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排毒养颜胶囊对尿酸酶缺失大鼠的降血尿酸作用*

2020-11-20董鲜祥段为钢

云南中医学院学报 2020年3期
关键词:排泄量养颜排泄物

董鲜祥,范 楠,云 宇,陈 欢,段为钢△

(1.昆明医科大学基础医学院药理学系,云南 昆明 650500;2.云南中医药大学云南省中医药学分子生物学重点实验室,云南 昆明 650500)

尿酸是人类嘌呤代谢的终产物,高尿酸血症已成为危及人们身体健康的“第四高”[1]。经典的降尿酸途径主要是抑制黄嘌呤氧化酶减少尿酸合成,和/或促进尿酸肾脏排泄,但这种全身式的用药容易导致全身性的安全问题[2]。有报道称肠道也是尿酸分布的重要器官,具有很强的排泄尿酸潜力[3]。排毒养颜胶囊是一种通便排毒的中成药,该药的通便排毒作用是否包括“促尿酸肠道排泄”尚不清楚,本研究试图回答该问题。

1 材料方法

1.1 材料 雄性尿酸酶基因敲除(Uox-/-)大鼠,即Kunming-DY大鼠,体质量180~220 g,由实验室自制[4]。排毒养颜胶囊(0.4 g/粒)由云南盘龙云海药业有限公司生产,批号180321;尿酸试剂盒由南京建成生物工程研究所生产(货号:C012-1-1);Tecan酶标仪(Infinity 200Pro)由奥地利生产。

1.2 分组及给药 取13粒排毒养颜胶囊,去胶囊壳,加125 mL蒸馏水,搅成混悬液。取7只Uox-/-大鼠,置于代谢笼中。给药前于30℃断尾取血制备血清样品,收集24 h排泄物。随后按体重灌胃排毒养颜胶囊混悬液(0.42 g/kg),连续给药5 d,末次给药2 h后断尾脉取血,并收集第5天24 h的排泄物。排泄物置于-20℃冰箱中保存备用。

1.3 尿酸测定 尿酸测定采用磷钨酸法,操作按照说明书进行。血清样品直接测定。排泄物样品先自然解冻。尿液摇匀后,取10 μL,用50 mmol/L的NaHCO3[5]稀释10倍后检测。粪便样品加2倍重量的100 mmol/L的氨丁三醇溶液[5],摇匀,离心取上清液检测。

2 结果

2.1 血清尿酸水平 正常情况下,雄性Uox-/-大鼠的血尿酸处于较高水平;给予排毒养颜胶囊5 d后,大鼠的血清尿酸水平下降了近一倍。与给药前相比,差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 大鼠给药前后的血尿酸浓度(±s,μg/mL)

表1 大鼠给药前后的血尿酸浓度(±s,μg/mL)

注:与给药前相比,*P<0.05。

鼠号 给药前 给药后 后-前1 67.45 25.48 -41.97 2 121.11 17.73 -103.38 3 62.83 45.26 -17.57 4 60.04 56.35 -3.69 5 11.45 12.90 1.45 6 120.26 49.95 -70.31 7 88.64 39.14 -49.5(x ± s)75.97±38.34 35.27±16.73* -40.71±37.78436 P 0.029

2.2 大鼠给药前后24 h排泄物中的尿酸总量变化正常情况下,Uox-/-大鼠的尿酸排泄以尿液为主。给予排毒养颜胶囊后,大鼠粪便中的尿酸排泄量明显增加(P<0.05),尿液中的尿酸排泄总量呈现减少趋势(P=0.109)。与给药前相比,粪便的尿酸排泄量增加了83.7%,肾脏排泄减少了50.8%,见表2。

表2 大鼠给药前后的24 h尿酸排泄量(±s,μg)

表2 大鼠给药前后的24 h尿酸排泄量(±s,μg)

注:与给药前相比,*P<0.05。

鼠号 尿液粪便给药前 给药后 后-前 给药前 给药后 后-前1 9386.6 14327.7 4941.1 1278.0 2564.7 1286.7 2 15550.5 5067.8 -10482.7 1210.8 2968.6 1757.8 3 16890.0 9871.3 -7018.7 1356.8 3583.2 2226.4 4 20270.2 5416.4 -14853.8 1295.2 1744.5 449.3 5 2908.8 4513.1 1604.3 963.6 1081.2 117.6 6 7126.8 6448.8 -678.0 1227.6 1704.8 477.2 7 27214.1 3200.0 -24014.1 1673.2 2899.3 1226.1(x± s)14192.4±8326.3 6977.9±3853.7 -7214.6±10161.7 1286.5±211.4 2363.8±879.7* 1077.3±766.5 P 0.1090.010

2.3 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸相对量变化大鼠几乎不排汗,尿液和粪便排泄的尿酸总量可视为尿酸的总排泄量(100%)。将表2数据转化后可见:正常情况下,雄性Uox-/-大鼠的尿液尿酸排泄量约占90%,粪便排泄量约10%;给予排毒养颜胶囊后,大鼠的尿液尿酸排泄量减少到约70%,粪便排泄量升高到约30%;差异均具有统计学意义,见表3。

表3 大鼠给药前后尿液粪便的占比(±s,%)

表3 大鼠给药前后尿液粪便的占比(±s,%)

