异常糖链糖蛋白在胆道良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值

黄娜娜，顾康生，张逸寅,戴映，张腾腾

异常糖链糖蛋白(TAP)是蛋白质糖基化异常，糖基化修饰不完全或新的糖基转移酶被激活产生新的糖基化而形成的。细胞癌变时发生特异性糖链变化，促使多种异常糖链糖蛋白形成，临床可以使用特殊技术检测这些异常蛋白来区分疾病良恶性，使肿瘤早期检测成为可能[1]。

近年来，有多项研究发现，在肺癌、鼻咽癌、乳腺癌等多种原发性恶性肿瘤中可检测到异常糖链糖蛋白的表达，为异常糖链糖蛋白辅助恶性肿瘤诊断提供依据。TAP对于多种恶性肿瘤的早期诊断具有较高的敏感度与特异度，具有较高的诊断价值[2-5]。 但目前TAP在胆道恶性肿瘤(biliary tract cancer,BTC)方面的研究较少，临床证据并不完善，本研究旨在观察异常糖链糖蛋白在胆道恶性肿瘤中的表达，分析其对胆道恶性肿瘤的诊断价值及临床意义，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性收集 2019年 1月—2020年 4月安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科收治经病理证实为胆道恶性肿瘤(BTC组)患者70例的临床资料，其中男36例，女34例，年龄31～87(59.91±10.73)岁；病程0.2～6.0(1.75±1.60)年;肿瘤类别：胆囊癌24例，胆管癌46例；既往史：胆道手术史20例，无手术史50例；70例患者均无家族遗传性病史。另按照随机对照原则抽取同期医院治疗的胆道良性疾病患者100例为对照组，其中男55例，女45例，年龄 19～83 ( 52.32± 15.02)岁；病程0.3～5.0(2.21±1.65)年;患者均无家族遗传病史。2组患者性别、年龄和平均病程比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准: ①所有患者病理已确诊为 BTC；②年龄>18岁。(2)排除标准: ①年龄<18岁; ②合并其他肿瘤者；③未行放化疗；④合并严重感染及心、肝、脑等脏器严重器质性病变者；⑤妊娠期及哺乳期妇女。

1.3 观察指标与方法

1.3.1 临床资料收集：收集BTC患者性别，年龄，功能状态评分(PS)，肿瘤部位，临床分期，病理分型及分化程度，肝转移情况及肿瘤切除病史等。

1.3.2 TAP和CEA检测：采集2组患者清晨空腹静脉血10 ml，离心后留取血浆备用。TAP使用浙江瑞生医疗仪器厂提供的诊断仪和TAP检测促凝剂、配套试剂盒，并严格按照试剂盒说明书进行检测。电化学发光法检测CEA， 试剂盒购自罗氏诊断产品上海有限公司,所有操作按照相关 SOP文件规范操作。

1.4 TAP及CEA阳性判断标准[5]TAP截断值范围：团聚物面积<121 μm2为 TAP 正常/无明显团聚物(阴性)，面积121～225 μm2为异常/团聚物较小(阳性)，面积>225 μm2为异常/团聚物较大(阳性)。CEA正常参考范围：0～5.00 U/ml，>5 U/ml为阳性，≤5 U/ml为阴性。

2 结 果

2.1 TAP结果判读 TAP团聚物为近似圆形，立体感较强，颗粒中间微发亮。通过测量团聚物的面积，得出具体数值，见图1。

2.2 2组TAP和CEA表达水平及阳性率比较 BTC组患者外周血TAP和CEA的表达水平及阳性率均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表1。

注：A.阴性 (<121 μm2)；B.阳性 (121～225 μm2)；C.阳性 (>225 μm2)

2.3 BTC患者不同临床特征中TAP和CEA表达比较 TAP在不同性别、年龄、PS评分、肿瘤部位、病理分型、神经及脉管侵犯和肿瘤切除史中比较差异均无统计学意义(P>0.05)，而在胆道恶性肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、发生肝转移者外周血TAP表达高于Ⅰ～Ⅱ期及无肝转移者，差异均有统计学意义(P<0.05)。 CEA在不同临床特征中表达比较差异均无统计学意义 (P>0.05)，见表2。

2.4 外周血TAP和CEA诊断BTC的ROC曲线分析 ROC曲线分析显示，TAP、CEA及联合检测诊断BTC的AUC分别为0.913、0.817、0.953，此时TAP截断值为124.500 μm2，CEA的截断值为2.590 U/ml，敏感度分别为83.7%、70.0%、84.3%，特异度分别为97.0%、83.0%、97.0%；约登指数分别为0.807、0.530、0.813； 单项检测中TAP的敏感度及特异度均高于CEA，联合检测的敏感度高于单独检测，TAP和联合检测的特异度均高于CEA，见表3、图2。

