尿TGF-β1、8-OHdG检测在早期糖尿病肾病中的应用价值*

冒艳阳，杨侠宇，魏 杰，冯 健，郭正勇

南京梅山医院：1.检验科；2.肾内科,江苏南京 210039

随着糖尿病患病率的上升，糖尿病肾病(DN)的患病率也逐渐增加[1]。糖尿病患者一旦肾脏受损，病变将持续存在且不可逆转，因此早期发现、早期治疗非常重要。根据Mogensen分期标准，将DN分为5期：Ⅰ期为正常蛋白尿期，即尿微量清蛋白与肌酐比值(ACR)<30 mg/g，表现为肾小球肥大，肾小球滤过率升高，无肾脏病理组织学改变；Ⅱ期为间断微量蛋白尿期；Ⅲ期为持续微量蛋白尿期；Ⅳ期为大量蛋白尿期；Ⅴ期是尿毒症期。KDIGO指南[2]将ACR≥30 mg/g作为DN早期筛查和诊断的标准之一，但当糖尿病患者ACR≥30 mg/g时，其Mogensen分期已达到Ⅱ期及以上。因此，研究DN早期诊断的敏感标志物尤为重要。近年来，有学者将尿转化生长因子-β1(TGF-β1)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)作为DN疗效评价的指标[3-4]，并得到临床的广泛认可。本研究旨在探讨TGF-β1及8-OHdG检测在DN早期诊断中的临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1—11月本院收治的2型糖尿病患者120例作为研究对象，所有患者均符合2型糖尿病的相关诊断标准。根据ACR将2型糖尿病患者分为3组，分别为正常蛋白尿组(ACR<30 mg/g)、微量蛋白尿组(30 mg/g≤ACR<300 mg/g)、大量蛋白尿组(ACR≥300 mg/g)。正常蛋白尿组36例，男20例、女16例，平均年龄(52.53±10.67)岁；微量蛋白尿组44例，男24例、女20例，平均年龄(51.50±11.83)岁；大量蛋白尿组40例，男26例、女14例，平均年龄(53.76±12.21)岁。另选取同期30例健康体检者作为对照组，男17例、女13例，平均年龄(54.46±12.14)岁。排除标准：(1)合并心、肝功能不全；(2)合并严重脑血管病；(3)合并糖尿病酮症酸中毒、感染、发热；(4)合并出血性或凝血性疾病；(5)妊娠期及哺乳期妇女。各组年龄、性别等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂 采用瑞士罗氏公司生产的Cobas E 602全自动电化学发光分析仪检测尿TGF-β1、8-OHdG水平，试剂由上海雅吉生物科技有限公司提供。采用美国贝克曼库尔特公司生产的AU5821全自动生化分析仪检测血肌酐(Scr)、尿微量清蛋白、尿肌酐水平，试剂由美国贝克曼库尔特公司提供。

1.3方法 收集所有研究对象24 h尿，准确记录尿量，混匀后留取10 mL采用酶联免疫吸附试验检测TGF-β1、8-OHdG水平，这两项检测结果均用相应尿肌酐予以校正，参考范围：TGF-β1≤8.5 pg/μmol；8-OHdG≤36.2 ng/mg。采用散射比浊法检测尿微量清蛋白，酶法检测尿肌酐，根据尿微量清蛋白、尿肌酐水平计算ACR。所有研究对象在禁食8 h后采集清晨空腹静脉血3 mL于分离胶促凝采血管中，离心后血清用于检测Scr。

2 结 果

2.1各组检测指标水平比较 与对照组比较，微量蛋白尿组、大量蛋白尿组ACR水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组TGF-β1、8-OHdG水平高于对照组，且随尿蛋白水平的增加TGF-β1、8-OHdG水平呈递增趋势，各组间比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。大量蛋白尿组Scr水平高于正常蛋白尿组、微量蛋白尿组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组检测指标水平比较

