正交试验法优选陈渭良伤科油的渗漉提取工艺

杨 波，李子鸿，刘东文，林明越

（佛山市中医院，广东 佛山 528000）

渗滤法是将适度粉碎的药材放入渗滤筒中，从上部连续添加溶剂，该溶剂从药材层渗透而向下流动，从而提取出药材的方法。陈渭良伤科油为佛山市中医院骨伤科常用制剂，由黄连、黄柏、栀子等几味药材组成，能解毒敛疮，散瘀消肿，止血止痛。陈渭良伤科油的原提取工艺为以60%乙醇浸渍提取，需浸渍45～60天，存在提取效率低，生产周期长的缺点。笔者拟采用渗漉工艺，综合考察渗漉速度、乙醇用量、浸渍时间等工艺参数，以浸膏收率及黄连、黄柏中有效成分小檗碱含量为评价指标，优选出陈渭良伤科油的最佳提取工艺，可大大提高生产效率，为大生产的工艺改良提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

赛默飞Thermo 液相色谱 U3000；METTLER AE200电子天平；HH-600型电热恒温水箱，上海比朗仪器有限公司；202-3AB型电热恒温干燥箱，上海比朗仪器有限公司

1.2 材料

黄连、黄柏、大黄、地榆、紫珠叶、栀子中药饮片由国药集团冯了性（佛山）药材饮片有限公司提供；盐酸小檗碱标准品（中国药品生物制品检定所，批号110713-201613）。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

处方中黄连清热燥湿，泻火解毒，是为君药；黄柏清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮，与黄连配伍能增强清热解毒之功效，是为臣药，两者的主要有效成分都为小檗碱[1]，所以以小檗碱含量和浸膏收率为考察指标，选取浸渍时间、乙醇用量、渗漉速度3个考察因素，每个因素3个水平，选择L9（34）正交表进行试验。

2.2 浸膏收率测定

按处方分别称取黄柏、大黄、地榆、紫珠叶、栀子各48 g，黄连40 g共9份，粉碎成粗粉(过二号筛)，参照2015年版中国药典四部制剂通则流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，分别按照表2排列的条件进行渗漉。具体操作如下：将药粉置有盖不锈钢桶内，加粗粉量0.8倍的乙醇液搅拌均匀，湿润密闭放置1.5小时，使充分膨胀。将湿润膨胀后的药物样品拌松弄散，然后用不锈钢勺盛粉，均匀的装入渗漉筒，约装10厘米厚，用T型棒压匀，再按上述操作，一层一层的装入，适当加压，药粉填装不得超过渗漉筒的2/3高处。药粉面上盖不锈钢孔板压牢，打开渗漉筒下面的放料阀，并放一容器，然后缓缓加入乙醇液。待排出药粉粉粒之间的空气，并有乙醇流出约250 ml左右，关闭放料阀，加乙醇液至满，盖上漉筒、浸渍。浸渍达到工艺规定时间后，开放料阀以相应的渗漉速度进行渗漉，滤液放入贮液缸内，并将排空时的乙醇液倒入贮液缸。将渗漉液浓缩至浸膏状，置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定质量，即得。浸膏收率=干膏质量/药材质量×100%。

2.3 小檗碱含量测定

2.3.1 参考物质溶液的制备：取适量的盐酸小檗碱参考物质，准确称重，加流动相制成含0.1 mg/1 ml的溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备：取2.2浸膏收率测定项下的干膏，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失重量，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3.3 线性关系的研究：在“2.3.2”下准确吸取2、4、6、8、10μl的参考物质溶液，将其注入高效液相色谱仪中，并根据“2.3.1“，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标进行线性回归分析，得线性回归方程：Y＝0.537X+9.674，r＝0.9997(n=5），表明进样量在0.1938～0.969μg范围内呈良好线性关系。

2.4 正交试验结果与分析

本方由黄连、黄柏等6味药材组成，以黄连和黄柏的主要成分小檗碱的含量为指标。干提取物的收率也可以反映化合物中有效成分的提取量，因此也被选作检测指标。设计小檗碱含量的权重系数为0.6，干浸膏收率的权重系数为0.4[3]。综合评分W（%）＝0.6W1/Wmax1＋0.4W2/Wmax2。分别测定上述9份样品，并进行方差分析，见表1。

表1 综合评分方差分析

2.5 最佳工艺验证

已优选的最佳渗漉提取工艺制备3批供试品干膏，分别测定浸膏收率及小檗碱含量，计算综合评分，结果表明按正交试验优选的渗漉提取工艺稳定可靠，浸膏收率和小檗碱含量都较高，试验结果见表2。

表2 3批验证试验评价结果

3 讨 论

中药复方制剂所含成分复杂，通常有多种活性成分发挥治疗作用。当选择评估系统时，不可能且不必要使用化合物中的所有活性成分作为评估指标。本实验以渗滤液的回收率和君臣药材的主要活性成分小檗碱的含量为评价渗滤液过程的指标。综合加权评分法用于对渗透过程进行综合评估，避免了单一评估指标的局限性和单一性，使分析和评估更加全面，强调了影响药物功效的关键指标因素，使药物的使用更加合理。 分析结果更全面，更科学，更客观过程优化更合理[4-6]。本试验优选出的陈渭良伤科油提取渗漉工艺，为陈渭良伤科油工艺改革提供了实验基础，可作为下一步中试工艺的参考。