川椒炮制前后生物碱含量的变化

王 孟 石 钰 董林娟

（陕西服装工程学院 健康学院，陕西 咸阳712046）

花椒为芸香科植物青椒或花椒的干燥成熟果皮[1]。花椒产地遍及全国，山西、陕西、甘肃、河北、河南、青海等地，其道地药材产地位于四川省汉源、茂县。花椒以野生为主，人工栽培品种有红花椒和青花椒，不同产地品种花椒品质，色泽，香气差异较大。道地产地汉源一带的川椒品质最佳，颗粒略小而圆、色泽鲜艳、香味浓郁。川椒抗旱，适合生长在高温、土壤贫瘠的地区，因此汉源一带山区是川椒的适宜生长地。川椒生温、有毒，外紫里白、气味辛烈，浓厚。具有温中止痛，祛湿止泻，杀虫止痒的功效。对于蛔虫病、脚气、皮肤瘙痒等疾病治疗效果显著。川椒具有很大的研究价值。通过一定的炮制方法，可以降低其毒副作用，增加疗效，或产生新的治疗作用[2]。通过查阅文献和古书籍，发现花椒有清炒、醋制、盐制、酒制等不同的炮制方法[3-4]。

川椒的主要有效成分为挥发油，川椒相对于一般花椒，香味更浓郁，其特殊的香味主要来源于挥发油，果皮中挥发油含量较高，川椒籽与川椒叶都是可利用的资源。川椒挥发油具有祛湿抗炎、抗菌、局麻止痛等药理作用[6]，主要治疗湿疹引起的皮肤瘙痒，另外还有虫积腹痛、杀菌消炎等疾病。除了挥发油，还有生物碱、酞胺，以及木脂素等化学成分[5]。川椒中的生物碱成分主要是白屈菜红碱，是川椒中的另一主要活性成分[7]，具有镇痛、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等药理作用[8]，治疗疥疮、腹痛、胃寒冷痛等疾病，可见川椒中的生物碱具有较好的开发前景。本文通过对川椒炮制前后生物碱含量变化的研究，为花椒炮制前后生物碱成分的差异提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

表1 仪器设备

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1.2 试药

表2 试药

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2 方法

2.1 花椒的炮制

2.1.1 清炒法。取川椒放入炒锅内，用小火炒，直到出汗，渗油，呈现油亮光泽，颜色加深，有香气逸出时，取出晾干晾凉，保存于干燥容器。

2.1.2 酒制法。取川椒置于盆中，加适量黄酒搅拌均匀，闷润30min 后用纱布包裹蒸2h，放冷无气后取出，在无风的条件下晾干，即得花椒酒制品。

2.1.3 盐制法。取川椒置于盆内，置于炒锅内，用煤气灶小火加热，炒到有响声时，再喷淋盐水，继续炒直至炒干，然后倒入盘内放凉，再装自封袋备用。花椒与食盐比例为1：0.02。

2.1.4 醋制法。取川椒置炒锅内，使用燃气灶文火炒，加热后喷淋醋液，炒至醋干，取出并闷放，使其发汗，再晒干，装自封袋备用。花椒与食盐比例为1：0.12。

2.2 酸提碱沉法提取总生物碱

取川花椒果皮500g，50℃低温干燥后粉碎成粗粉，加入95%乙醇，用稀盐酸调节PH（PH=3），60℃超声提取45min，提取3 次，滤过后合并滤液，减压抽滤，去掉滤渣，在滤液中加氨水调节PH 至中性，所得溶液为总生物碱提取液。

2.3 花椒中总生物含量的测定

2.3.1 光谱条件。采用紫外分光光度计进行检测，标准品为白屈菜红碱波长：425nm。

2.3.2 标准溶液的配制。精密称取5mg 白屈菜红碱对照品放置于25ml 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻线，摇匀，白屈菜红碱对照品的储备液制备成。

