56 ℃ 30 min灭活标本后对肿瘤标志物和激素相关指标检验结果及存储稳定性的影响

毕冬明，张 欣，杨 雪，许安春

成都中医药大学附属医院：1.核医学科；2.检验科，四川成都 610000

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)为冠状病毒β属中的新成员，病毒传染性强，其导致的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并按甲类传染病管理。在《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》(试行第七版)[1]中明确指出：“在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能”，在多人同时工作的大空间式实验室中，离心后开盖产生的气溶胶扩散范围更广，这有可能是导致实验室检验工作者暴露并感染的潜在原因之一。如何做好实验室生物安全防护是值得探讨的问题，诊疗方案中提出“基于对冠状病毒理化特性的认识研究，病毒对紫外线和热敏感，56 ℃ 30 min可有效灭活病毒”，但灭活后标本的检测结果是否受影响，一直是检验工作者关注的重点[2-3]，此前已有56 ℃ 30 min对SARS-CoV-2核酸检测等临床指标灭活后检测结果是否有影响的相关研究[4]。本研究关注的是一部分特定人群，如糖尿病、高血压、癌症、妊娠期孕妇等人群，这类人群本身机体免疫力低下，感染风险、重症及死亡可能性均高于普通人群，一旦感染，更容易引发急性呼吸窘迫综合征、多器官功能衰竭等危重症，危及生命。针对此类人群，实验室相关指标不但包括普通患者诊疗所需常规项目，还包括自身疾病或普通患者需求的其他特殊项目，如肿瘤标志物、激素等检测项目。本研究一方面研究肿瘤标志物、激素相关指标检验标本经过56 ℃ 30 min灭活后结果的变化并且探讨产生变化的原因，另一方面研究标本稳定性是否因灭活而发生变化，进而影响实验室复核工作。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年2月21日本院普通住院患者30例送检血清(促凝剂)标本，无脂血、溶血，覆盖高、中、低浓度。30例患者中，糖尿病患者10例，肿瘤标志物患者10例，妊娠期孕妇10例。验证项目为(1)甲状腺激素：甲状腺素(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、血清抗甲状腺过氧化物酶(A-TPO)，促甲状腺素受体抗体(Anti-TRab)、甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺降钙素(HCT);(2)性激素：催乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、黄体酮(P)、睾丸素(T)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)；(3)肿瘤标志物：甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Fer)、血清糖类抗原(CA)125、CA199、CA153、CA724、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA-211)、前列腺特异抗原(PSA)、游离前列腺特异抗原(fPSA)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、人附睾蛋白4(HE4)；(4)胰岛素功能：胰岛素(INS)、C肽(C-P)。并检测在非溶血状态下灭活前后NSE、INS、CYFRA-211的水平。

1.2仪器 罗氏COBAS e601电化学发光仪。

1.3标本处理 灭活前后项目结果验证:标本放入事先设定好的56 ℃干浴箱内，放置30 min灭活后检验所有项目。测定完后，保存至2～8 ℃冰箱，在稳定期的最后时限内，复查所有项目,验证灭活标本的稳定性。NSE、INS、CYFRA-211非溶血状态下灭活前后验证:先分离血清进行检验，检测后放置在56 ℃ 30 min干浴箱中灭活，再次检验，比较灭活前后3个指标的水平变化。

2 结 果

2.1灭活前后结果比较 灭活前INS、CYFRA-211水平低于灭活后，灭活前NSE水平高于灭活后，差异有统计学意义(P<0.05)，其他所有项目差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2灭活后标本检验结果回收率 灭活后的所有项目回收率在90%～110%，所有灭活标本在存储条件不变的情况下稳定性无差异。见表2。

2.3NSE、INS、CYFRA-211在非溶血状态下灭活前后结果比较 在非溶血状态下，灭活前后NSE、INS水平变化，差异无统计学意义(P>0.05)，CYFRA-211水平差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 灭活前与灭活后检验指标比较

续表1 灭活前与灭活后检验指标比较

表2 检验项目的保存时效及灭活后检验结果回收率

表3 NSE、INS、CYFRA-211在非溶血状态下灭活前后结果比较

3 讨 论

糖尿病患者发生COVID-19的风险更高，病情更为严重，一篇关于41例COVID-19感染者的研究发现，32%的感染者合并其他疾病，位居前3位的分别为糖尿病(20%)、高血压(15%)、心血管疾病(15%)[7]。2020年2月7日，JAMA上发表的138例COVID-19肺炎患者的回顾性研究显示，64例(46.4%)有1种或以上的基础性疾病，其中14例(10.1%)合并糖尿病[8]。而妊娠期孕妇由于妊娠引起心肺负荷增加，感染后病情可能会更加危重，导致严重的不良妊娠结局，甚至引起孕妇及围生儿死亡[9]。医院是人流的集散地，也是感染的重灾区，但大多数肿瘤患者又常需到医院进行常规化疗或随诊复查，加之肿瘤患者机体免疫力低下，成为COVID-19的最易感人群。在COVID-19疫情下，检验项目更要保证结果不受影响及标本稳定性良好，确保复核标本不受干扰。

本研究使用的检验方法为免疫学中的电化学发光法，为抗原抗体结合反应，针对有糖尿病、高血压等基础疾病、孕妇及肿瘤等疑似COVID-19患者主要检验肿瘤标志物和激素等临床指标。诊疗指南推荐灭活方式为56 ℃ 30 min，在此状态下，可能使蛋白质发生变性，使抗原抗体结合出现异常。经过本研究验证，只有NSE、CYFRA-211、INS水平在灭活前后出现变化，其他检验指标灭活前后水平及稳定性均无变化，证明灭活对抗原抗体结合位点、蛋白质活性或免疫原性没有影响。

NSE和INS这两项指标检验结果受影响因素较多，影响最大的就是溶血[10-12]。在高温灭活的过程中，红细胞发生膨胀，变形性降低[13],导致红细胞膜破坏。本研究结果显示，NSE和INS水平在非溶血状态下灭活前后无变化，但CYFRA-211水平出现了较大变化。由此推断，NSE水平升高是由于红细胞破裂导致细胞内NSE释放入血升高，INS降低也是由于红细胞破裂释放胰岛素降解酶(IDE)[14]，IDE会高效、特异地降解胰岛素。而CYFRA-211是细胞角蛋白的19片段，是一种可溶性酸性多肽，相对分子质量约为40 000，推测由于高温变性导致蛋白或蛋白结合位点变性，使结果有显著差异，此推断有待进一步研究。

检验工作者在接收检验肿瘤及激素标本后可针对性处理，严格按照实验生物安全操作指南进行检验，在对灭活前后检测结果无显著差异的项目标本进行56 ℃ 30 min灭活；有影响的项目，有条件的实验室应在生物安全柜里进行无害化处理后，才能进行检验，没有条件的应提前告知临床结果可能受影响。尽量降低检验人员职业暴露和感染风险，防止实验室污染，为临床提供准确的检验结果，更高效地服务于临床COVID-19防治救治工作。