4 ℃低温处理的自体脂肪对颞额部填充效果的效果分析

郭荣 邵星星 王颖 罗莎 陈欢 张倩 肖曼娜 王芳 余墨声

随着年龄的增长，皮肤会渐渐衰老并因失去水分而逐渐松弛下垂，甚至引起面部的局部凹陷[1]。移植填充自体脂肪颗粒可重新拥有年轻的容颜，但在自体脂肪移植过程中，即使多次填充常常因为自体脂肪的成活率低下填充效果仍不理想。有效提高自体脂肪的成活率，减少并发症的发生是临床关注的重点。有研究表明，4 ℃低温处理的脂肪细胞在耐受缺氧性损伤以及在移植于裸鼠后成活率方面，都表现出良好的实验效果[2-4]。我们采用4 ℃低温处理的自体脂肪颗粒细胞移植填充额颞部，观察脂肪颗粒细胞的填充效果及美容者满意度。

对象与方法

一、对象

2018年1月～2019年4月，自愿接受额颞部自体脂肪颗粒移植填充的女性美容者100例，年龄21～32岁，均无明显重要脏器及精神疾病史，亦无明显颜面部凹陷填充术禁忌证。采用数字表法将美容者随机分为两组：常温组50例，将抽取的自体脂肪用常温生理盐水洗涤纯化并常温保存；低温组50例，将抽取的自体脂肪用4 ℃低温生理盐水洗涤纯化并低温保存。两组美容者在术后1、3、6 个月时面访。本研究经我院伦理委员会批准。

二、方法

1.自体脂肪颗粒获取及纯化：选取美容者大腿内侧或外侧处为吸脂区并根据拟采集脂肪量标记手术区域。对吸脂区进行消毒铺单，静脉全麻下常规行局部肿胀麻醉，待局部肿胀麻醉完善后再以20 ml注射器连接针管直径3.0 mm、侧孔直径1 mm且2开孔吸脂针对皮下脂肪进行人工手动吸取脂肪，脂肪吸取量根据美容者所需移植总量事先评估。常温组(常温组)将上述抽取的脂肪与等量的常温生理盐水混匀静置后在普通常温离心机以1 000 r/min 离心3分钟，去除上层的油脂和下层的液体部分，提取的中间层脂肪细胞再与等量的常温生理盐水混匀、离心，再次提取中间层的脂肪细胞，如此洗涤离心3次后，把收集的脂肪细胞分装于10 ml注射器并放置于常温生理盐水中保存备用。低温组获取脂肪细胞的方法和常温组类似，但洗涤用水为4 ℃生理盐水及用低温离心机(4 ℃)离心，收集的脂肪细胞放置于4 ℃生理盐水中低温保存备用。上述所有操作均在无菌环境中进行。

2.自体脂肪颗粒移植：对需脂肪移植注射部位标记消毒铺单，所有美容者均在静脉麻醉下在标记区域较为隐蔽部位(颞部发际线后面)用20G针头做穿刺孔，选择直径1.4 mm单孔钝头注脂针，自上往下、从浅往深采取多注射点、多角度、多层次、少量脂肪注射，在注射时边注射边退针边塑形，适当轻柔按摩注射部位，保证脂肪颗粒能够均匀分布，不引起局部明显隆起为标准，以免注射量过大导致面部肿胀变形[5]。术后24小时内间断冷敷填充区，以减轻局部水肿。

3.评价指标:(1) 医师对修复的满意度：非常满意：美容者的凹陷区得到矫正，脸部轮廓自然，填充区饱满柔和，且无不良反应；一般满意：凹陷区得到矫正，脸部轮廓和表情较为自然，不良反应较少；不满意：凹陷区改善不明显，且发生严重不良反应。总满意率=(非常满意+一般满意)/例数×100%[6]。(2)美容者对修复的满意度：移植后6个月，通过问诊的形式统计美容者对面部修复术的满意度。满意度评分为0～10分，10分为最满意，0分为最不满意，评分等于或超过6分为满意，评分低于6分为不满意。(3)其他评价指标：记录美容者额颞部红肿消退时间、并发症人数(包括感染、囊肿、硬结等)以及术后6个月累计2次填充人数。

