IL-17基因多态性水平与慢性HBV感染患者转归的关系

张晓芳 刘先进

慢性乙型肝炎为临床常见肝病类型，随着疾病进展，慢性HBV感染可进展至肝硬化、肝衰竭阶段，并显著增加癌变风险[1-2]。目前有关HBV感染发病机制多涉及宿主免疫因素，白介素-17(IL-17)具有一定免疫致病性，有学者还提出IL-17与机体免疫密切相关，但目前有关IL-17的报道不尽一致[3-4]，这可能与其基因多态性分布有关。本研究纳入54例慢性乙型肝炎和54例无症状慢性HBV感染者作为研究对象，探讨IL-17基因多态性对患者预后的影响。

资料与方法

一、临床资料

选取南通市第三人民医院2017年6月至2018年6月收治的54例慢性乙型肝炎患者作为观察组，另纳入同期54例无症状慢性HBV感染者作为对照组。本研究经我院伦理委员会批准。无症状慢性HBV感染和慢性乙型肝炎诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》标准[5]。排除标准：①肝衰竭、肝癌患者；②合并其他肝炎病毒感染者；③合并有酒精性肝病者。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

二、检测方法

以ELISA法检测血清IL-17水平，操作方法参照试剂盒(上海瑞番生物科技有限公司生产)。HBV DNA含量采用PCR法结合荧光探针法进行定量检测，试剂盒购自北京华大吉比爱生物技术有限公司，操作按试剂盒说明进行，HBV DNA含量>1.0×103拷贝/mL为HBV DNA含量异常[6]。

IL-17相关基因检测：提取总DNA，然后以PCR扩增仪检测IL-17 rs763780位点基因及基因型频率分布，设计引物见表2。试剂盒购自上海之江生物科技股份有限公司。PCR法反应总体系25 μL，包括Taq Man探针1.25 μL、DNA原液和双蒸水11.25 μL及power Taq master min 12.5 μL。在95 ℃下对样品进行预变性和变性处理5 min和30 s，再以60 ℃退火30 s，45个循环。记录rs763780位点CC、CT及TT基因型分布。

三、统计学处理

结 果

一、血清IL-17、HBV-DNA结果

两组血清IL-17水平和HBV DNA含量>1×103者比例差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

二、 IL-17相关基因结果

两组IL-17 rs763780位点等位基因分布频率和基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表1 两组基本资料比较

表2 引物序列设计

表3 两组IL-17及HBV DNA水平比较

表4 两组IL-17基因与等位基因比较

三、不同IL-17 rs763780位点基因型患者预后比较

108例患者中IL-17 rs763780位点TT基因型57例，出院后1年进展至肝硬化者17例，肝硬化发生率为29.82%，CC基因型11例，1年内无进展至肝硬化病例，CT基因型40例，1年进展至肝硬化者5例，肝硬化发生率12.50%，在IL-17 rs763780位点中，TT与CC、CT基因型患者肝硬化发生率差异有统计学意义(χ2=4.374，4.023；P=0.036，0.045)。

讨 论

IL-17具有强大的激活和促炎作用，不仅可通过加快黏附因子的释放，激活炎症细胞，还可与IL-6、TNF-α发挥协同作用，扩大炎症，加快HBV感染病理进程[7-8]。本研究结果显示，慢性乙型肝炎患者血清IL-17显著高于无症状慢性HBV感染者，提示血清IL-17有助于评估HBV感染患者病理状态。HBV感染进展至肝硬化与HBV病毒侵袭能力和肝功能有关[9-10]。本研究发现在慢性乙型肝炎患者中，HBV DNA含量异常升高者显著多于无症状慢性HBV感染者者，推测慢性乙型肝炎较无症状慢性HBV感染者感染者进展至肝硬化风险更高。

有研究显示，慢性HBV感染患者与健康人群IL-17 mRNA水平差异显著，而血清IL-17水平与慢性乙型肝炎肝功能损伤严重程度密切相关[11]。姚思敏等[12]还认为，IL-17基因突变可能增加患者的易感性，促进肝炎进展，造成不同的病理预后。IL-17 rs763780位点位于IL-17编码基因第3个外显子区，已有报道显示其与胃癌、多发性硬化症相关[13-14]。本研究中TT基因型占慢性乙型肝炎患者IL-17 rs763780位点基因型的64.81%，且与无症状慢性HBV感染者表达水平差异显著，说明TT基因型、T等位基因是HBV感染病理进展的重要因素，HBV感染患者不良预后多发生于TT基因和T等位基因患者，本研究结果也显示，IL-17 rs763780位点TT基因型患者肝硬化发生率更高。但患者预后与肝功能状态、营养水平及遗传等多种因素相关[15]，使报道结果存在差异，还有待今后扩大样本量，进行区域间比较研究。

综上，IL-17是影响HBV感染的重要细胞因子，IL-17 rs763780 位点T等位基因、TT基因型是慢性HBV感染的易感宿主基因。