2021年海南省小作坊土榨花生油中黄曲霉毒素B1的调查分析

吴基任 潘望 谭高好 潘永波 魏静 李备

摘 要：依据国家食品安全标准，采用QuEChERs提取技术及超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法，对200批采集自海南省15个市县的小作坊土榨花生油样品的黄曲霉毒素B含量进行测定，并对不同市县的小作坊土榨花生油样品的黄曲霉毒素B的检出情况进行了分析，以了解海南省小作坊土榨花生油黄曲霉毒素B的污染现况。结果表明，海南省小作坊土榨花生油黄曲霉毒素B的检出率（≥0.23 μg/kg）为42.5%，99.5%小作坊土榨花生油符合国家食品安全标准对花生油中黄曲霉毒素素B的限值（≤20 μg/kg）规定。海南省居民食用土榨花生油中黄曲霉毒素B的平均暴露水平为0.43 ng/kg bw/d，通过食用土榨花生油摄入黄曲霉毒素B1的量为25.89 ng/人，低于我国消费人群花生油平均日膳食暴露量50.16 ng/人。

关键词：小作坊;土榨花生油;黄曲霉毒素B;调查

Investigation and Analysis of Aflatoxin B in Flavor Peanut Oil Extracted from Small Workshops in Hainan Province in 2021

WU Jiren1，2， PAN Wang1，2， TAN Gaohao1，2， PAN Yongbo1，2， WEI Jing1，2， LI Bei1，2

（1.Hainan Institute for Food Control， Haikou 570314， China; 2.Key Laboratory of Tropical Fruits and Vegetables Quality and Safety for State Market Regulation， Haikou 570314， China）

Abstract： According to the national food safety standard， QuEChERs extraction technology and ultra high performance liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry were used to determine the content of aflatoxin B in 200 samples of flavor peanut oil from small workshops in 15 cities and counties of Hainan province， and the detection of aflatoxin B in flavor peanut oil samples from small workshops in different cities and counties was analyzed. In order to understand the pollution status of aflatoxin B in flavor peanut oil extracted from small workshops in Hainan Province. The detection rate of aflatoxin B （≥0.23 μg/kg） in flavor peanut oil extracted from small workshops in Hainan Province was 42.5%，99.5% of the flavor peanut oil squeezed from small workshop conforms to the national food safety standard for aflatoxin B1 in peanut oil （≤20 μg/kg）.The average exposure level of aflatoxin B in flavor peanut oil of Hainan province was 0.43ng/kgbw/d， and the amount of aflatoxin B intake through flavor peanut oil consumption was 25.89 ng/person， which was lower than the average daily dietary exposure of peanut oil in China （50.16 ng/person）.

Keywords： small workshop; flavor peanut oil; aflatoxin B; investigation

黄曲霉毒素B是二氢呋喃氧杂奈临酮的衍生物，即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘临酮（香豆素）。黄曲霉毒素B具有致癌、致突变、致畸性及肝毒性，对人体健康有极大的危害，1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）癌症研究总署（LARC）划定为Ⅰ类致癌物。考虑到黄曲霉毒素B对人类健康的危害性，各个国际组织逐步确立法律法规限定其最大摄入量。1993年联合国粮农组织和世界卫生组织规定食品中黄曲霉毒素限量为30 μg/kg，2002年欧盟规定供人食用的食品及食品原料中黄曲霉毒素B限量为2 μg/kg，食品法典委员会规定了花生中黄曲霉毒素总限量为15 μg/kg。我國新修订的《国家食品安全标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）也对各类食品中的黄曲霉毒素B限量进行了规定，其中花生及其制品的限量为20 μg/kg。黄曲霉毒素B广泛存在于油料，如花生、大豆、玉米等，而花生和玉米中黄曲霉毒素污染最为严重。在我国每年生产的花生中，有47.3%用于榨油，花生中的黄曲霉毒素随着榨油过程进入花生油中。有研究发现人工挑除霉变的花生，可以将花生中的黄曲霉毒素B降低到一定程度，如果仔细挑选，能够将花生中黄曲霉毒素污染浓度降低约97%，从而降低花生油中黄曲霉毒素。

