排毒养颜胶囊对尿酸酶缺失大鼠的降血尿酸作用*

董鲜祥，范 楠，云 宇，陈 欢，段为钢△

（1.昆明医科大学基础医学院药理学系，云南 昆明 650500；2.云南中医药大学云南省中医药学分子生物学重点实验室，云南 昆明 650500）

尿酸是人类嘌呤代谢的终产物，高尿酸血症已成为危及人们身体健康的“第四高”[1]。经典的降尿酸途径主要是抑制黄嘌呤氧化酶减少尿酸合成，和/或促进尿酸肾脏排泄，但这种全身式的用药容易导致全身性的安全问题[2]。有报道称肠道也是尿酸分布的重要器官，具有很强的排泄尿酸潜力[3]。排毒养颜胶囊是一种通便排毒的中成药，该药的通便排毒作用是否包括“促尿酸肠道排泄”尚不清楚，本研究试图回答该问题。

1 材料方法

1.1 材料 雄性尿酸酶基因敲除（Uox-/-）大鼠，即Kunming-DY大鼠，体质量180～220 g，由实验室自制[4]。排毒养颜胶囊（0.4 g/粒）由云南盘龙云海药业有限公司生产，批号180321；尿酸试剂盒由南京建成生物工程研究所生产（货号：C012-1-1）；Tecan酶标仪（Infinity 200Pro）由奥地利生产。

1.2 分组及给药 取13粒排毒养颜胶囊，去胶囊壳，加125 mL蒸馏水，搅成混悬液。取7只Uox-/-大鼠，置于代谢笼中。给药前于30℃断尾取血制备血清样品，收集24 h排泄物。随后按体重灌胃排毒养颜胶囊混悬液（0.42 g/kg），连续给药5 d，末次给药2 h后断尾脉取血，并收集第5天24 h的排泄物。排泄物置于-20℃冰箱中保存备用。

1.3 尿酸测定 尿酸测定采用磷钨酸法，操作按照说明书进行。血清样品直接测定。排泄物样品先自然解冻。尿液摇匀后，取10 μL，用50 mmol/L的NaHCO3[5]稀释10倍后检测。粪便样品加2倍重量的100 mmol/L的氨丁三醇溶液[5]，摇匀，离心取上清液检测。

2 结果

2.1 血清尿酸水平 正常情况下，雄性Uox-/-大鼠的血尿酸处于较高水平；给予排毒养颜胶囊5 d后，大鼠的血清尿酸水平下降了近一倍。与给药前相比，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 大鼠给药前后的血尿酸浓度（±s，μg/mL）

表1 大鼠给药前后的血尿酸浓度（±s，μg/mL）

注：与给药前相比，*P<0.05。

鼠号 给药前 给药后 后-前1 67.45 25.48 -41.97 2 121.11 17.73 -103.38 3 62.83 45.26 -17.57 4 60.04 56.35 -3.69 5 11.45 12.90 1.45 6 120.26 49.95 -70.31 7 88.64 39.14 -49.5（x ± s）75.97±38.34 35.27±16.73* -40.71±37.78436 P 0.029

2.2 大鼠给药前后24 h排泄物中的尿酸总量变化正常情况下，Uox-/-大鼠的尿酸排泄以尿液为主。给予排毒养颜胶囊后，大鼠粪便中的尿酸排泄量明显增加（P<0.05），尿液中的尿酸排泄总量呈现减少趋势（P=0.109）。与给药前相比，粪便的尿酸排泄量增加了83.7%，肾脏排泄减少了50.8%，见表2。

表2 大鼠给药前后的24 h尿酸排泄量（±s，μg）

表2 大鼠给药前后的24 h尿酸排泄量（±s，μg）

注：与给药前相比，*P<0.05。

鼠号 尿液粪便给药前 给药后 后-前 给药前 给药后 后-前1 9386.6 14327.7 4941.1 1278.0 2564.7 1286.7 2 15550.5 5067.8 -10482.7 1210.8 2968.6 1757.8 3 16890.0 9871.3 -7018.7 1356.8 3583.2 2226.4 4 20270.2 5416.4 -14853.8 1295.2 1744.5 449.3 5 2908.8 4513.1 1604.3 963.6 1081.2 117.6 6 7126.8 6448.8 -678.0 1227.6 1704.8 477.2 7 27214.1 3200.0 -24014.1 1673.2 2899.3 1226.1（x± s）14192.4±8326.3 6977.9±3853.7 -7214.6±10161.7 1286.5±211.4 2363.8±879.7* 1077.3±766.5 P 0.1090.010

2.3 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸相对量变化大鼠几乎不排汗，尿液和粪便排泄的尿酸总量可视为尿酸的总排泄量（100%）。将表2数据转化后可见：正常情况下，雄性Uox-/-大鼠的尿液尿酸排泄量约占90%，粪便排泄量约10%；给予排毒养颜胶囊后，大鼠的尿液尿酸排泄量减少到约70%，粪便排泄量升高到约30%；差异均具有统计学意义，见表3。

