巴马小型猪麻醉状态下胆汁和血液生理生化指标测定与分析

郭家钘，谭晓宇，何锡然，邝伟键，张 琳，刘华敏，黄小桃，陈素平

（1.广东丁沃生医疗器械有限公司，广东 佛山 528300；2.中国人民解放军南部战区总医院肝胆外科，广东 广州 510010；3.广东顺德工业设计研究院/广东顺德创新设计研究院，广东 佛山 528300）

目前常用的实验动物有兔、大鼠、小鼠、犬、猪等，但近年来，小型猪的生产量和使用量在逐年增长［1］。早在上世纪50年代初西方国家便开始利用小型猪进行研究和培养，但基本都是多品种杂交育成，遗传构成复杂，遗传性状不稳定［2］，直至上世纪80年代国内才开始进行试验用小型猪研究。近年来，我国加大了对小型猪资源的保存和开发应用领域，从而加快了我国小型猪实验动物化的进程。基于小型猪解剖、生理、生化特点与人类相似［3］、及其来源清楚，体型小，易于绑定、采血、麻醉等独特优势，逐渐成为医学研究领域中一种理想的实验动物模型［4-8］。以小型猪为实验动物模型的仿人类疾病研究也越来越多，包括皮肤研究、心血管系统疾病研究、糖尿病研究甚至于异种器官移植的研究［9-12］。试验猪血液的生理生化指标能反映出试验猪的健康状况以及其在实验过程中的生理变化，为动物实验提供重要基础数据，因此测定小型猪的血液生理生化指标具有重要意义。但具体关于小型猪在麻醉状态下生理生化指标变化的报道较少［13］，且巴马小型猪的胆汁参考数据文献也较少，为探讨同种小型猪在麻醉状态下胆汁和血液生理生化指标，为动物实验研究提供参考数据，本解究对巴马小型猪在麻醉状态下的血液生理生化指标进行了测定和对比分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1）实验动物。健康合格的巴马小型猪17只，体重45～50 kg，由中国人民解放军南部战区总医院实验动物中心提供。实验操作过程符合动物实验的伦理要求。

2）主要仪器。iSTAT-300G便携式血气分析仪，iSTAT CG4+血气测试片，iSTAT CHEM8+血气测试片，iSTAT CG8+测试片，美国雅培公司生产；Pointcare V2微纳芯全自动生化分析仪，微纳芯肝功检查盘片，北京拓瑞检测技术有限公司生产，GE-欧美Aespire7100麻醉呼吸机，北京迈润医疗医疗器械有限公司生产。

1.2 方法

1）麻醉。耳后肌肉注射1 mg阿托品和舒泰50混合液1～2 mg/kg进行基础麻醉后，耳后肌肉注射5 mg咪达唑仑。留置针建立耳缘静脉通路，使用微量注射泵泵入丙泊酚0.4 mL/kg/h维持麻醉。

2）胆汁采集。开腹后游离胆管，结扎胆管前使用一次性注射器抽取约1 mL胆汁按照标准操作规范使用CG8+测试卡进行检测。

3）血样采集。开腹后游离门静脉、肝动脉和腹主动脉，耳缘静脉注射25 000 U肝素钠和2～3 mg盐酸多巴胺注射液，使用一次性注射器抽取动脉血血样，取2 mL血按标准操作规范使用CG4+和CHEM8+测试卡进行血气检测；剩余血样注入不含任何添加剂的红色试管帽采血管内，再用移液枪抽取100 μL血按标准操作规范使用肝功检查盘片进行生化检测。

4）数据处理。数据采用SPSS23.0统计软件进行统计学分析，对数据进行正态性检验，若样本服从正态分布，则其95% 参考值范围用公式x（均数）±1.96s（标准差）表示；若样本服从偏态分布，则其95% 参考值范围用百分位数法P2.5和P97.5表示。

2 结果

2.1 胆汁指标检测结果

对pH、HCO3、Na、K、Ca、Glu指标进行正态性检验，因胆汁葡萄糖浓度均小于1.1，胆汁葡萄糖水平低于检测仪器的最低限，故Glu结果无显示，其余检测结果均显示P>0.05，呈正态分布。因此，其95%参考值范围用公式x±1.96s计算，结果见表1。

2.2 动脉血血气指标测定结果

对pH、pCO2、pO2、HCT、Na、K、Ca、Cl、Glu、Lac、HCO3、BE（ecf）、TCO2、BUN、tHb指标进行正态性检验，结果均显示P>0.05，呈正态分布。因此，其95%参考值范围用公式x±1.96s计算，结果见表2。

