福建省禽源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

陈秀琴 张世忠 江 斌 林 琳 郑 敏 林 黄梅清＊

（1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 福州 350013）

大肠杆菌普遍存在于环境中， 包括哺乳动物和禽类的消化道内，其中的部分血清型可致病，成为环境、食品、水等污染的重要指示细菌[1]。 此外，畜禽源致病大肠杆菌还可传染人，从而引发各种疾病[2]。 禽大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌引起的多种病的统称，包括大肠杆菌性气囊炎、腹膜炎、输卵管炎等[3]。

禽养殖场中普遍使用小剂量抗生素用于促生长和预防疾病， 但是持续使用抗生素会导致细菌产生耐药性。大部分抗生素并不能完全在肠道内被吸收。有文献报道给鸡饲喂的抗生素高达90%随粪便排出体外[4]，从而导致细菌产生耐药性。 据估计，欧洲每年大约有超过3.3 万人死于抗生素耐药感染，到2050 年， 全球每年将有1 000 万人死于抗生素耐药[5]。 为了解福建省禽源大肠杆菌的抗生素耐药性情况， 对若干个发病养殖场进行大肠杆菌分离鉴定及药物敏感性研究， 以期为福建省禽大肠杆菌病的防控提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 病料样品来源 2018-2019 年采集于福建省中大型养禽场。

1.2 培养基与试剂 麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、革兰氏染色液及大肠杆菌IMViC 生化鉴定盒均购自广东环凯微生物科技公司， 药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司。

1.3 细菌分离纯化 取病死禽的心、肝直接在麦康凯琼脂平板上划线培养，于37 ℃培养24 h，挑取单个红色菌落接种于普通营养肉汤，37 ℃、150 r/min振荡培养12 h。 将培养好的菌液置于4 ℃冰箱，用于生化试验鉴定及药物敏感性试验。

1.4 生化试验 将符合大肠杆菌形态特征的细菌，按照说明书要求接种于大肠杆菌IMViC 生化鉴定试管中 （靛基质、MR、VP、 枸橼酸盐），37 ℃培养24 h，观察并记录结果。

1.5 药敏试验 吸取100 μL 经鉴定好的大肠杆菌菌液到营养琼脂培养基上，用L 型一次性涂布棒涂抹均匀， 待菌液完全被培养基吸收后， 选取以下10 种常用抗生素：丁胺卡那霉素、多黏菌素B、复方新诺明、庆大霉素、头孢菌素、四环素、呋喃唑酮、链霉素、林可霉素、多西环素，将药敏片贴到营养琼脂表面，37 ℃培养18 h 后，观察测量抑菌圈的大小。

2 结果与分析

2.1 细菌的分离鉴定结果 分离菌株在麦康凯琼脂平板上形成红色、圆形、表面光滑湿润、边缘整齐的菌落；该菌落在伊红美蓝平板上呈紫黑色、表面光滑湿润并带有金属光泽；培养物进行革兰氏染色，镜检结果为革兰氏阴性、 两端钝圆的短杆菌。 根据以上判断方法， 从20 份样品初步分离到15 株禽源大肠杆菌，包括10 株鸡源大肠杆菌和5 株鸽源大肠杆菌。

2.2 生化鉴定结果 将分离的15 株细菌进行大肠杆菌IMViC 生化试验鉴定， 结果15 株细菌靛基质试验和MR 试验均为阳性，VP 试验和枸橼酸盐试验均呈阴性。 以上生化试验结果均符合经典大肠杆菌的生化特征。

2.3 药敏试验结果 对分离的15 株禽源大肠杆菌进行药物敏感性试验。药物敏感性的判断标准如下：抑菌圈直径15.1～20 mm 者为高度敏感；直径10.1～15 mm 者为中度敏感； 直径在10 mm 及以下者为耐药[6]。 由表1 可知，大部分菌株对复方新诺明（13/15）、头孢菌素（10/15）、四环素（12/15）、林可霉素（14/15）、多西环素（10/15）耐药；部分菌株对多黏菌素 B（9/15）、呋喃唑酮（9/15）中度敏感；大部分菌株对丁胺卡那霉素（10/15）高度敏感。

3 讨 论

大肠杆菌是一种条件致病菌， 它广泛存在于饲料、垫料、空气中，在动物机体抵抗力下降、冷热应激、 环境恶劣等情况下可诱发大肠杆菌病。 所有日龄的禽都可发病，尤其是雏禽更易发。禽大肠杆菌病在养殖场中广泛存在， 容易造成家禽感染发病甚至死亡，使养殖场遭受经济损失[7]。

本试验从福建省多个规模化养殖场分离到15 株禽源大肠杆菌。 通过革兰氏染色结果为革兰氏阴性菌； 在麦康凯琼脂选择培养基和伊红美蓝鉴别培养基上培养，结果均符合大肠杆菌的特性；生化试验结果表明，所分离的15 株细菌均为大肠杆菌。 药物敏感性试验结果表明，大部分菌株对复方新诺明、头孢菌素、四环素、林可霉素、多西环素耐药；部分菌株对多黏菌素B 和呋喃唑酮中度敏感；大部分菌株对丁胺卡那霉素高度敏感。在养殖生产中，由于大量无规范地使用抗生素， 且大量的抗生素随动物排泄物排到环境中，导致细菌耐药性不断加强[8]。 因此，养殖场应加强对大肠杆菌耐药性的监测， 使用敏感药物治疗，避免盲目使用抗生素。

表1 分离菌株药敏试验结果