新疆南疆边境地区优势蜱种及其基因多样性分析

唐莉娟，刘 丹，卜三平

巴音郭楞职业技术学院，新疆库尔勒 841000

蜱主要寄生于动物体表，可通过直接叮咬传播疾病。据报道,世界上已经发现了900多种蜱。目前我国共计121种硬蜱科,10种软蜱科,但没有纳蜱。通过蜱虫能够传播的病原体：病毒大约有126种、立克次体至少20种、原虫和衣原体32种等。因此,加强对蜱传疾病的相关研究是十分必要且刻不容缓的。

新疆是中国陆地边境线最长的省份之一，南疆地区就与吉尔吉斯斯坦、巴基斯坦、塔吉克斯坦、阿富汗、印度五个国家接壤。新疆除了拥有经济地理位置的优势之外,还拥有这一广袤地区独特的地理景观以及丰富多样的物种。因此,其体表蜱种受复杂的地理景观影响丰富而又独特,同时这些蜱种也是蜱传疾病的媒介生物。但新疆地区(尤其是南疆)关于蜱传病毒、细菌和寄生虫种类和分子流行情况等本底数据仍不清楚。实时监测新疆南疆边境地区蜱传疾病有利于国际间传染病“联防联控”数据的共享。

1 材料与方法

1.1 蜱的采集

201 9年3月～2020年6月,在新疆南疆皮山县、叶城县、乌什县、乌恰县、拜城县5个县市共采集家畜体表寄生蜱和游离蜱528只。将采集的蜱按采集时间和地点分类并且详细标记蜱虫的数量、蜱的状态(死蜱、活蜱、饱血蜱以及非饱血蜱)和宿主。

1.2 蜱形态学鉴定分析

使用普通光学显微镜和体视解剖显微镜对采集到的蜱虫进行形态学鉴定，鉴定标准主要参照Walker主编的《寄生蜱鉴定指南》[1]和于心主编的《新疆蜱类志》[2]，

1.3 蜱种分子生物学鉴定

1.3.1 引物设计：通过阅读大量文献以及本实验室前期对蜱虫的研究成果，最终决定参考文献中的已知引物，委托上海祥音生物工程技术服务有限公司合成。

1.3.2 PCR扩增：PCR总反应体系25 μL：DNA模板1.5 μL，引物PF、PR各2 μL，10×PCR Buffer 2.4 μL，d NTP 2 μL，rTap酶0.6 μL，去离子水16.5 μL。扩增程序：94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s，54 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,37个循环，72 ℃延伸8 min。ddH2O为阴性对照,PCR扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶电泳,观察检测目的片段的大小。

2 结果

2.1 各县市蜱数量以及蜱种构成

本调查5个南疆县市共采集528只蜱虫，采样结果显示均为图兰扇头蜱。

2.2 PCR扩增结果

16S rDNA、12S rDNA和COI基因片段由普通PCR扩增，蜱种扩增的片段分别在460 bp、400 bp和890 bp左右的位置出现目的条带，与预期片段的大小一致。

2.3 蜱线粒体基因扩增序列分析

比对扩增到的蜱线粒体基因序列，可以证实本次采集到的5个县市的寄生蜱分子生物学分析与形态学方法鉴定结果一致,均为图兰扇头蜱。

2.4 蜱种系统发育分析（见图1）

图1 基于16S rDNA基因蜱种系统进化树分析

3 讨论

蜱分为硬蜱科、软蜱科和纳蜱科三个科，截至目前为止，世界上蜱类有3科18属约900种。其中，中国蜱类有2科10属121种。一些学者主要调查分析了新疆各地区蜱类分布相关情况，所得结果有较高的参考价值。如王光雷等调查分析了1995年青河县暴发的蜱传疾病相关情况，结果表明此次蜱害的蜱种为草原革蜱；巴音查汗等对新疆和静县牦牛体表寄生的硬蜱进行了鉴定及分析，其优势蜱种主要包括银盾革蜱、草原革蜱、小亚璃眼蜱、丹氏血蜱和微小牛蜱；2006年，阿不力克木·阿布都热西提等对塔里木盆地蜱类的群落进行了分析研究，共采集获得5属10种蜱，其中只有拉合尔钝缘蜱一种为软蜱，其他均为硬蜱。然而，针对新疆南疆地区的蜱类调查至今缺乏比较全面系统的调查。本次采样调查主要选择了南疆地区的5个县市,对南疆地区蜱虫分布研究有着重要意义。

南疆地区自然植被的地点主要是平原植被稀疏，山地垂直带明显，不同环境形成不同植物群落。本次采集的蜱种分布的地理环境主要是荒漠半荒漠草原、荒漠沙丘、沙漠绿洲等，蜱种分布主要为图兰扇头蜱,证实了前期学者关于图兰扇头蜱是新疆优势蜱种的结论。通过序列比对结果显示：本研究获得图兰扇头蜱线粒体16S rDNA基因片段与基因库对应的蜱种同源性可达99.02%～100%，该结果证实了新疆南疆地区家畜体表寄生的主要蜱种是图兰扇头蜱。使用Mega 6.06软件基于16S rDNA基因的NJ树分析得知，本研究采集到的图兰扇头蜱与阿克苏、阿拉尔采集的图兰扇头蜱处与同一分支，但各采样采集到的图兰扇头蜱16S rDNA基因序列有所差异，存在显著的基因多样性。本实验对今后继续开展南疆地区蜱传病原及蜱种基因多样性研究具有重要意义。