高通量测序在原发性肝细胞癌mRNA患者测序中的应用研究新进展

覃文周，曾灏，翚缨

(广西医科大学附属第八临床学院(贵港市人民医院) 检验科，广西 贵港 537100)

0 引言

原发性肝细胞癌属于临床上比较多见的恶性肿瘤疾病类型导致此类疾病发生的原因具有一定的复杂性，其中长时间酗酒以及慢性肝炎病毒感染等属于较为多见的危险性因素[4]。原发性肝细胞癌患者发病时相对比较隐匿，且发病早期的临床症状具有一定的不典型性，其诊断率明显较低。当前临床上对疾病进行早期诊断时缺乏科学合理的手段，当对疾病确诊时其病情往往已经进展到晚期，而接受手术治疗的患者在术后极易出现复发以及远处转移等不良事件，而接受靶向药物治疗的患者其疗效也并不理想，患者预后情况也难以达到实际预期，难以进一步延长患者生存率，因而提早预测以及诊断肝癌疾病的发生以及进展对于进一步促进患者病情以及预后改善具有关键作用[5]。相关研究显示，抑癌基因失活以及促癌基因活性被激活这两者之间独立作用或者是共同发生作用都会导致患者出现肿瘤，从而导致患者机体内的部分基因表达存在一定异常，并使细胞出现明显增殖以及不断凋亡等状况，对肿瘤的发生以及进展起到了极大地促进作用。因而 对已经发生改变的基因做详细且深入性的研究，能在一定程度上为科学准确治疗肝癌疾病提供一定的参考[6]。而差异表达基因筛选的主要方式包括mRNA差异显示技术、消减杂交技术以及高通量测序技术等。

1 高通量测序的含义

高通量测序技术属于现代生命科技领域内对传统性测序方式所进行的一次具有较大革命性的巨大创新，它能够一次性准确检测几十甚至到几百万条的DNA分子，因而又经常被叫作下一代测序技术，由此可以看出此项技术发生额划时代的巨大变化[7]。而且高通量测序技术的应用，能够在一定程度上细致全貌的分析一类物种的转录组以及基因组变化情况，因此也常常被叫作深度测序技术。

2 基于高通量测序技术对七种肝癌细胞株体细胞突变进行检测

近几年来，于高通量测序基础上所提出的多组学以及多中心等癌症基因组重大项目，将原发性肝细胞癌患者的关键性致癌基因网络以及相对详细的基因突变图谱等内容做了全面的显示[8]。但仍旧难以快速明确原发性肝细胞癌细胞株的体细胞突变情况。对肝癌细胞株可能存在的基因突变形式做科学研究，能够更加深入性的了解肿瘤常用细胞模型，但仍旧需要进一步探讨以及分析大多数克隆产生的肝癌细胞株以及突变相似性较大的部分分子机制等[9]。因而，通过测序技术对原发性肝癌细胞株中的相关通路以及突变基因进行全面的分析，能够为肝癌细胞克隆来源以及肝癌异质性变化情况提供相对准确的参考方向[10]。

3 高通量测序技术在临床应用中的价值

高通量测序技术最本质的特征为PCR，它属于一类具有较高开放性的新型系统，能有效检测未知以及已知的所有序列，但在对相关序列进行建库期间，其所得样本的数量会被迅速扩大到1000倍往上，因而研究过程中样本的基因量会存在一定程度的误差[11]。所以在做探索性试验时选用高通量测序技术更加恰当，能够在试验期间找寻到新的东西。如果所要研究的对象属于已知类型，且会更加严格的要求定量选择的准确性，这时比较适当的方式为基因芯片[12]。通常情况下肿瘤是经由多种综合性且相对危险复杂的因素所导致的，此时患者机体内产生了异质性相对较强的肿瘤微环境，主要表现为不同患者之间的肿瘤类型具有一定的差异性，相同患者但病灶存在明显不同，以及相同肿瘤结节内部细胞具有一定程度的其异质性[13]。且细胞内已经出现明显的基因突变、表达异常以及激活、失活等状况，因而临床上及时发现以及诊断癌细胞及其配对癌旁差异基因时，应用高通量测序技术相对来说更加恰当[14]。

高通量测序技术的应用能够深度测序数量繁多且种类不同的基因片段混合物，并能在较短的时间得到个体以及疾病的所有基因数据信息，其中读长时间短为最关键的一项标志[15]。高通量测序技术同过去的测序方式对比来说，其关键性优势在于使用成本不高、测序比较迅速、测序准确性高以及通量高等[16]。同时能够在是面对未知序列信息的背景下有效测序已有的样本数据，必能对最新产生的基因以及突变等进行及时发现以及鉴别诊断，有利于进一步找寻到多种复杂疾病在发生以及进展期间所存在的致病靶点[17]。

高通量测序技术的应用能够在最大范围以及深度上快速测序已知样本中的DNA以及RNA数目，从而能全景式的探讨以及分析患者基因组的具体情况，还可以对DNA以及RNA相对较低的发生频率进行准确测定，有利于对全基因组关联性研究中出现的假阴性率以及高假阳性考率等问题进行进一步解决，使结构变异的敏感性以及导致疾病发生的稀有变异等均得到进一步提升[18-19]。高通量测序技术本身具有的全面性以及多样性等特征，能够对复杂疾病分子的调控有进一步的了解，对于快速研究、诊断以及合理治疗疾病具有关键意义。对于部分具有明显个体细胞以及遗传基因双重病变，且存在较高阶段异质性的癌症类型疾病比较适用。当前高通量测序技术已经得到广大研究者的深度认可，同时在有关疾病领域内获得了相对较大的突破以及发展[20]。

综上所述，近几年来高通量测序技术在临床医学中的发展越来越迅速，且在生命科学领域中的应用也更加普遍。而临床对多种复杂性疾病的深入性研究以及有效推动，能对宏观基因组学的探究以及有关解决策略分析进行有合理改变。而在对肝癌疾病进行有效研究以及探讨的过程中使用高通量测序技术，不但能在分子层面上对同肝癌临床分型存在密切关联的枢纽基因进行精确且合理的鉴别诊断，还能对患者原发性肝细胞癌体细胞的突变表达形式进行准确判断，能为进一步掌握疾病的发生机制提供科学且全面的参考以及理论依据。