不规则抗体阳性和部分稀有血型样本库的建立和应用

李 京，徐 群*，吕红娟，周 娜，潘英芳，宋永红

（山东省血液中心血型参比研究室，山东 济南 250014）

随着输血事业的发展，各输血实验室的仪器设备更加标准化，方法也更加敏感，不规则抗体阳性和正反定型不符样本检出率大大提高，只有准确地鉴定血型和抗体特异性，并有针对性的输血，才能提高输血治疗效果。本室常年开展新生儿溶血病、疑难血型鉴定和疑难配血等红细胞血型和血型抗体检测，积累了丰富的临床经验，同时也收集了一些常见和部分罕见的有临床意义的不规则抗体阳性和正反定型不符样本。通过整理，拟建立一个不规则抗体阳性和稀有血型样本库，供大家观摩、模拟和练习，从而能尽快提高实验者的操作技能。报告如下。

1 资料与方法

1.1 样本

部分来自临床送检患者，部分来自本中心献血员。

1.2 试剂和仪器

抗A、抗B、抗AB、抗H、抗A1、抗D（IgM、IgG、IgM+IgG）、IgM型抗C、抗c、抗E、抗e、抗M、抗N、抗P1、抗Lea、抗Leb抗 Jka、抗Jkb、IgG型抗Fya、抗Fyb、A1细胞、A2细胞、A2B细胞、B细胞、O细胞、筛选细胞、谱细胞、抗球蛋白（IgG、IgG+C3d、C3d）、凝聚胺、微柱凝胶卡分别来自上海血液生物医药有限责任公司、Sanquin公司Diamed公司。离心机选用 KUBOTA公司的KA-2200型和HITACHI公司的himac MC450 Blood cell washing Centrifuge。

1.3 方法

均采用试管法和微柱凝胶方法。

1.3.1 ABO血型

首先用抗A、抗B、抗AB血清、A1细胞、B细胞做正反定型，如发现不符，则用抗A1、抗H血清、A2细胞、A2B细胞检测是否具有亚型特点，同时用抗A或抗B血清对红细胞做吸收放散实验，以证实红细胞上是否具有较弱A或B抗原，用O型红细胞检测血清中是否存在IgM型不规则抗体，并放置室温、4°C、37°C，比较不同温度下的反应情况，或选择不同厂家的试剂进行比较，如果条件允许，可以做唾液血型物质检测。

1.3.2 RH血型

首先用IgM抗D血清和红细胞在盐水介质中检测，如结果为阴性，再用IgG抗D或IgM+IgG抗D采用抗球蛋白方法检测,以排除弱D或部分D血型。RH表现型选用IgM型C、c、E、e、抗血清和红细胞，在室温和37°C盐水介质中检测。

1.3.3 其他血型

M、N、S、P1、Lea、Leb、Jka、Jkb抗原均采用盐水试管法，s、Fya、Fyb抗原均采用抗球蛋白法。

1.3.4 直接抗球蛋白试验

用IgG+C3d、IgG、C3d试剂检测，其中IgG+C3d采用试管和微柱凝胶法，IgG、C3d均采用试管法。

1.3.5 不规则抗体筛选

用国内和国外一套或两套筛选细胞（每套3个细胞），采用盐水、抗球蛋白（试管、微柱凝胶）、凝聚胺等方法，并做自身对照。

1.3.6 不规则抗体鉴定

选用国内和国外一套或两套谱细胞（每套10～16个细胞），按3.5的方法，同时做针对性抗原检测，以证实抗体鉴定的准确性。

1.3.7 抗体效价

根据不同抗体特异性，选用盐水、抗球蛋白等方法在室温、4°C、37°C进行检测。

1.3.8 交叉配血

首先根据抗体特异性，选用盐水、抗球蛋白等方法，筛选没有针对抗体特异性抗原的红细胞，再与患者血清按照1.3.5的方法进行配血。

1.3.9 样本保存和练习

样本可以室温或冰冻保存。练习者可以现场观摩、亲自操作，也可以通过接收本室发放的质控样本，参加血型室间质控。

2 结 果

2.1 检出的ABO血型为

A1、A2、A2B、A3、B3、A3B、AB3、Ax、Bx、AxB、ABx、B(A)、CisAB、等。

2.2 RH血型

RHD阴性、弱D或部分D，表现型包括：ccdee、Ccdee、CCdee、ccdEe、CcdEe等。

2.3 其他血型

M型、N型、S型、s型、P2型、Lea-b+、Lea+b-、Jka+b-、Jka-b+、Fya（-）等。

2.4 直接抗球蛋白试验

直抗阴性和直抗阳性（IgG阳性、IgG+C3d阳性、C3d阳性）。

2.5 单特异性抗体

抗D、抗E、抗c、抗C、抗e、抗M、抗N、抗S、抗P1、抗Lea、抗Leb、抗Jka、抗Jkb、抗Fya、抗Fyb等；多特异性抗体为：抗D+C 、D+E、C+D+E、D+Lea、C+e、C+D+E+Jkb、c+E+Jkb、M+E等。

