猪轮状病毒病的诊断技术

随着现代分子生物学技术的不断发展，动物疫病的检测的方法也由此得到了相应的改进与完善。而当前针对猪轮状病毒病的诊断技术也从传统的临床经验诊断向病原学诊断、免疫学诊断和分子生物学诊断方面发展。因此，本文对目前临床已有的猪轮状病毒病诊断方法进行详细的综述，旨在为猪轮状病毒病的预防和控制奠定理论基础。

1 病原学诊断

1.1 细胞培养分离病毒猪轮状病毒的分离试验采用含病毒的患病猪的粪便或病死猪肠道内容物对MA104细胞等敏感细胞接种，盲传后观察细胞是否发生病变，并根据病变结果判定猪轮状病毒的阴阳性[1]。该法可对猪轮状病毒感染病变细胞进行直观观察，但该法不仅存在周期长、操作过程繁琐、价格高等缺点，还需要操作人员具有一定的经验。

1.2 电镜观察诊断法电镜观察诊断法主要分为直接电镜法和免疫电镜法两种。直接电镜法是最早出现的猪轮状病毒检测方法，主要用于动物粪便的检查。免疫电镜法主要通过观察聚集的病毒抗原复合物来判断被特异性抗体俘获病毒[2]。该法具有操作简单、高效和直观性强等特点，但仪器设备电镜价格昂贵，不适宜在基层进行大规模推广。

2 免疫学诊断

2.1 免疫荧光技术将患病猪的粪便或病死猪肠道内容物制作成涂片，并用固定液冰丙酮溶液对涂片进行固定，然后采用荧光素标记的猪轮状病毒的特异性抗体进行染色处理后，应用荧光显微镜进行结果观察。该法是目前兽医实验室诊断猪轮状病毒中应用最为广泛的一种，但在应用免疫荧光技术对荧光显微镜镜下对结果进行判定时，需要检测人员具有一定的检测经验，且该法对被检样品的要求较高。

2.2 血清中和试验将猪轮状病毒与特异性抗体的混合物在体外孵育，使病毒与抗体进行充分的反应后，将混合物接种到相应的细胞或猪体内，测定剩余的病毒感染力。该法具有操作简单、价格低廉等特点，且没有特殊设备的要求，可用于大批量样品的检测。但该法在操作中需具有较高的操作要求，以此保证生物安全。

2.3 ELISA试验ELISA试验主要是将酶标记缀合物与猪轮状病毒抗原或抗体结合形成酶标记的免疫复合物，复合物上的酶与底物反应形成有色产物，应用酶标仪在一定的波长下对有色产物吸光度进行检测。该法具有操作简单、灵敏度高和特异性好的特点，但对实验操作中的移液器精确度要求较高。

2.4 乳胶凝集试验乳胶凝集试验是一种以乳胶粒子作为载体的间接凝集试验。试验抗猪轮状病毒抗原抗体包被的乳胶颗粒与粪便中猪轮状病毒抗原发生抗原抗体反应，产生可见的凝集反应。该法操作简单、成本低廉、高效，可广泛应用于猪轮状病毒的检测。

3 分子生物学诊断

3.1 PCR1985年PCR技术首次被研发成功，随着科技技术的不断改进和更新，使其在基因诊断技术得到了全新的发展，PCR也从一种定性的分析检测发展到如今的定量分析；此外，PCR也从传统的单纯扩增几个kb基因向当前几十个kbDNA片段长度进行扩增。

3.2 荧光定量PCR实时荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对猪轮状病毒的核酸进行标记和荧光采集，并结合了核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术，对PCR产物进行跟踪，实时在线监控反应过程，结合软件分析，计算核酸样品模板的初始浓度[3]。该法具有特异性好、灵敏度高和操作简单等优点，但该法的仪器设备价格昂贵，不宜在基层进行大规模推广。

综上所述，寻找一种具有特异性好、灵敏度高、价格低廉、操作简单和易于推广等优点的诊断技术是目前动物疾病疫病诊断的发展方向。因此，综述猪轮状病毒实验室诊断技术的研究现状，不仅为猪轮状病毒诊断技术的研究保留客观的信息资料，还有利于探索出更理想的猪轮状病毒病诊断技术提供有益的线索。