血清CEA、CYFRA21-1、CTC及PNI在胃癌腹膜转移患者中的诊断价值

李剑峰，丁才智，周化敏

湖北省松滋市人民医院检验科，湖北松滋 434200

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，我国是胃癌高发国家之一，每年新发胃癌患者约40万，死亡患者约30万，占每年全球胃癌死亡人数的40%[1]。早期胃癌患者通常并无明显症状，出现临床症状时大多已是中晚期，治疗后5年生存率低于10%，甚至部分患者在确诊时就已经出现腹膜转移，丧失手术治疗的机会。所以，早期发现胃癌可提高患者治疗效果和生存率[2]。目前，临床用于诊断胃癌腹膜转移的方法包括内镜检查、病理检查、腹部CT、B超等，但上述检查中内镜检查、病理检查操作较为烦琐，技术要求高，而腹部CT、B超等影像学检查灵敏度、特异度较低。因此，寻找简单、便捷的胃癌腹膜转移诊断方法成为当前研究的热点。血清癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、循环肿瘤细胞(CTC)、预后营养指数(PNI)与肿瘤细胞的分化、浸润、转移，肿瘤患者的预后存在显著相关性[3-4]。临床中对于上述4项指标联合检测在胃癌腹膜转移中的应用价值研究较少，故本研究对此进行了相关分析，以期为临床诊断、治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年11月至2019年2月本院收治的胃癌患者93例作为研究对象，其中22例腹膜转移患者为转移组，71例无转移患者为未转移组。另选取88例同期健康体检者为对照组。转移组中男14例，女8例；年龄46～65岁，平均(55.62±8.77)岁。未转移组中男37例，女34例；年龄45～66岁，平均(55.07±9.23)岁。对照组中男46例，女42例；年龄45～65岁，平均(55.28±9.17)岁。3组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入及排除标准 纳入标准：(1)临床资料完整；(2)腹膜转移患者不伴其他部位转移。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤患者；(2)接受过化疗、放疗或免疫治疗患者；(3)合并心、肝、肾等重要脏器严重疾病或功能不全患者；(4)合并免疫系统疾病或凝血功能障碍患者；(5)重度营养不良患者。

1.3方法

1.3.1CEA、CYFRA21-1检测 抽取清晨空腹静脉血4 mL，室温下静置后常规分离血清，将血清保存至-20 ℃冰箱中待测。使用贝克曼库尔特公司生产的DXI800全自动免疫分析仪及配套试剂进行检测，操作过程严格按照厂家提供的说明书进行。

1.3.2CTC检测 抽取清晨空腹静脉血4 mL，离心后加入磷酸盐缓冲液(PBS)45 mL，再次离心5 min后弃上清液，加入红细胞去除液45 mL，放置于垂直混匀仪中，室温下充分裂解红细胞；离心5 min后弃上清液，300 μL PBS重悬细胞沉淀，将适量磁珠加入细胞中，水平匀速倾斜摇晃20 min，让其与细胞充分结合。加入3 mL分离介质于离心管内，将结合磁珠悬液叠加至分离介质顶层中离心，离心结束后将细胞层吸出，转移至离心管内，再次离心5 min，弃上清液后加入1 mL PBS。将标本转移至2 mL离心管内，放置于磁力架上2 min，随后再将标本转移至1.5 mL离心管内，离心3 min，弃上清液；加入100 μL固定液，充分混匀后将其涂片于载玻片上，放入烘箱中33 ℃干燥，24 h内进行后续处理。将标本经固定液固定，乙醇脱水后放置于室温下晾干，加入100 μL CEP-8/CEP-17，封片后放于杂交仪中变性杂交1.5 h；将标本放置于43 ℃甲酰胺工作液中，洗脱探针15 min，随后放入2×枸橼酸钠缓冲液中洗涤2次。将配置完成的CD45荧光抗体加入标本中，放入湿盒内，33 ℃烘箱孵育1 h；将荧光抗体吸干，滴加10 μL 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)于标本中，盖玻片封片，于荧光显微镜下观察、计数。