检出的所有抗体，均做了抗体效价，需要输血的患者根据抗体的异性，均进行了针对性配血。

从2001年到2005年曾连续五次在本地区开展血型室间质控。发放样本的血型包括：ABO系统的A1、A2型、Rh系统的RhD阴性和弱D或部分D型；不规则抗体包括：抗D、抗D+C、抗E、抗c、抗M等。

3 讨 论

（1）为患者提供输注合适相容的血液或血液成分过程中，从献血员筛选、血液处理、供受双方血样检验到相应血液的发放，输血实验室在这条“输血链”中扮演着重要角色。输注不相容或不合适的血液，可使患者产生不良反应甚至死亡，因此对于临床上血型不明确或配血不合者，一定要按正确的程序处理，防止输血反应的发生。本实验室拟建一个不规则抗体阳性和稀有血型样本库，通过库中样本练习，帮助实验人员找到正确处理疑难血型和疑难配血的程序和方法。

（2）影响ABO血型的因素有很多，如ABO亚型（血清中存在不规则抗A1或抗B抗体）、白血病等其他恶性疾病导致的抗原减弱、近期输注了ABO不同型的红细胞及ABO不同型的骨髓移植、新生儿或老人抗A、抗B抗体阴性或减弱，淋巴瘤、骨髓瘤患者血清出现缗钱状凝集、血清中的不规则抗体和冷自身抗体等。因此，本文对ABO血型正反不符者采用了多种试剂和方法进行检测，保证了血型鉴定的准确性。

（3）应用IgM和IgG抗D进行RHD血型检测，可排除弱D或部分D型。特别是血站输血实验室，如果对初筛为RhD阴性的血液不进行确认，将弱D型当做RhD阴性，患者输注后可能产生抗D抗体，对今后输血及妊娠造成影响，已有DVI红细胞用于D阴性妇女第1次妊娠中，引起了第2中等程度HDN的报道，应引起高度重视[1]。

（4）通过对RhD阴性献血员的表现形检测，可了解本地区Rh表型分布特点，特别是针对RhD阴性血清中产生抗D+C、D+E+C 、抗D+C+E+Jkb、抗 E者，可快速从各种表型的RhD阴性献血员中选择没有C或E及Jkb抗原的血液进行配血，否则随意输注RhD阴性血，会造成血液浪费，增加病人负担，延误治疗时间。

（5）对于配血不合的病人，通过抗体筛选和鉴定，可检出有临床意义的不规则抗体，而临床有意义抗体一般指：引起新生儿溶血病，引起溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少的，在37°C反应的同种异型抗体[2]。利用多种筛选细胞和谱细胞，采用多种方法才能准确检出各种不规则抗体，尤其是在多特异性抗体鉴定时，一套筛选细胞和谱细胞的抗原性比较局限，不能准确鉴定抗体特异性。另外，抗体的性质不同，在不同介质和不同温度的反应也不相同，检测方法也会有差异。每种方法都有一定的局限性，所以要用多种不同方法在不同介质和温度观察结果。

（6）通过抗体效价检测，可了解抗体的强弱。

（7）交叉配血时，首先要根据抗体性质，选用不同方法、温度和介质筛选针对性抗原阴性者，由于每个血型系统抗原频率不同，筛选的献血员数量也不同。筛选时要参考其抗原频率，进行筛选，多特异性抗体患者筛选时，要先筛选频率较高者，再选频率较低者。同时利用多种方法进行交叉配血，使其在特异性方面互相验证，确保临床输血安全有效。

（8）血型室间质控 参考全国血型室间质控的形式，结合本地区的实际情况，发放的样本从易到难，包括了血型检测、抗体筛选和鉴定、交叉配血，同时包括了检测方法和试剂厂家、结果报告和发放的全部过程。各实验室在实验方法、试剂、仪器等方面更加标准化，提高了本地区输血技术水平。

（9）库中的样本，采用了国内外多个试剂厂家的试剂和方法进行检测，保证了结果的准确性，并且可以根据微机系统存储信息，随机取样，随时补充，样本始终处于流动状态，适合长期使用练习。随着时间的推移，会补充更多稀有血型和多特异性抗体的练习，使库中样本种类更加丰富。