动物源金黄色葡萄球菌分离株mecA基因的表达及耐药性分析

在自然界中SA广泛存在，可形成数种毒力因子，为人畜共患的一种常见病原菌。SA作为食源性致病菌，已经成为影响公共卫生的重大难题之一。MRSA具有多重耐药性，检出率有逐日增加的趋势，动物源MRSA有经环境或动物食品消费链向人类传播的风险。金葡菌是诱发牛乳腺炎的主要病原菌，现阶段针对牛源金黄菌耐药性的研究较多，但对其他动物源的金黄菌耐药性研究较少见。本文筛选出MRSA菌株，利用PCR检测mecA基因，现将检测情况作出如下报告。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 由项目组实验室提供动物源金葡菌，共计45株。药敏试验质控株ATCC25922、ATCC43300。

1.1.2 仪器与设备 MIC药敏板、培养箱及PCR仪等。

1.2 方法

1.2.1 药敏试验 利用微量肉汤稀释法对10种药物的敏感性进行检测。在具体操作时使用灭菌棉签蘸取3～5个待测单菌落，使其悬浮在NaCI溶液中（3mL 0.45%），用比浊仪把细菌浓度调整至适宜区间内，混合摇匀，由MHB试管内吸取50μL并将其安放在药敏板各孔，在36℃恒温箱中培养24h后，判断结果。

1.2.2 检测MRSA菌株 采用头孢西丁制片法进行。严格依照CLSI有关规定，把待测菌株涂擦在琼脂平板上后，将头孢西丁纸片贴上，恒温培养后利用反射光阅读纸片试验结果。

1.2.3 检测mecA基因 依照ZHANG等方法合成mecA引物，目标片断为146bp，工作浓度为20pmol/L，-20℃低温环境下保存。利用DNA模板取多个菌落并将其放置于EP管内，水浴、离心处理后，取上层清液作为模板，保存待用。提取8μL PCR产物，用2%琼脂糖凝胶电泳，在成像仪上观察结果。

2 结果

2.1 药敏试验 金黄菌对莫匹罗星、万古霉素的耐药率为0，对利福平的耐药率为3.8%，对青霉素、链霉素、甲氧氨苄嘧啶、泰妙菌素、氯霉素的耐药率依次为80.7%、74.3%、78.3%、68.1%、56.5，对红霉素的耐药率为92.7%。

2.2 MRSA检测情况 共检出23株MRSA菌株，检出率为51.1%。其中，发病样品、健康畜禽的粪便样品、环境样品中分别检出5、11、7株，其中发病样品只由猪内脏中检出MRSA。

2.3 mecA基因检出情况 纳入本次研究的样品中，共计检测出含有mecA基因的菌株23例，占51.1%，包括MRSA21株、MSSA2株。MRSA内mecA阳性21株，阴性2株，mecA比例为91.3%；MSSA中mecA阳、阴性分别有2株、18株，mecA比例为10.0%。MRSA内mecA基因携带率明显高于MSSA。

3 结论

本次试验研究表明，除了万古霉素、莫匹罗星外，金葡菌对其他药物均产生了耐药性。对利福平的耐药率为3.8%，对青霉素、链霉素、甲氧氨苄嘧啶的耐药率均在70～81%之间，而对红霉素的耐药率高于90.0%。头孢西丁纸片法检测出MRSA共计23株，占51.1%；并且发病样本中只从猪内脏样品中检测出MRSA，这可能是因为生猪在疾病预防、治疗过程中未能科学使用抗生素所引发的。

mecA基因检出率为51.1%，MRST内mecA基因携带率明显高于MSSA，与国内部分研究结果相一致。MSSA中有2株检测出mecA基因，药敏试验表明其对氯霉素敏感，但耐药情况比不携带mecA基因更为严重[2]。

结合本文研究的内容发现，携有mecA基因的金葡菌具有较广泛的耐药性、敏感性等数个表现，MRSA、MSSA内均能检测出mecA基因。采用PCR能快捷、精确的检测到mecA基因，但如果依照mecA基因去鉴别MRSA，则应关注假阴性的情况。