图2 TAP和CEA诊断BTC的ROC曲线

表1 2组患者TAP和CEA表达水平及阳性率比较

表2 BTC患者外周血TAP和CEA阳性率在不同临床特征中比较 [例(%)]

表3 TAP、CEA和联合检测诊断BTC的ROC曲线分析

3 讨 论

胆道恶性肿瘤(BTC)是由肝内胆管上皮细胞、肝外胆管上皮细胞、胆囊上皮细胞和壶腹上皮细胞引起的一类异质性肿瘤[6]。胆道恶性肿瘤相对罕见，占成人所有恶性肿瘤的0.7%，占消化道恶性肿瘤的4%[7]，但其发病率最近在全球范围内呈上升趋势。到目前为止，胆道恶性肿瘤的唯一治疗方法是手术切除；然而大多数胆道恶性肿瘤(>65%)在最初诊断时被认为是不可治愈的[8-10]。此外，大多数胆道恶性肿瘤即使在根治手术后也常复发。晚期胆道恶性肿瘤的预后，包括不能切除的局部晚期或转移性疾病患者，其5年总生存率(OS)小于10%[11-13]。因此如何提高胆道恶性肿瘤的早期检测率是目前临床重要的关注点之一，针对胆道恶性肿瘤特异性的生物标志物研究较少，因此，寻找能够辅助诊断胆道恶性肿瘤的生物标志物意义重大。

研究表明，蛋白质糖基化异常是导致正常细胞癌变的重要原因之一，同时也是诱导肿瘤侵袭转移的关键事件[14]。蛋白质糖基化异常可促使异常糖链糖蛋白的表达，当表达量达到一定程度后，可以在外周血中检测到[15-16]。目前，异常糖链糖蛋白主要用于肿瘤的术前分期、术后疗效监测和复发的早期诊断[17-19]。许多肿瘤标志物在目前的临床检测中是无法检测到的，但TAP 检测是一种特殊的识别技术，TAP检测试剂盒中含有促凝剂，该检测试剂盒辅助促进了多种异常糖链的相互聚集形成晶体团聚体，而没有 TAP 物质存在的血液无法形成团聚体。TAP检测系统中，使用图像分析仪或生物显微镜可以观察到与未使用TAP的凝固血液图像的差异。TAP检测可以将二十多种与肿瘤相关的异常糖链进行一次组合检测，聚集多种肿瘤信号，大大提高了肿瘤检测的敏感度和特异度。

相关研究发现[20-21]，在肺癌外周血中异常糖链糖蛋白的表达明显升高，可辅助肺癌的早期诊断，对于肺癌及其癌前病变的鉴别及筛查有重要的诊断价值，徐阳[22]发现甲状腺癌患者 TAP的表达明显高于甲状腺良性结节患者，可作为甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断的指标，诊断效能良好。本结果显示，在胆道恶性肿瘤组TAP检测阳性率为87.1%,明显高于胆道良性病变组，TAP和CEA联合检测可提高诊断效能，特异度达97.0%，与上述的各项研究结果相似。Neela等[23]研究已发现，Ras-Raf-MAPK信号转导途径激活增强N-乙酰葡萄糖转移酶V(GnT-V)活性，从而使E-钙黏附素的β-1，6-N-乙酰葡萄糖表达增多，降低肿瘤细胞间黏附性，肿瘤细胞从原发灶脱落而转移，肿瘤细胞膜上的β-1，6-N-乙酰葡萄糖胺分支结构表达增加形成的异常糖链糖蛋白，促进肿瘤细胞的转移。在本研究中，肝转移的患者TAP表达水平明显升高，证实了异常糖链糖蛋白促进肿瘤细胞的转移，与Neela等[23]研究结果一致。中晚期胆道恶性肿瘤患者的TAP表达水平明显升高，可能由于肿瘤负荷重，肿瘤细胞表面和最终释放进入体液的异常糖链糖蛋白多，血清TAP阳性检出率更高。另外本研究发现，如以TAP团聚物面积>225 μm2为截断值诊断，胆道恶性肿瘤的特异度和阳性率为100%,但其较低的敏感度将限制其广泛应用于临床实践。本研究受临床病例数限制存在一定的局限性，可能存在临床选择性偏倚。

综上所述，异常糖链糖蛋白可以作为鉴别诊断胆道良恶性肿瘤的生物标志物，并具有较好的诊断效能，与CEA联合检测可提高诊断的敏感度。对于异常糖链糖蛋白在胆道恶性肿瘤的发生、发展中的分子作用机制有待进一步探究。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

黄娜娜：设计研究方案，实施研究过程，资料收集，进行统计学分析，论文撰写; 顾康生:提出研究思路，分析试验数据，论文审核;张逸寅：实施研究过程；戴映、张腾腾：实施研究过程、资料搜集整理