凭借其简便的操作及低廉的成本已成为目前临床应用较为广泛的一种检测方式，也是乙肝血清学标志物主要检测方式[4]。随着近年来生物医学技术的飞速发展，化学发光法(ECLIA)以其快速的检测速度、良好的精密度、高敏感性、较宽的线性范围及广泛的应用范围等优势，被逐渐引入临床诊断治疗中。由于ECLIA与ELISA各异的检测特性与原理，会导致其在乙肝血清学标志物的检测结果不同[5]。目前，临床医学界对以上两种检测方式的诊断价值仍无统一的定论。基于此，本资料主要探讨对乙肝患者临床治疗中分别选用ECLIA与ELISA进行检测的效果及价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年12月—2020年12月于本院门诊部就诊的乙肝患者66例作为研究对象。A组33例，其中：男15例，女18例；年龄：20～57(33.7±3.7)岁。B组33例，其中：男14例，女19例；年龄：19～58(33.2±2.6)岁。2组患者性别、年龄等基线统计学资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：(1)符合《病毒性肝炎防治方案》[6]中乙型肝炎诊断标准；(2)均属于门诊病例患者；(3)已签署相关知情同意书。排除标准：(1)伴有恶性肿瘤者；(2)存在重要脏器(心、肾)等严重功能不全者；(3)存在神经系统疾病、认知障碍、精神性疾病，治疗依从性差者。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 采取患者晨时空腹条件下的静脉血10 mL，以3 000 r/min的转速离心15 min后取上层血清，置于-20 ℃的冰箱内待检。按先后顺序进行ELISA与ECLIA检验。

1.3.2 ELISA检测 采用伯乐iMark型酶标仪、伯乐1575型洗板机进行检测，试剂由上海荣盛生物药业有限公司提供，对血清样本实施双抗体夹心法检测HBsAg。全程操作严格按试剂说明书进行，将微孔反应条与试剂盒放在室温下平衡30 min，然后将待检血清及阴阳性对照加入微孔反应条中，进行封片后将其置于37 ℃的水浴中孵育60 min后取出，再加入酶结合物，实施封板后将其置于37 ℃的水浴中孵育30 min后取出，将微孔反应条中的液体弃去，并进行反复5次洗涤后，加入显色剂再孵育30 min后加入终止液，用酶标仪读数，若血清OD值≥临界值，即为阳性。另HBsAb采用双抗原夹心法，若血清OD值≥临界值，即为阳性。HBeAg采用双抗体夹心法，若血清OD值≥临界值，即为阳性。HBeAb采用中和竞争法，若血清OD值≥临界值，即为阴性。HBcAb采用竞争抑制法，若血清OD值≥临界值，即为阴性。所有操作步骤严格按说明书进行。

1.3.3 ECLIA检验 采用四川迈克生物股份有限公司的i3000型全自动化学发光免疫分析仪进行检测，试剂为其配套试剂。采用磁微粒化学发光免疫分析法，利用双抗体夹心法原理检测HBsAg，通过免疫分析两步法实现对样本的检测。第一步，将样本和包被抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的免疫磁微粒混合，样本中的HBsAg与抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体结合，形成抗原—抗体复合物；第二步，洗涤后加入吖啶酯标记的抗乙型肝炎病毒表面抗原多克隆抗体，形成抗体—抗原—抗体免疫复合物；再次洗涤，加入底物液发生化学发光反应，测量相对发光值，相对发光值与样本中HBsAg的含量成正比关系。另HBsAb采用双抗原夹心法，HBeAg采用双抗体夹心法，HBeAb采用中和竞争法，HBcAb采用间接法。

1.3.4 重复性检验 将22份低、中、高浓度的乙肝表面抗原(HBsAg)阳性血清进行冷冻保存处理，每天测量1次，对其中的11份进行批间重复性计算，另11份则进行批内重复性计算。

1.4 观察指标 (1)观察计算2组检测准确度。(2)观察2组乙肝5项阳性率的检测结果。阳性判定标准：若检测值大于等于参考上限值则判定为阳性。各指标参考上限值标准如下：乙肝表面抗原(HBsAg)为0.05 IU/mL；乙肝表面抗体(HBsAb)为10.0 mIU/mL；乙肝e抗原(HBeAg)为0.1 IU/mL；乙肝e抗体(HBeAb)为0.2 IU/mL；乙肝核心抗体(HBcAb)为0.6 IU/mL[7]。(3)观察对比2组在低、中、高三种浓度的HBsAg批内与批间的检测重复率。

2 结果

2.1 2种检测方法检测准确度比较 A组检测乙肝5项的准确度为93.93%，高于B组的75.75%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2种检测方法的检测准确度比较 (例)