三、统计学方法

结果

1.医师对修复的满意情况:自体脂肪填充后，随着时间的延长，医师对两组美容者不同时间总满意率逐渐降低。常温组1、3、6 个月分别为100%、94%和86%；低温组分别为100%、98%和94%。但总满意率两组间比较差异无统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 医师对修复的满意情况(例，%)

2.美容者对修复的满意度评分见表2。术后6个月时常温组美容者不满意例数较术后1个月时多，且多于同时期低温组例数，差异有统计学意义(P<0.05)；低温组美容者自体脂肪填充后，不满意人数均较少，组内各时间点比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

表2 美容者对修复的满意度评分(例，%)

3.其他评价指标见表3。常温组美容者红肿消退时间较低温组长，常温组要求二次填充的人数较低温组多,差异有统计学意义(P<0.05)，两组术后发生并发症人数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表3 两组美容者术后其他评价指标

讨论

随着年龄的不断增长，面部将逐渐出现萎缩、凹陷、皱纹、松弛等现象，主要是因为面部脂肪组织不断减少、老化以及深层软组织结构松弛下垂，皮肤弹力纤维渐渐减少、变粗等引起，自体脂肪填充使美容者面部的皱纹和凹陷部位均得到有效矫正，且移植后面部的形态和质感自然，是改善面部容貌，恢复皮肤视觉年轻化的一种有效方法[7]。

有研究表明，在添加或不添加冷冻保护剂的情况下，将脂肪细胞经梯度低温即使冻存于-80 ℃长达6个月，仍有脂肪颗粒细胞存活，解冻移植于生物体后有新生血管生成，并能达到较满意的填充效果[2-4，8]。抽取的脂肪颗粒细胞在室温下保存1小时脂肪细胞膜破坏率为(33.0±2.5)%，室温保存5小时脂肪细胞膜破坏率已高达为(70.0±3.5)%，此时已不再适合用于做自体脂肪移植，但4 ℃保存3小时脂肪细胞膜破坏率仍较低[(9.7±1.8)%]，4 ℃保存24小时脂肪细胞膜破坏率也仅为(20.0±2.6)%；同时检测不同保存温度及不同保存时间脂肪细胞GAPDH的活性说明，室温下保存3小时的脂肪细胞活性值已较低，但4 ℃保存3小时的脂肪细胞仍能保持着原有活性，说明在4 ℃低温下采集的脂肪细胞其细胞膜的完整性能保持在更佳状态，同时脂肪细胞的活性也较高。在ADSCs的提取效率及增殖能力方面，室温下保存3小时后脂肪细胞其细胞增殖活性值已很低，而4 ℃环境中保存时间较短的脂肪细胞其ADSCs增殖能力较好，即使保存24小时其所提取的ADSCs在提取效率及增殖能力方面亦能与室温保存1小时相似，该实验结果表明在4 ℃环境中采集、处理的体外脂肪颗粒可以保证其在24小时内保持着绝大部分的增殖活性，进一步提示在脂肪细胞采集、处理及转运的各个环节中都应尽力在低温下进行[9]。

有研究表明，移植前热缺血时间长短对移植物的存活时间以及移植物功能的恢复有明显影响[10-11]，缩短移植物热缺血时间是移植手术追求的目标之一。移植前对抽取的脂肪细胞在低温下进行洗涤纯化操作，降低热缺血时间，降低脂肪细胞的代谢率和耗氧量，有利于保存细胞活性，对脂肪细胞的成活率有显著的提高，同时，术后冰敷也可以降低局部组织水肿和脂肪细胞的代谢率，从而有利于移植的脂肪细胞在血供尚未建立的情况下，能适应营养匮乏的恶劣环境，存活的更多。

本研究中，脂肪细胞被提取后，立即与4 ℃冰盐水混合，以降低脂肪细胞的温度，起到低温保护作用，在洗涤纯化脂肪细胞的全程操作过程中亦均在4 ℃低温中进行，脂肪细胞移植后，额颞部皮肤给予局部冰敷以降低温度，也有利于脂肪细胞能缓慢恢复活力，避免了急速低温、急速高温的不良影响。