表3 大鼠给药前后尿液粪便的占比（±s，%）

表3 大鼠给药前后尿液粪便的占比（±s，%）

注：与给药前相比，*P<0.05。

尿液 粪便鼠号给药前 给药后 给药前 给药后1 88.0 84.8 12.0 15.2 2 92.8 63.1 7.2 36.9 3 92.6 73.4 7.4 26.6 4 94.0 75.6 6.0 24.5 5 75.1 80.7 24.9 19.3 6 85.3 79.1 14.7 20.9 7 94.2 52.5 5.8 47.5（x ± s）88.9±6.9 11.1±6.9* 72.7±11.3 27.3±11.3*P 0.040 0.040

2.4 大鼠给药前后的排泄量变化 排毒养颜胶囊具有促进排便的作用。正常情况下，成年雄性Uox-/-大鼠的24 h尿量约25 mL；给予排毒养颜胶囊后，尿液量减少到18.5 mL，减少约20%（23.2%）。正常的粪便排泄量约6 g，用药后增加到8 g，增加约40%（38.9%），差异具有统计学意义。但将大小便排泄总量进行比较，发现用药后约只减少10%，差异无统计学意义，见表4。

2.5 大鼠给药前后排泄物尿酸含量的变化 考虑到排毒养颜胶囊能改变大小便的排泄比例，为了考查该药能否改变排泄物中的尿酸含量（浓度），对排泄物尿酸浓度进一步分析发现，用药后尿液中尿酸浓度呈下降趋势，粪便中的尿酸含量呈增加趋势，但差异没有统计学意义，见表5。

表4 大鼠给药前后24 h尿液粪便量的变化

表5 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸含量（±s，μg/g）的变化

表5 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸含量（±s，μg/g）的变化

注：与给药前相比，*P<0.05；假定尿液的比重为1。

尿液粪便鼠号 给药前 给药后 后-前 给药前 给药后 后-前1 315.0 471.3 156.3 177.5 342.9 165.4 2 1007.2 341.0 -666.1 171.5 294.5 123.0 3 487.9 390.2 -97.7 197.8 319.9 122.1 4 633.0 283.3 -349.8 309.9 274.3 -35.6 5 175.4 334.3 158.9 199.1 177.8 -21.3 6 390.7 369.8 -21.0 256.8 288.9 32.1 7 1120.8 297.4 -823.4 268.1 288.2 20.1（x± s）590.0±354.8 355.3±63.3 -234.7±391.2 225.8±52.6 283.8±52.1 58.0±78.5 P 0.1640.099

3 讨论

Uox-/-大鼠是我们采用CRISPR/Cas9技术研制的新型大鼠（以SD大鼠为背景）[4]。相比野生型SD大鼠[6]，该大鼠由于缺乏尿酸酶，血尿酸值明显升高。Uox-/-雄鼠的尿酸值接近成年男性的血尿酸值，甚至达到高尿酸血症的标准。可喜的是，该大鼠可以长期存活，是研究高尿酸血症的“理想模型动物”。

一般认为尿酸的排泄主要通过肾脏，因为该途径占到排泄总量的2/3以上，只有不到1/3的尿酸从肠道排泄[2-6]。然而，课题组前期研究发现，有大量的尿酸分布在大鼠肠液中，其总量约为血液量的2～3倍，且与血尿酸水平存在较好的相关性[3]。由于尿酸在肠道下段存在重吸收现象，因此肠道排泄的尿酸总量仍然较小[3]。如果加速肠道尿酸排出，理应具有一定的降血尿酸作用，可能还兼具有不良反应少而轻的特点。

排毒养颜胶囊是国家药物监督管理部门批准上市的通便排毒中成药，由大黄、西洋参、白术、青阳参、小红参、荷叶、枳实等药物组成。由于尿酸在肠道具有较高分布[3]，通便应该有利于粪便排出，继而有利于肠道中的尿酸排出，从而产生降血尿酸效果。通常，体内的尿酸2/3由内源性嘌呤代谢而来，由食物摄入嘌呤生成的尿酸不到1/3[2-6]。本研究采用Uox-/-大鼠，对大鼠没有进行饮食限制，比较接近临床发病情况。由于排毒养颜胶囊具有通便作用，本研究也就避免了灌胃造模可能出现的假阳性治疗效果。从对大鼠大、小便尿酸排泄量的结果看，用药后小便尿酸排泄量减少，但大便尿酸排泄量增加。因此，本研究中，大鼠的血尿酸水平降低可以用促进肠道排泄尿酸来解释。服用药物后，大鼠的小便排泄减少，大便排泄增加；但从大、小便排泄总量来看，变化并不明显，平均只减少了约10%，差异无统计学意义（表4）；这间接提示用药对大鼠饮食总量的影响较小。从大、小便尿酸含量（浓度）看，用药后粪便量排泄增加，且粪便中尿酸含量也有增加趋势，提示排毒养颜胶囊还具有一定的促肠道分泌尿酸的作用，但由于本研究样本量偏小，未见统计学差异。

虽然有采用尿酸吸附剂蒙脱石口服降尿酸的报道[7]，但传统促尿酸排泄的途径仍是促进肾脏排泄[2]。在高尿酸血症的背景下，该途径可能进一步加重肾脏负担。通过肠道排尿酸，理论上是有利于降低肾脏负担的。在本研究中可以看到，使用排毒养颜胶囊后，血尿酸下降的同时，尿中排出的尿酸总量和浓度也是减少的，显然这对保护肾功能有利。

综上所述，排毒养颜胶囊可以通过增加肠道尿酸排泄降低血尿酸水平。