2.2 2种检测方法检测乙肝5项的阳性率比较 A组检测HBsAg、HBeAg及HBeAb的阳性率高于B组(P<0.05)；2组检测HBsAb与HBcAb的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 2种检测方法检测乙肝5项的阳性率比较

2.3 2组检测重复率比较 2组对高浓度HBsAg含量批内与批间的重复率比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组对低、中浓度HBsAg含量批内与批间检测重复率高于B组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 2组检测重复率比较

3 讨论

乙肝是一种强传染性疾病，主要是由于患者受乙肝病毒的感染所致。乙肝病毒长时间潜伏于人体，当其被激活时，就会引发乙型肝炎[8-9]。乙肝患者发病期并无明显的临床症状，因此检测过程中患者误诊与漏诊率均较高。乙肝患者随着病情的加重会并发肝硬化或肝癌，不仅对其身心健康造成严重影响，还会威胁到其生命安全[10]。因此，给予乙肝患者早期准确的诊断对其临床治疗与预后均具有非常重要的意义。乙肝的防治工作主要是遵循以预防为主，预防与治疗相互结合的原则。目前，检测乙肝病毒血清的主要方法为ECLIA与ELISA检测法[11]。其中ELISA检测法具有操作简便、价格低廉等优势，可用于检测大批量标本，但此种方法仅可实施定性分析，且操作过程易受其他因素影响，进而对检验结果造成影响[12]。

ELISA检验法又名固相酶联免疫法，是使用酶对抗原(抗体)进行标记的反洗技术[13]。酶具有高效生物催化作用，可促使抗原(抗体)于几分钟后被识别出来。该种检测方式技术可靠，且较易自动化，是目前传统的HBsAg筛查方式[14]。但有研究[15]表明，ELISA法使用的是间接法测定，其不能实现定量分析，加之操作过程较易受到孵育时间、洗板等众多因素的影响，检测结果通常会出现一定误差；且难以对乙肝病毒感染进行动态观察；此外，该种检验方式因微孔板间的间隔距离较近，加之操作时间相对较长，易受各种因素影响而受污染，从而影响检验结果；同时，其对高浓度血清样本进行检测时易产生假阴性，检测准确率欠佳。本资料结果中，ECLIA检测方式的检测准确率及对HBsAg、HBeAg及HBeAb的阳性检出率均高于ELISA检验法，说明ECLIA检测方式在乙肝血清的检测上准确率更优，此与上述研究结果相近。分析原因可能是ECLIA是目前最科学且先进的一种自动化标记免疫测定系统，其结合了电子发光技术、纳米微粒子技术、生物素一亲和素系统、抗原一抗体免疫反应及电磁场分离等，是高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应技术相互结合的产物。ECLIA检测原理是运用电化学发光剂联合过氧化物酶对抗体(抗原)进行标记，经抗原-抗体反应及磁珠分离，在电极表面进行特异性化学发光反应，通过此反应连接检测对象和酶，再使用免疫反应结合检测固相载体上的抗原与检测对象，最后加入底物以显色，凭借显现颜色的深浅对抗体情况进行判断，具有较高的灵敏性和特异性。ECLIA是通过光电信号进行判断，因此突变抗体对其影响度较少，且其还可快速做出反应，灵敏度高；其标记物的来源较为丰富，可对各种逃逸的变异株进行有效识别，能免除人为因素对检验结果产生的干扰，因此检测结果准确率更高。ECLIA的载体是顺应性微粒，经电磁铁控制，具有标准化与自动化的检测优势，能有效避免因人工操作所导致的检验误差，进而提升检验准确度；此外，检测系统能直接发光，无需借助外部光源，有利于提升系统的稳定性，进一步确保了检测的精准度；同时，来源于电磁铁的电磁能迅速消失，可对抗体和复合抗体分离进行游离抵抗，能有效降低游离抗体所致的假阴性，提升检测特异性；ECLIA具有较宽的线性范围，发光强度介于4～6个数量级，与测定物呈线性关系，能有效防止“钩状效应”，提升检测特异性和灵敏度。本资料结果中，ECLIA检测法在中、低浓度HBsAg含量批内与批间的重复率均显著高于ELISA检验法，而2种检验方式对高浓度的HBsAg含量批内与批间的重复率均较高，且组间相较无明显差异，说明ECLIA检验法能更有效的检出低浓度的HBsAg，其原因可能是ECLIA检测法具有较高的灵敏度，因此对低浓度标志物的检测率也更优，能更为科学且有效的控制传染源，具有更高的临床应用价值。

综上所述，乙肝病毒血清学检验中应用ECLIA与ELISA两种检测方式均能获得较好的检测价值，但ECLIA检验方法对乙肝阳性的检出更为准确，并能检出较低浓度的HBsAg，因此其在乙肝血清学的诊断中效果更加理想。