NAA和6-BA浓度配比对铁皮石斛原球茎增殖、分化组织培养的影响

李发良

摘 要：用铁皮石斛原球茎做材料，以组织培养为基础，研究两种植物激素NAA和6-BA的不同浓度配比对铁皮石斛增殖、分化的影响及最适浓度配比。结果显示，在原球茎组织培养过程中，两种激素浓度配比的不同使得石斛增殖、分化的效果也不同。铁皮石斛原球茎增殖较为理想的培养基为MS+NAA 0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L;铁皮石斛原球茎分化较为理想的培养基为MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L。建议铁皮石斛原球茎在增殖培养至两个月时及时转瓶以保证其继续生长。

关键词：铁皮石斛;原球茎;组织培养;NAA;6-BA

铁皮石斛（Dendrobiumcandidum）为兰科石斛属多年生常绿草本植物，是一种名贵药材[1]。铁皮石斛的药用部分是新鲜或干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热的功效[2]。目前，有关铁皮石斛原球茎的研究主要集中于无机盐浓度、碳源以及有机附加物等对其增殖和分化的影响，而关于细胞分裂素和生长素不同浓度配比对其增殖和分化影响的研究较少。现以铁皮石斛原球茎为研究材料，进一步研究NAA和6-BA对其增殖和分化的影响，以期为铁皮石斛原球茎的再生提供理论基础。

一、材料及实验方法

（一）材料。铁皮石斛原球茎（取自云南师范大学生命科学学院组培室），所有构成MS培养基成分的原材料，以及实验所研究激素NAA和6-BA。

（二）培养基的配置。按照MS培养基配方，先分别配置出充裕的大量元素母液、微量元素母液、有机母液、铁盐母液以及激素母液;接着按配方配置足量的MS培养基并分装到培养瓶中，每个培养瓶中约40ml;再分别按照预设的浓度梯度（见表1）向培养瓶中加入两种激素，并对培养瓶封口、编号。将封好的培养基放入高温高压灭菌锅中灭菌，取出静止3天后，除凝固外无变化的即为可用。

（三）接种。选取相同条件下生长良好的原球茎，切割成相同大小的小块。在超净工作台上接种在之前灭完菌的培养基上。接种完后将培养瓶置于培养架上培养，培养条件为光照时间14 h/d;光照强度1 000～2 000 lx;温度（25±1）℃;湿度70%～80%。以上实验均在90 d之内统计铁皮石斛原球茎增殖和分化的情况（包括芽数、根数以及芽长和原球茎增殖情况）。重复以上实验3次.实验数据用SPSS软件One-Way ANOVA 分析后进行LSD法检验，P<0.05为有统计学差异显著性。

二、结果与分析

（一）NAA和6-BA对铁皮石斛原球茎增殖的影响。由表2可知：铁皮石斛原球茎在25种培养基上均能增殖，添加NAA和6-BA均能促进原球茎增殖;当NAA为某一水平时，随着6-BA浓度的增加，原球茎的增殖效果先增后减，当6-BA浓度为某一水平时，随着NAA浓度的增加，对石斛原球茎的分化影响先增后减。当NAA浓度为0.7mg/L、6-BA浓度为1.5mg/L时，铁皮石斛原球茎增殖效果相对比其他浓度配比要好，且原球茎的质量更好，簇生，极易松散，色泽嫩绿;因此，铁皮石斛原球茎较为理想的增殖培养基为MS+NAA0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L。

（二）NAA和6-BA对铁皮石斛原球茎分化的影响。为研究不同植物激素配比对石解原球茎分化的影响，以MS为基本培养基，附加NAA和6-BA进行激素配比试验。培养两个月后统计铁皮石斛原球茎分化情况。由表3可知， MS 培养基无论添加或不添加激素， 铁皮石斛原球茎均可分化， 但对照组分化程度最低， 添加 NAA 和6-BA均能促进原球茎分化。当NAA为某一水平时，随着6-BA浓度的增加，原球茎的分化效果先增后减，当6-BA浓度为某一水平时，随着NAA浓度的增加，对石斛原球茎的分化有抑制作用。在从统计学的角度对数据进行双因素分析并进行作图，如图1、图2所示，在NAA 浓度为0.3mg/L、6-BA浓度为2.0mg/L时，有利于铁皮石斛原球茎的分化。由此得出， 铁皮石斛原球茎较理想的分化培养基为 MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L

三、結论与讨论

在植物快繁技术中，组织培养起到很大的作用， 外植体愈伤组织的形成及分化又与外源激素的作用密不可分， 其中适当浓度配比的生长素和细胞分裂素最为重要[3]。经过该次试验结果表明， 当培养基中不含激素时， 原球茎均可增殖与分化; 添加一定浓度的NAA和6-BA 后， 增殖程度、分化芽数增大;但随着NAA 浓度的增大，有利增殖但不利于分化; 随着6-BA浓度（在一定范围内）增大，不利增殖却利于分化。同时，该试验还发现， 随着培养时间的延长， 培养基逐渐消耗， 原球茎得不到充足的养分， 生长趋势下降，逐渐出现变黑现象，甚至死亡。经分析表明，从实验中获得的数据具有统计学意义。

参考文献

[1] 张红梅， 刘建东， 王岩花，等.铁皮石斛茎段快繁技术研究[J].山西农业大学学报（自然科学版）， 2010， 30 （6）： 495-499.

[2] 包雪声， 等. 中国药用石斛[M].上海：上海医科大学出版社，复旦大学出版社，2001：1-49.

[3] 王忠敏， 付淑琴， 张莉华， 等. 迎春花无菌体系的建立以及茎段和叶片愈伤组织的诱导[J] . 上饶师范学院学报， 2008， 28 （3）： 61-66.