新鲜果蔬农残快速检测中常见问题及处理——以CL-BIII型八通道速测仪为例

罕丽华，俸 丽，李海英，陈加贺，王忠诚*

（1.勐海县农产品质量安全检测站，云南勐海666200，2.双江县勐库镇农业农村服务中心，云南双江677304）

酶抑制法测定新鲜果蔬农药残留情况是目前中国控制初级农产品高毒农药残留的一种有效方法，也是目前国内和云南省应用最为广泛的果蔬农药残留快速检测方法[1]，广泛用于县、乡（镇）、合作社、超市及蔬菜、水果生产基地和批发市场等区域和场所。农残速测仪在基层被广泛应用，然而由于基层检测人员的学历、专业、年龄差异较大，且多为兼职，人员调动频繁，开展检测工作常面临各种难题。农药残留快速检测法具有用时短、成本低，对检测人员要求不高，易于在基层推广等优点。

速测法对于基层人员快速筛选不合格新鲜农产品，提高农产品质量安全监管水平具有重要作用。现对勐海县乡（镇）级农产品质量安全检测体系运行8年使用CL-BIII 型八通道农残速测仪器过程中常见的问题及处理方法进行梳理总结。

1 快速检测操作及结果判定

1.1 实验操作步骤

1.2 判定依据

快速检测仪检测对象是新鲜蔬菜和水果中有机磷类和氨基甲酸酯类农药[2]。检测方法依据GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》。判定方法依据酶抑制率测定值小于50%为合格；测定值超过50%为不合格，建议重复测定1 次，若测定值仍然超过50%，则初步判定为不合格样本，需应用大型仪器设备如气相色谱、液相色谱等进一步定性定量农药成分及各组分含量。

2 常见问题及处理

2.1 联机失败

窗口提示仪器连机失败时，应检查仪器设备通讯串口是否匹配正确。点击我的电脑右键-管理-设备管理器-端口-查看串口是 COM1 口、COM2 口、COM3 口还是COM4 口，再打开检测平台查看设置菜单栏-设备设置-参数设置-选择与电脑端匹配的串口，配对成功按确定后，需重启检测平台。当仪器首次安装、卸载重新安装或改变USB 插入端口时联机失败现象时有发生，也有少数联机失败案例是由于数据串口线的损坏引起的，应购买RS-232 串行9 针型串口重新安装联机。

2.2 试剂配制错误及保存不当

CL-BIII 型速测仪配套的未拆封检测试剂盒含有2 袋甲乙粉末，即磷酸氢二钾和磷酸二氢钾盐晶体颗粒。配制时应打开甲乙粉末包装放进洁净玻璃烧杯里，加蒸馏水配制成510 ml 的缓冲盐农残提取液。若配制溶液时因疏漏，只放了1 包甲试剂粉末或者乙试剂粉末，会导致试剂空白对照测定无效，无法进入下一程序。

快速检测试剂盒规格为186 批次/盒，内含3 ml/瓶冻干剂状态的酶 6 份、3 ml/瓶底物 6 份、3 ml/瓶显色剂1 份、白色晶体提取液2 份。未拆封的试剂应保存于0 ℃以下环境的冷冻箱内，保质期为1 年。配制好的试剂及使用过的试剂，需保存在4 ℃条件下的储藏箱内。配制好的酶、底物保质期为1 周，提取液为1年，显色剂应避光保存，且有效期为半年。配制好的试剂应贴上标签，标签内容应至少包含试剂名称、唯一性编号、配制人、配制时间，保质期期限等内容。决不允许使用过期试剂药品开展检测工作。

已配制的试剂应按要求保存，从冰箱取出时应冷却至室温，或用手温捂热，使酶恢复其活性再使用。酶的空白对照测试3 min 吸光度变化差值应在0.3 以上，才可进一步操作。

