结肠癌中PD-L1的表达及其与临床病理和预后的关系

陈珍珠，汪霖，茆智翔

(徐州医科大学附属医院肿瘤科，江苏 徐州)

0 引言

在恶性肿瘤中，结肠癌较常见，其对患者生命健康产生了严重威胁。当前，随着肿瘤免疫治疗的发展，程序性死亡分子(PD-1)已被明确为在T淋巴细胞表面诱导表达的抑制性受体，其由程序性死亡因子配体1(PD-L1)和程序性死亡因子配体2(PD-L2)两个配体分子组成[1]。其中，PD-L1经PD-1/PD-L1传导通路对T细胞分化增殖进行抑制，将信号传导和多类细胞因子分泌阻断，造成肿瘤细胞侵袭、转移问题[2]。现如今，有关PD-L1在结肠癌中的表达及其与临床病理、预后关系等相关研究并不是很多。本实验选取病例进行简要阐述。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验时间2018年1月至2018年12月，实验对象91例结肠癌患者肿瘤组织。男性45例，女性46例；年龄最小者35岁，年龄最大者78岁，平均年龄(56.54±3.82)岁；按国际抗癌协会分类标准，实施肿瘤分期、组织学分级：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期41例，Ⅳ期13例；G1级16例，G2级55例，G3级20例。患者均随访1年。

1.2 方法

对PD-L1蛋白实施免疫组化检测，应用标准链霉亲和过氧化物酶，在特定浓度一抗中放置组织切片，孵育过夜，第二天，再把切片放入羊抗兔lgG内(经生物素标记)孵育0.5h，继而转移至经过氧化酶标记的链霉亲和素室温孵育20min。发挥0.02%3，3’—二氨基联苯胺作用，于50mmol/L Tris-HCI缓冲液(pH7.6)内染色，时长6min左右，再用苏木精复染，用水清洗，依次进行脱水、清除、封片处理。该背景下，与免疫染色相对应的则是借助非免疫山羊或者兔血清对一抗进行替代，在显微镜下观察。

1.3 观察指标

实施DAKO Hercept Test评分：PD-L1阳性显色：细胞浆出现黄色至棕黄色颗粒。评分指标包括染色强度、阳性细胞百分数，在低倍镜下，选择5个视野，用高倍镜观察。染色强度：0分提示无着色；1分提示淡黄色；2分提示棕黄色；3分提示棕褐色，分值越高，颜色越深。阳性细胞计数：1分：阳性细胞不足10%；2分：阳性细胞10%-50%；3分：阳性细胞50%以上。PD-L1表达阳性即当染色强度和阳性细胞计数乘积在3分及以上，反之，则为阴性。

1.4 统计学处理

筛选实验数据用统计学工具(版本：选SPSS 23.0)读取和处理。计量资料、计数资料的呈现形式分别为(±s)、(n，%)，验证方式t、χ2。P值小于0.05提示数据有显著差异。

2 结果

2.1 PD-L1蛋白表达

发挥免疫组化作用，对结肠癌患者癌组织、癌旁组织、正常组织内PD-L1表达进行评估。结果提示，PD-L1在细胞膜、胞质定位，在肿瘤组织内，PD-L1高表达25例(27.47%)，中度表达28例(30.77%)，弱表达38例(41.76%)；在癌旁组织、正常组织内检测到的例数则非常少，分别为10.99%(10/91)和6.59%(6/91)。

2.2 结肠癌组织内PD-L1表达与病理因素关系

结肠癌组织内PD-L1表达与淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期等病理因素有关。具体见表1。

表1 结肠癌组织内PD-L1表达与病理因素关系(n，%)

2.3 PD-L1与结肠癌预后关系

TNM分期晚、分化程度低、淋巴结、远处转移、PD-L1表达阳性均会对结肠癌预后生存产生影响。结直肠癌PD-L1表达与术后生存期具有相关性。具体见表2。

表2 PD-L1与结直肠癌预后关系

3 讨论

免疫耐受现象会阻碍肿瘤免疫治疗。在肿瘤微环境中，肿瘤细胞经各类机制对自身形成保护，规避机体免疫反应，其主要通过PD-L1表达上调实现[3]。在免疫应答中，PD-L1作为凋亡相关蛋白，发挥重要作用，对T淋巴细胞和其配体PD-1结合起诱导作用，从而把抑制性信号传递给T细胞，发生凋亡，对外周T细胞的免疫耐受进行调节[4]。在肿瘤免疫治疗中，PD-1/PD -L1通路与肿瘤逃避免疫系统破坏问题备受关注[5]。发挥药物作用，将PD-1/PD-L1通路阻断，有利于使T细胞功能增强，对肿瘤细胞产生影响，使之裂解，实现肿瘤治疗。实验证实[6-9]，PD-L1在多类肿瘤组织中广泛表达，但有关结肠癌患者PD-L1表达与临床病理因素、预后关系尚不明确。结果显示：在肿瘤组织内，PD-L1表达显著升高，其不受年龄、性别、肿瘤大小等因素影响，但与肿瘤的TNM分期、远处转移、淋巴结转移具有相关性。结肠癌患者预后不良的诱因即肿瘤组织内PD-L1高表达，证实了在结肠癌治疗中，PD-L1为重要耙点。

在免疫系统内，PD-L1的作用在于维持正常机体保护性免疫和免疫耐受平衡[10-12]。在肿瘤微环境中，依托各机制，对PD-L1产生影响，使其表达上调，使PD-1/PD-L1信号通路处于异常激活状态，通过各类方式对T细胞增殖、分化进行抑制，通过诱导，使之发生凋亡，介导肿瘤免疫逃逸[13]。除此之外，PD-L1还能够对T细胞缺失进行有效调节。现如今，有关PD-1/PD-L1通路机制、是否存在多个受体仍不明确，后续将通过PD-L1单抗或多抗制备，对该通路今星期有效阻断，为结肠癌临床治疗工作的开展奠定良好基础。

综上，在肿瘤免疫治疗中，PD-1/PD-L1备受认可，其信号通路为结肠癌治疗工作提供了新的分子耙标。在结肠癌中，PD-L1蛋白表达上调，相关因素有TNM分期、淋巴结转移、不良预后等。故而，PD-L1能够被看作结肠癌侵袭、转移的新型生物标志物，未来一段时间，将重点探讨结肠癌免疫治疗中，PD-L1能否作用关键耙点发挥作用及其相关机制。