2.2各组TGF-β1、8-OHdG阳性率比较 各组中TGF-β1、8-OHdG联合检测的阳性率均高于TGF-β1、8-OHdG单独检测，差异有统计学意义(P<0.05)。微量蛋白尿组、大量蛋白尿组TGF-β1、8-OHdG单独检测及联合检测的阳性率均高于正常蛋白尿组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组TGF-β1、8-OHdG阳性率比较[n(%)]

续表2 各组TGF-β1、8-OHdG阳性率比较[n(%)]

3 讨 论

DN作为糖尿病常见的微血管并发症之一，其患病率已超过慢性肾小球肾炎,成为我国终末期肾脏病的首要病因[5-6]。微量清蛋白尿是DN早期的主要临床表现，也是DN患者心血管疾病发生的独立危险因素[7]，但目前尚无有效药物能完全消除蛋白尿，因此，积极寻找早期DN的诊断标志物将有利于DN的预防及治疗。

Scr是临床常用的反映肾脏滤过功能的指标之一，其特异度高，但灵敏度低，多用于评估中晚期肾损伤[8-9]。本研究结果显示，大量蛋白尿组Scr水平高于正常蛋白尿组、微量蛋白尿组和对照组，但正常蛋白尿组、微量蛋白尿组与对照组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示Scr水平在晚期DN中明显升高，但在早期DN中水平变化不明显，不能灵敏地反映早期肾损伤。ACR是公认的DN诊断及筛查的重要指标之一，已广泛应用于临床工作，但在本研究中，正常蛋白尿组ACR水平与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，提示ACR在DN正常蛋白尿期的诊断中具有一定局限性。

既往研究显示，TGF-β1、8-OHdG在评价DN治疗效果方面优于尿微量清蛋白[10]，但其能否作为DN早期筛查的指标，目前相关研究较少。TGF-β1是TGF家族成员之一，在肾组织中表达水平最高，其主要功能是调节细胞外基质的形成，包括促进系膜细胞、肾小球上皮细胞等细胞外基质的合成，并抑制基质降解酶，阻止细胞外基质降解；同时，TGF-β1还能刺激肾小球系膜细胞转化为肌成纤维细胞，进而合成、分泌间质胶原，是早期肾脏纤维化的标志物之一。有研究证实，高糖、糖基化终末产物、肾小球内压升高均可诱导体外培养的人肾小球系膜细胞发生过度增殖并上调TGF-β1水平[11]。有研究发现，TGF-β1水平与尿蛋白定量之间存在正相关[12]。本研究显示，正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组 TGF-β1水平均高于对照组，且随尿蛋白水平的增加TGF-β1水平呈递增趋势，提示其可用于评估肾损伤，且其水平变化与肾损伤的严重程度有关。8-OHdG是活性氧自由基攻击DNA分子中鸟嘌呤碱基第8位碳原子而产生的一种氧化性加合物，其作为反映内源性因素对DNA氧化损伤作用的生物标志物，可评估体内氧化损伤程度和氧自由基水平[13]。氧化应激是DN发病机制之一，在DN患者中，体内抗氧化酶表达受到抑制，产生的活性氧和超氧自由基增多，造成肾脏间质细胞DNA损伤和凋亡[14]。此外，因为8-OHdG不受饮食影响，尿液中8-OHdG水平稳定性高，放置时间长短不影响检测结果，故8-OHdG水平检测可较好地反映氧化应激参与DN的发生、发展情况[15-16]。本研究结果显示，正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组8-OHdG水平均高于对照组，且随尿蛋白水平的增加8-OHdG水平呈递增趋势，说明在DN患者中存在DNA氧化损伤，且损伤程度随病情进展而加重。

进一步分析各组TGF-β1、8-OHdG的阳性率，结果显示，TGF-β1、8-OHdG联合检测的阳性率明显高于单个指标，提示将TGF-β1、8-OHdG联合检测的结果用于诊断DN将可减少漏诊率，能有效反映DN患者早期肾脏纤维化和氧化应激水平，可为DN早期干预提供重要的理论依据。

综上所述，尿TGF-β1、8-OHdG检测能够较灵敏地反映DN患者早期肾损害，两者联合检测在DN早期筛查中具有一定价值，值得临床推广应用。