表1 pH、HCO3、Na、K、Ca 95%参考值范围计算表

表2 pH、pCO2、pO2、HCT、Na、K、Ca、Cl、Glu、Lac、HCO3、BE（ecf）、TCO2、BUN 95%参考值范围计算表

2.3 动脉血生化指标测定结果

对TBil、DBil、IBil、AST、ALT、ALP、GGT、TP、ALB数据进行正态性检验，结果均显示P>0.05，呈正态分布。因此，其95%参考值范围用公式±1.96s计算。结果见表3。

表3 TBil、AST、ALT、ALP、GGT、ALB 95%参考值范围计算表

2.4 与其他文献数据作比较

以本实验数据（平均值±标准差）与其他文献的巴马小型猪血气、生化指标作比较。结果见表4～5。

表4 动脉血血气指标的比较

表5 动脉血生化指标的比较

3 讨论

胆汁是来自肝细胞的一种复杂的水溶液，由胆汁盐、胆红素、磷脂、胆固醇、氨基酸、类固醇、酶、维生素和重金属等内源性固体成分及外源性的药物、生物制剂和环境毒素等组成［17］。直接从肝细胞分泌的胆汁称为肝胆汁，储存在胆囊内并由胆囊排出的胆汁称为胆囊胆汁，肝胆汁呈金黄色，透明清亮，呈弱碱性（pH7.4），胆囊胆汁因被浓缩而颜色加深，为深棕色，因HCO3-在胆囊中被吸收而呈弱酸性（pH6.8）。肝细胞能不断地生成胆汁和分泌胆汁，经胆管输送到胆囊。本实验是用在麻醉状态下巴马小型猪开腹后在胆管直接抽取的胆汁来检测，由于目前暂时没有过多的关于巴马小型猪的胆汁数据文献发表，故本研究也增加了麻醉状态下巴马小型猪胆汁检测指标数据，以对巴马小型猪的研究提供参考。

实验中各测定指标均来自麻醉状态下巴马小型猪的动脉血液，因提前注射了肝素钠抗凝，故检测仪器无显示溶血状态。本研究运用同样在麻醉状态下但使用不同麻醉方法麻醉巴马小型猪的血液生理生化指标参考数据来对比文献［13］、［14］，结果表明在血气指标检测分析中，数据差异不大，在生化指标检测分析中，TBil指标差异大但在人类正常参考值范围内，而AST、ALP差异较大，可能与操作方法和实验猪生理状态不同有关。总体数据均服从正态分布（P>0.05），故今后实验可考虑使用泵入丙泊酚0.4 mL/kg/h维持麻醉方法。本研究也与文献［15］、［16］对比在清醒状态下巴马小型猪的血液生化指标参考数据，生化指标检测分析中TBil、AST、ALP、γGGT指标差异较大，可能与巴马小型猪生理状态和采血部位的不同有关。研究中以已发表的研究文献为基础，进一步增加检测项目，还与人的正常参考值范围作比较，血气指标和生化指标的检测分析中有17个指标在人的正常参考值范围内。研究中巴马小型猪麻醉后以气体比例为FiO260%供氧，故氧分压与人的正常参考值范围差异较大，吸入氧浓度还需今后实验中深究。

4 结论

随着巴马小型猪在生物医学动物模型中的广泛应用，利用巴马小型猪构建人类疾病模型已成为研究热点之一，而血液的生理生化指标是作为了解动物生理状态、模型建立、病理学、毒理学、生理学研究的重要参数，具有重要的临床检测意义。虽然目前国内外关于巴马小型猪的血液生理生化指标的文献较多，但多数是以猪清醒状态下的血液检测指标作为参考数据，故本研究单独以麻醉状态下巴马小型猪的血液检测指标作为参考提供重要依据。

小型猪血液的生理生化指标检测不仅为肝功能指标提供参考，对临床试验也有重大意义。如今，临床上移植器官的不足问题依旧存在，小型猪的异种器官移植可能将成为一个新方向。也早有研究证明巴马小型猪的肝脏部分可以模拟人类肝脏部分的肝损伤模型［18］，但实验还有待深入研究，故对巴马小型猪的研究相当重要。本研究较全面的提供了巴马小型猪的各项检测数据，24个血液生理生化指标中有5个检测指标高于人类正常参考值，2个检测指标低于人类正常参考值，17个检测指标接近人类正常参考值，说明巴马小型猪和人类生化特性有一定的相似性，也与已有相关参考文献做了详细的对比，表明本研究的检测数据具有参考意义。希望通过本研究能继续推动巴马小型猪在国内外医学领域的拓展和使用。