鉴于海南省花生油榨油小作坊众多，土榨花生油消费特点明显，了解当前海南省小作坊土榨花生油情况，展开小作坊土榨花生油中黄曲霉毒素B含量的调查分析，以期较为全面掌握海南省小作坊土榨花生油安全水平及黄曲霉毒素B污染状况，从而为相关部门提供风险评估、预警以及决策，为人们食用花生油提供安全保障。

1 材料与方法

1.1 样品采集

结合海南省榨油小作坊分布及土榨花生油消费特点，在海南省19市县随机抽样检验。200个榨油小作坊各抽取土榨花生油样品1批，共计200批。分批采集封装后常温保存，每份样品均做好详细采样记录和调查问卷。抽样时间为2021年3月—2021年4月，有4个市县没有抽到样品，实际抽样市县为15个。

1.2 仪器与试剂

LC-30超高效液相（日本岛津），QTRAP 5500三重四极杆液相色谱质谱联用仪（美国AB SCIEX公司）;Multi Reax全能型振荡器（德国Heidolph公司）;Centrifuge 5804高速离心机（德国Eppendorf公司）;SCIENTZ-950E超声波提取器（宁波新芝生物科技公司）;AutovapS60氮吹仪（美国ATR）;XS-205电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo）;Milli-Q超纯水制备系统（美国MILLI-PORE）;陶瓷均质子（美国安捷伦公司）;ACE Ultra Core Super C色譜柱（2.1 mm×100 mm， 2.5 μm， 英国ACE公司）;0.22 μm尼龙微孔滤膜（上海安谱科学仪器有限公司）。

甲醇、乙腈、甲酸，色谱纯，德国默克公司;黄曲霉毒素B标准品（25 μg/mL）;花生油质控样品，批号：MRM-AO-04010，新加坡Pribolab公司;提取盐包（4 g MgSO、1 g NaCl、1 g柠檬酸钠、0.5 g三水合柠檬酸二钠）、净化盐包（150 mg C、900 mg MgSO），美国安捷伦公司）;超高比表面积单壁碳纳米管（纯度>95%，直径1～2 nm，长度5～30 μm，比表面积>1 075 m2/g），南京纳米先锋公司;超纯水：超纯水制备系统制备。

1.3 检测方法

土榨花生油中黄曲霉毒素B含量的测定方法根据《QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花生及土榨花生油中9种真菌毒素》。准确称取2.0 g油样于50 mL的离心管中，加入10 mL含1%甲酸甲醇溶液，2粒陶瓷均质子，加入提取盐包（4 g MgSO、1 g NaCl、1 g柠檬酸钠、0.5 g三水合柠檬酸二钠），以2 500 r/min涡旋混匀2 min，置于超声波清洗器超声提取5 min 后，再10 000 r/min离心3 min，移取上清液至预先加入净化盐包（150 mg C、900 mg MgSO）15 mL离心管中，对于颜色较深的试样15 mL离心管中预先加入净化盐包（150 mg C、900 mg MgSO）及10 mg超高比表面积单壁碳纳米管，以500 r/min涡旋混匀1 min，再10 000 r/min离心3 min，准确吸取5 mL上清液于10 mL试管中，在40 ℃水浴下氮气吹至近干，加入1 mL含0.1%甲酸的水-乙腈溶液（20︰80，V︰V）复溶，过0.22 μm尼龙微孔滤膜，上UPLC-MS/MS测定。

1.4 评价标准与方法

依据《国家食品安全标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生及其制品的限值（≤20 μg/kg）及《QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定花生及土榨花生油中9种真菌毒素》的黄曲霉毒素B定量限（0.23 μg/kg）对花生油进行评价。

采用Excel 2016和SPSS 19.0数据统计软件处理分析实验数据。主要包括描述性分析，各个地区检出率之间的比较采用卡方检验，以（p<0.05）为差异有统计学意义。

1.5 质量控制

所有检出的样品，均按照《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》（GB 5009.22—2016）第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法进行复测确认，同时采用有证质控样随样测定，以保证结果的准确性。

