一例鸭传染性浆膜炎的病理学诊断

王虹虹，徐兴胜，徐雅雯，黄浩，宋昱庆，李明飞，李德龙,2*

（1.西南大学动物医学院，重庆荣昌402460；2.西南大学医学研究院免疫学研究中心）

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer，R.anatipestifer）引起的、严重危害养鸭业的传染性疾病之一[1]。鸭传染性浆膜炎的临床症状与菌株的毒力、感染途径、雏鸭自身的抵抗力等因素密切相关。该病潜伏期1～3d，根据病程的长短分为最急性、急性、亚急性和慢性。最急性病例通常见于鸭群发病的早期阶段，一般观察不到明显的异常症状，突然发生死亡。急性病例通常见于2～4周龄雏鸭，临床症状表现为精神萎靡、缩颈、嗜睡、不愿运动或共济失调、采食下降但饮水增加、离群独居等症状。随病程增加，病鸭出现转圈、倒退、消瘦，有的出现关节炎瘫痪。亚急性和慢性病例主要见于4～7周龄雏鸭，病程在7d以上，临床症状表现为精神沉郁、双腿无力、不愿走动、食欲不佳、饮水量增加，个别会出现头颈歪斜、转圈或倒退等神经症状，少数会出现呼吸困难，张口呼吸的现象，一般死亡率较低，但是会导致病鸭生长发育不良和停止生长，严重的会导致病鸭衰竭而亡[2～7]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料采集。2019年9月西南大学动物医学院动物医院收到重庆市荣昌区某肉鸭养殖户病鸭2只，取送检病鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及脑等组织，置于10%福尔马林溶液中固定。

1.1.2 主要试剂。10%中性福尔马林溶液、无水乙醇、二甲苯、苏木精染液、伊红染液、中性树胶等。

1.2 方法

1.2.1 尸体剖检。按常规方法进行剖检，打开胸腔、腹腔，暴露内腔器官，观察各脏器病理变化，并剪取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑等组织中部分眼观病变明显的部位置于10%中性福尔马林溶液中固定24 h。

1.2.2 病理组织学检查。各组织固定后按常规方法制作石蜡切片，主要步骤有：取材-固定-脱水-透明-浸蜡-包埋-切片-HE染色，光学显微镜下观察组织病理学变化。

1.2.3 细菌16S rRNA基因鉴定。将R.anatipestifer进行分离后，无菌吸取2 mL分离菌，应用试剂盒提取细菌总DNA。细菌16S rRNA基因通用引物F：5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’；R：5’-TACGG TTACCTTGTTACGACTT-3’，引物由武汉金开瑞生物工程有限公司合成[8]，PCR反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸45 s，共30个循环；72℃终延伸10 min。将PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳并使用胶回收试剂盒回收目的基因，送至武汉金开瑞生物工程有限公司测序，将测序结果与NCBI数据库中参考菌株16S rRNA进行BLAST同源性比对。

2 诊断结果

2.1 临床症状

病鸭站立不稳，走路摇晃，颤抖，叫声低沉不响亮。

2.2 剖检变化

心脏：心外膜有黄白色纤维素性伪膜，不易剥离，形似盔甲（图1A）；肝脏：体积肿大，颜色暗红，表面有一层黄白色纤维素性伪膜，易剥离（图1B）；气囊：气囊浑浊，有炒鸡蛋样黄白色物质；脾脏：黄白色，表面有数个暗红色瘀斑（图1C）；肺脏：颜色暗红，放入水中呈悬浮状态（图1D）；肾脏：颜色土黄色，体积肿大，肾表面间质明显（图1E）；小肠：肠壁菲薄，管腔内有黄色水样稀便，胰腺肿大，颜色轻微黄白色（图1F）；脑：脑膜充血。

图1 各组织剖检病变图

2.3 病理组织学变化

2.3.1 心脏。心脏表面覆盖有一层混有炎性细胞的纤维素性渗出物，炎性细胞主要是巨噬细胞和中性粒细胞，心肌纤维发生变性，部分出现坏死（图2）。

图2 心脏组织病理学检查

2.3.2 肝脏。肝脏表面覆盖有一层混有炎性细胞的纤维素性渗出物，炎性细胞主要是巨噬细胞和中性粒细胞，肝细胞发生脂肪变性（图3）。

图3 肝脏组织病理学检查

2.3.3 脾脏。脾小结结构松散，淋巴细胞减少，小结内有多量红细胞（图4）。

图4 脾脏组织病理学检查

2.3.4 肺脏。肺毛细血管有大量红细胞，部分区域有大量心力衰竭细胞（图5）。

图5 肺脏组织病理学检查

2.3.5 肾脏。肾小管上皮细胞发生变性，间质有大量红细胞（图6）。

图6 肾脏组织病理学检查

2.3.6 脑。脑血管内有大量红细胞及炎性细胞（图7）。

图7 脑组织病理学检查

2.4 细菌16S rRNA基因扩增及序列分析

提取分离菌株总DNA为模板，使用细菌16S rRNA通用引物对目的基因进行PCR扩增，成功扩增出一条1 450 bp条带，与预期条带大小一致。将目的条带送测序，与NCBI数据库收录的参考菌株16S rRNA基因序列进行同源性比对，结果显示，分离菌株与R.anatipestifer参考菌株相应序列的同源性最高。

3 讨论

鸭传染性浆膜炎主要是由于雏鸭抵抗力下降，鸭舍环境较差，管理人员管理不当等原因造成。目前，鸭传染性浆膜炎防治措施主要以疫苗及药物预防为主，养殖场可采取以下几点措施进行防治工作：加强饲养管理，为鸭群提供营养均衡的饲料进行喂养，杜绝饲喂发霉饲料、劣质饲料；注重舍内养殖环境，制定消毒计划，保持栏舍清洁干燥，通风情况良好，舍内粪便及时清理，对养殖场所进行定期消毒，减少疾病传播的可能；增强鸭群免疫力，减少意外惊吓、天气突然变化等因素带来的应激反应，提高机体抵抗力，注意夏季通风及冬季保暖，防止天气突然变化造成鸭群抵抗力下降，发生疾病[9]。