2.3 检测盲区

盲区体现在2 个方面，一是易产生假阳性型果蔬对抑制率的干扰[3]，可能会造成结果偏高。二是色素含量较高的果蔬，屏蔽了部分吸光度，可能引起测定结果偏低。为减小误差，软件配套特殊果蔬《果蔬农药残留比对数据库》来校准因假阳性及色素吸收光谱带来的干扰。当检测如韭菜、葱、蒜等易产生假阳性的蔬菜，以及番茄、红苋菜、胡萝卜等色素含量较高的样本时应单独设置检测通道导入标准对照库相应对照曲线进行样本分析。

2.4 仪器调0和调100参考线不到位

仪器调0 和调100 是对仪器透射光通道的调试，先调试透射值0 还是100，其先后顺序不影响测定结果。检测平台谱图横坐标为测定时间，纵坐标为投射比（t）。调0 值时放入黑块，此时光束无法通过，Y=0 的横轴上应有红色参考线通过。调100 值时通道为空，光速应100%通过，Y=100 的横轴上应有红色参考线通过，运行30 s 后，点击调试成功按钮。在调试0 值和100 值的过程中，看不到参考红线或红线低（高）于透射值的情况，应点击“结束分析”，重启“开始对照分析”继续调试，直到透射比Y=0 或Y=100 的横轴上有红色直线通过才算成功。若以上操作仍不能完成调试，则可能是仪器内部光源或通道已损坏，需要返厂维修。

2.5 抽（取）样不规范

抽样、取样不规范的细节问题时有发生，抽取的样本应按《农药残留分析样本的采样方法》（NY/T 789-2004）要求，填好抽样单，贴上标签，标签应至少包含样品名称、编号、抽样人、时间、地点等内容。当样本到达实验室后，应立即开展检测前处理工作，将样本去除不可食部分，截成小段后混匀，采用四分法缩分。称样时样本剪成1～2 cm 见方即可，不必剁碎，以免造成难以提取澄清溶解液和引起更多的色素干扰。当提取液较浑浊时应过滤后再测定。

2.6 结果未保存

仪器运行测定环节耗时3 min，测定完毕，检测平台会弹出样本是否合格的窗口，应及时点击保存按钮。若直接关闭窗口，将导致数据直接消失，前面的工作都是徒劳。若发现窗口弹出的是不合格样品的提示，应再重复测定1 次，以避免实验误差造成误判。

2.7 实验环境条件不满足要求

勐海县温湿度较大，应保证室内检测环境温度在（23±5）℃，湿度控制在（65±15）%。配制试剂及样品前处理应在有洗涤池旁的实验台面上进行。测定样品时应将检测池盖盖紧。用完的比色皿应及时用自来水清洗干净，再用蒸馏水清洗，倒置在滤纸上，待自然风干后及时放进比色皿盒子里。实验完毕，应做好使用仪器情况登记，及时清洗所用器皿，整理实验台面，保证实验室干净整洁有序。实验室还应有关水、关电、禁止吸烟提示及无关人员禁止入内的提醒标志。

2.8 档案不完整

档案工作是检测工作的一项重要内容，检测流水单或检测统计单应及时打印并跟随对应抽样单归档。档案还应含仪器使用说明书、实验操作规程、检测工作年终总结、年初目标责任计划书、现场抽样及检测图片、开展工作的简报等内容。

2.9 其他问题

实验的开展应至少有2 名检测人员互相监督和配合完成，严格按照操作规程的步骤和时间规定进行，不能急于求成，更不能减少步骤。

为减小误差，样品应做平行对照，并规定第1 个样品和每10 个样品间设置平行对照。

加入底物后，应迅速混匀，立即测试。

移液枪用完要将量程调到最大值，用毕应放置在移液枪架上，不能平放在实验桌面上，以免提取液回流造成枪体污染。调量程时应遵循数值从大到小的原则。一次性枪头使用后应及时丢弃，避免样本交叉污染。