1.3.3计算PNI 抽取静脉血进行血清清蛋白(ALB)检测，PNI=ALB水平(g/L)+5×外周血淋巴细胞计数(×109/L)。

2 结 果

2.13组PNI、CTC、CEA、CYFRA21-1水平比较 转移组CTC、CEA、CYFRA21-1水平高于未转移组与对照组，PNI低于未转移组与对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；未转移组CTC、CEA、CYFRA21-1水平高于对照组，PNI低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组PNI、CTC、CEA、CYFRA21-1水平比较

2.2CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI单独及联合诊断胃癌腹膜转移的效能 ROC曲线分析结果显示，CTC诊断胃癌腹膜转移的灵敏度为63.6%、特异度为98.6%、AUC为0.857，高于CEA、CYFRA21-1、PNI单独诊断；CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI联合诊断胃癌腹膜转移的AUC为0.906，高于各项指标单独诊断。见图1～3、表2。

图1 CEA、CYFRA21-1、CTC诊断胃癌腹膜转移的ROC曲线

图2 PNI 诊断胃癌腹膜转移的ROC曲线

图3 CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI 4项联合诊断胃癌腹膜转移的ROC曲线

表2 CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI单独及联合诊断胃癌腹膜转移的效能

3 讨 论

胃癌腹膜转移的机制尚不明确，有研究认为“种子-土壤学说”可能是胃癌腹膜转移的机制，原发性胃癌细胞浸润浆膜形成脱落的“种子”，而这些“种子”具有较强的侵袭与转移能力，在各种因素作用下黏附于腹腔脏器或网膜，随后着床形成胃癌转移灶[5-6]。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI等肿瘤标志物检测对胃肠道肿瘤早期诊断、预后判断、疗效评价具有重要意义[7-8]。

本研究结果表明，胃癌腹膜转移患者CTC、CEA、CYFRA21-1水平均高于未转移患者与健康对照者，PNI低于未转移患者与健康对照者；未转移患者CTC、CEA、CYFRA21-1水平均高于健康对照者，PNI低于健康对照者。这提示胃癌腹膜转移患者与未转移患者均存在PNI、CTC、CEA及CYFRA21-1水平变化，且其可能与胃癌的发生、发展有关。CEA是肿瘤相关抗原的一种，广泛存在于消化系统肿瘤中，在正常胚胎组织与健康人血清中也可被检出。当肿瘤细胞失去极性时，其分泌的CEA增多，排出受阻，进入人体血液循环与淋巴循环中的CEA增多，导致CEA水平增高[9]。有研究指出，CEA不仅是胃癌的诊断标志物之一，在结直肠癌、乳腺癌、肺癌诊断中也均具有较高的价值[10-12]。正常情况下，CYFRA21-1在血清中水平较低，其主要存在于肿瘤细胞的细胞质中，肿瘤细胞坏死或被溶解时CYFRA21-1大量释放，因此，在各类肿瘤中均可检测到CYFRA21-1水平升高[13]。临床研究表明，CTC可作为多种肿瘤预后、复发和转移的评估指标，且血液中CTC越多，患者预后越差，出现复发、转移的概率越高[14-15]。有研究指出，PNI是胃癌腹膜转移患者预后不良的独立危险因素，PNI越低，患者预后越差[16]。

本研究进一步行ROC曲线分析CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI对胃癌腹膜转移患者的诊断价值，结果显示，CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI单独诊断时具有较高的特异度，但灵敏度均相对较低，考虑这可能与胃癌腹膜转移患者与未转移患者间样本量差异较大有关。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI 4项指标联合诊断胃癌腹膜转移的AUC为0.906，高于各项指标单独诊断，提示4项指标联合检测对胃癌腹膜转移具有较高的诊断价值，在一定程度上弥补了单一指标诊断灵敏度较低的缺陷。

综上所述，胃癌腹膜转移患者与未转移患者均存在CTC、PNI、CEA及CYFRA21-1水平变化，其可能与肿瘤的发生、发展有关。CEA、CYFRA21-1、CTC、PNI联合诊断胃癌腹膜转移的价值较高，临床可将4项指标联合检测以提高诊断的准确性，减少漏诊与误诊。