2.3.3 样品溶液的配制。吸取“2.2”项下的待测样品1ml 于试管中，加入2ml 溴甲酚绿缓冲液和lOml 氯仿，振摇2min 充分反应后，转移至分液漏斗中静置1h，待其完全分层，取氯仿层置于锥形瓶中，加少量无水Na2SO4，充分振摇1 min，待氯仿层澄清后，在425nm 处测定其吸光度值。

2.3.4 标准曲线的绘制。吸取白屈菜红碱标准品溶液，在425nm 处测定吸光度，绘制浓度- 吸光度曲线图。以浓度C 对吸光度A 进行线性回归，得回归方程为C=1.01A+0.114，相关系数R2=0.9993。线性范围为0.2～0.6mg/mL，结果见表3 及图1。

表3 不同浓度白屈菜红碱对照品吸光度值

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图1 白屈菜红碱对照品标准曲线图

2.3.5 精密度实验。配制低、中、高三个浓度的白屈菜红碱对照品，采用紫外分光法，设定检测波长值为425nm，测定三种不同浓度溶液的吸光度A 值，代入上述线性回归方程计算浓度值。三种浓度样品每天测定3 次，计算相对标准偏差RSD，作为日内变异；连续测定3 天，计算相对标准偏差RSD，作为日间变异，结果发现日内和日间相对标准偏差均低于2%，符合方法学要求。

2.3.6 重复性实验。精密称取白屈菜红碱适量, 按照上述紫外分光法测定其含量。制备不同浓度供试品溶液三份，1 天内分别测5 次样品；每天各测1 次，连续测5 天。结果显示阿卡波糖原料药RSD 均值为0.39%，可见建立的方法具有良好的重复性。

2.3.7 稳定性实验。配制浓度为0.2mg/mL 的白屈菜红碱标准溶液，于室温下放置24h，分别在0，2，4，6，8，10，12 和24h 测定其吸光度，考察标准品溶液稳定性，通过数据分析，可见RSD=0.88%，小于2%，表明白屈菜红碱对照品溶液在24h 内稳定性符合要求。

2.4 川椒生品与炮制品生物碱含量的测定

根据“2.2”项下方法提取川椒中的生物碱，采用UV 法测定川椒生品及炮制品中生物碱的吸光度。川椒中总生物碱主要活性成分为白屈菜红碱，白屈菜红碱在乙醇中溶解度高，且具有抗菌、抑菌、驱虫的等药理活性[9]。以白屈菜红碱为标志物，测定生物碱的含量。根据“2.3”项下方法测定吸光度值，将吸光度A值带入上述线性回归方程中，计算各样品的白屈菜红碱的含量及白屈菜红碱得率（%）。

表4 川椒不同炮制品中白屈菜红碱的含量

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根据以上数据发现川椒生品与其他炮制品中白屈菜红碱的含量变化，酒制品中白屈菜红碱的含量最高，其次是清炒品和醋制品，盐制品和生品中白屈菜红碱的含量较低，生品中白屈菜红碱的含量低于盐制品，说明炮制品中生物碱的含量变化与炮制所用辅料关系密切，由于白屈菜红碱易溶于乙醇中，因此酒制法能够增加白屈菜红碱的溶出，而盐制法使川椒细胞缩水，不利于白屈菜红碱的溶解与溶出，反而降低了其含量。

3 讨论

花椒炮制前后生物碱含量变化明显，表明炮制方法以及辅料的选择，对于川椒中生物碱的溶出度有较大的影响。酒制法、醋制法、盐制法以及清炒法这几种炮制方法，在其炮制过程中，由于炮制方法和辅料的不同，使川椒的生物碱含量发生了改变。其中酒制法中，加入黄酒以及炒制加热的原因，增加了白屈菜红碱的溶出，这是由于白屈菜红碱在乙醇能够完成溶解。盐制品的生物碱含量降低，这与盐抑制生物碱的溶出关系密切。清炒品因加热促进了有效成分溶出，其含量略高于而醋制品，而醋的加入降低药物pH 值，反而阻碍了白屈菜红碱的溶出。