1.6 暴露评估

采用简单点评估法计算居民食用油黄曲霉毒素B的膳食暴露量，食用油中黄曲霉毒素B暴露量（ng/kg bw/d）=食用油人日均消费量×食用油中黄曲霉毒素B平均含量（μg/kg）/标准成人体重（60 kg）。

2 结果与分析

2.1 样品中黄曲霉毒素B的含量分析

本次调查采集的土榨花生油200批样品经检测，85批样品检出AFB（≥0.23 ug/kg），检出率为42.5%，低于2016年福建省的71.4%及2017年广西省的78.08 %。含量范围为0.25～22.03 μg/kg，中位数1.47 μg/kg，平均含量为1.22 μg/kg。按现行的《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生油的黄曲霉毒素B限量规定（≤20 μg/kg），所调查的样品中有1批超过国家限量标准，不合格率为0.5%。检测结果在15～20 μg/kg，接近国家限量标准的样品有1批，而这个污染水平可能会被企业所忽视。200批样品检测结果值分布水平见图1。

2.2 各市县样品中黄曲霉毒素B污染状况分析

将花生油样品黄曲霉毒素B检测结果按市县分析，结果见表1。从表中可以看出黄曲霉毒素B的检出率比较高，有4个市县的黄曲霉毒素B的检出率大于50%，定安县检出不合格1批，该县的不合格率为3.85%。使用SPSS对15个市县的土榨花生油样品中黄曲霉毒素B的监测结果进行分析，发现各个地区的样品中黄曲霉毒素B的检出率差异有统计学意义（χ=31.42，p<0.05）。

2.3 膳食暴露情況

结合海南统计年鉴（2020）的植物油人日均消费量（21.22 g/d）和本次黄曲霉毒素B含量调查数据，代入暴露量水平计算公式，得出海南省居民食用土榨花生油中黄曲霉毒素B的平均暴露水平为0.43 ng/kg bw/d。通过食用土榨花生油摄入黄曲霉毒素B的量为25.89 ng/人，低于我国消费人群花生油平均日膳食暴露量（50.16 ng/人）。

3 结论与讨论

本调查遵循样本“覆盖面广、多点采样”的原则，样本覆盖全省15个市县的200家榨油小作坊，基本能够代表人们购买土榨花生油的主要渠道。对200批样品中黄曲霉毒素B检测分析结果表明，2021年海南省小作坊花生油黄曲霉毒素B超标率为0.5%，检出率为42.5%，经简单风险评估发现，海南省人群食用土榨花生油摄入黄曲霉毒素B的量为25.89 ng/人，低于我国消费人群花生油平均日膳食暴露量。调查中发现小作坊土榨花生油多是前店后厂模式生产，条件比较简陋，设施设备及加工工艺比较落后，产品过滤精炼不足，部分产品静置后有深棕色絮状沉淀物。花生油中黄曲霉毒素B含量的高低取决于花生原料的质量及压榨加工过程精炼处理效果。如果在花生种植收获、存储运输和压榨加工过程中没有做好防霉、精炼过滤等处理，容易造成终产品的黄曲霉毒素B含量超标。有研究发现人工挑除霉变的花生，可以将花生中的黄曲霉毒素B降低到一定程度，如果仔细挑选，能够将花生中黄曲霉毒素污染浓度降低约97%，从而降低花生油中黄曲霉毒素B。花生油中黄曲霉毒素B高于和接近国家标准限值的小作坊可采取如下措施：①加强对标准法规的学习，提升食品安全和质量保证意识;②加强防霉储存知识学习，以做好压榨加工及储存过程的防霉处理;③加强环境温湿度控制，加强剔除原料中的霉粒，必要时改善设施设备和改进加工工艺。以进一步提升海南小作坊土榨花生油质量，保证人们食用花生油安全。

鉴于本次研究仅针对2021年海南省小作坊土榨花生油中的黄曲霉毒素B进行膳食暴露评估，而黄曲霉毒素B存在于各种食用农产品中，且食用植物油的种类繁多。因此，本研究结果并不能完全代表该地区居民人体黄曲霉毒素素B的总体摄入水平。

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基金项目：海南省重点研发计划项目（ZDYF2019111）。

作者简介：吴基任（1983—），男，海南海口人，本科，高级工程师。研究方向：色谱质谱、食品农产品检测、质量控制。