注:与给药前相比,*P<0.05。

尿液 粪便鼠号给药前 给药后 给药前 给药后1 88.0 84.8 12.0 15.2 2 92.8 63.1 7.2 36.9 3 92.6 73.4 7.4 26.6 4 94.0 75.6 6.0 24.5 5 75.1 80.7 24.9 19.3 6 85.3 79.1 14.7 20.9 7 94.2 52.5 5.8 47.5(x ± s)88.9±6.9 11.1±6.9* 72.7±11.3 27.3±11.3*P 0.040 0.040

2.4 大鼠给药前后的排泄量变化 排毒养颜胶囊具有促进排便的作用。正常情况下,成年雄性Uox-/-大鼠的24 h尿量约25 mL;给予排毒养颜胶囊后,尿液量减少到18.5 mL,减少约20%(23.2%)。正常的粪便排泄量约6 g,用药后增加到8 g,增加约40%(38.9%),差异具有统计学意义。但将大小便排泄总量进行比较,发现用药后约只减少10%,差异无统计学意义,见表4。

2.5 大鼠给药前后排泄物尿酸含量的变化 考虑到排毒养颜胶囊能改变大小便的排泄比例,为了考查该药能否改变排泄物中的尿酸含量(浓度),对排泄物尿酸浓度进一步分析发现,用药后尿液中尿酸浓度呈下降趋势,粪便中的尿酸含量呈增加趋势,但差异没有统计学意义,见表5。

表4 大鼠给药前后24 h尿液粪便量的变化

表5 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸含量(±s,μg/g)的变化

表5 大鼠给药前后24 h排泄物尿酸含量(±s,μg/g)的变化

注:与给药前相比,*P<0.05;假定尿液的比重为1。

尿液粪便鼠号 给药前 给药后 后-前 给药前 给药后 后-前1 315.0 471.3 156.3 177.5 342.9 165.4 2 1007.2 341.0 -666.1 171.5 294.5 123.0 3 487.9 390.2 -97.7 197.8 319.9 122.1 4 633.0 283.3 -349.8 309.9 274.3 -35.6 5 175.4 334.3 158.9 199.1 177.8 -21.3 6 390.7 369.8 -21.0 256.8 288.9 32.1 7 1120.8 297.4 -823.4 268.1 288.2 20.1(x± s)590.0±354.8 355.3±63.3 -234.7±391.2 225.8±52.6 283.8±52.1 58.0±78.5 P 0.1640.099

3 讨论

Uox-/-大鼠是我们采用CRISPR/Cas9技术研制的新型大鼠(以SD大鼠为背景)[4]。相比野生型SD大鼠[6],该大鼠由于缺乏尿酸酶,血尿酸值明显升高。Uox-/-雄鼠的尿酸值接近成年男性的血尿酸值,甚至达到高尿酸血症的标准。可喜的是,该大鼠可以长期存活,是研究高尿酸血症的“理想模型动物”。

一般认为尿酸的排泄主要通过肾脏,因为该途径占到排泄总量的2/3以上,只有不到1/3的尿酸从肠道排泄[2-6]。然而,课题组前期研究发现,有大量的尿酸分布在大鼠肠液中,其总量约为血液量的2~3倍,且与血尿酸水平存在较好的相关性[3]。由于尿酸在肠道下段存在重吸收现象,因此肠道排泄的尿酸总量仍然较小[3]。如果加速肠道尿酸排出,理应具有一定的降血尿酸作用,可能还兼具有不良反应少而轻的特点。

排毒养颜胶囊是国家药物监督管理部门批准上市的通便排毒中成药,由大黄、西洋参、白术、青阳参、小红参、荷叶、枳实等药物组成。由于尿酸在肠道具有较高分布[3],通便应该有利于粪便排出,继而有利于肠道中的尿酸排出,从而产生降血尿酸效果。通常,体内的尿酸2/3由内源性嘌呤代谢而来,由食物摄入嘌呤生成的尿酸不到1/3[2-6]。本研究采用Uox-/-大鼠,对大鼠没有进行饮食限制,比较接近临床发病情况。由于排毒养颜胶囊具有通便作用,本研究也就避免了灌胃造模可能出现的假阳性治疗效果。从对大鼠大、小便尿酸排泄量的结果看,用药后小便尿酸排泄量减少,但大便尿酸排泄量增加。因此,本研究中,大鼠的血尿酸水平降低可以用促进肠道排泄尿酸来解释。服用药物后,大鼠的小便排泄减少,大便排泄增加;但从大、小便排泄总量来看,变化并不明显,平均只减少了约10%,差异无统计学意义(表4);这间接提示用药对大鼠饮食总量的影响较小。从大、小便尿酸含量(浓度)看,用药后粪便量排泄增加,且粪便中尿酸含量也有增加趋势,提示排毒养颜胶囊还具有一定的促肠道分泌尿酸的作用,但由于本研究样本量偏小,未见统计学差异。

虽然有采用尿酸吸附剂蒙脱石口服降尿酸的报道[7],但传统促尿酸排泄的途径仍是促进肾脏排泄[2]。在高尿酸血症的背景下,该途径可能进一步加重肾脏负担。通过肠道排尿酸,理论上是有利于降低肾脏负担的。在本研究中可以看到,使用排毒养颜胶囊后,血尿酸下降的同时,尿中排出的尿酸总量和浓度也是减少的,显然这对保护肾功能有利。

综上所述,排毒养颜胶囊可以通过增加肠道尿酸排泄降低血尿酸水平。

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