西藏班戈县牦牛病毒性腹泻病抗体血清学检测及分析

甘富斌，罗润波，扎西次仁，白玛桑珠，扎西旺杰，索朗斯珠*

（1.林芝市农业农村局畜牧兽医站动物疫病预防控制中心，西藏 林芝 860000；2.西藏农牧学院，西藏 林芝 860000；3.西藏那曲市班戈县农牧科学技术服务站，西藏 班戈 852501）

牛病毒性腹泻病（Bovine Viral Diarrhea，BVD），是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV，BVDV)感染牛，引起的以发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病[1]。各年龄阶段的牛都易感，其次为牦牛、水牛、山羊、绵羊、猪及骆驼和鹿等多种野生反刍动物[2]。从1980年有报道至今该病在我国迅速蔓延，流行广泛[3-5]。我国将其列为三类动物疫病[6]。为调查西藏班戈县牦牛群中病毒性腹泻病的流行情况，2019年采用随机抽样的方法对班戈县10个乡镇进行了牦牛血清的采集。利用酶联免疫吸附法（ELISA）对血清中抗体进行了检测。

1 材料和方法

1.1 血清

2019年4月至6月从西藏班戈县10个乡镇共采集牦牛血清455头份。

1.2 实验仪器

酶标仪（雷杜公司，型号：RT-2100C）、恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号：BSC-250）、离心机（金坛市盛蓝仪器制造有限公司，型号：TGL-12B）、移液器（eppendorf，100μL、10μL、300μL排枪）、纯水仪（杭州东邦科技有限公司，型号：DB-S）。

1.3 实验材料

牛病毒性腹泻抗体酶联免疫分析试剂盒（上海泸鼎生物科技有限公司提供，产品批号：19-0827-D15）

1.4 试验方法

双抗原夹心法，具体操作依照试剂盒说明。

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00；阴性对照平均值≤0.10。

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15。

阴性判定：样品OD值＜临界值（CUT OFF）者为牛病毒性腹泻抗体（BVDVAb）阴性；阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为牛病毒性腹泻抗体（BVDV Ab）阳性。

2 结果

本次试验结果显示，阴阳性对照孔成立，试验有效。具体试验结果见表1。

实验结果显示，本次共检测牦牛血清455头份，阳性血清36头份，总体阳性率7.91%。各乡镇抗体阳性差异较大，其中新吉乡、保吉乡阳性率最高，分别是20%和19.57%。普保镇和佳琼镇未检出阳性血清，阳性率为0。

3 讨论

班戈县455头份牦牛血清抗体检测结果显示总体阳性率7.91%。结合流行病学调查显示，当地均未进行牛病毒性腹泻病的疫苗免疫工作，表明班戈县牦牛群中有病毒性腹泻病的流行，为保障当地牦牛养殖业的健康发展，需采取相应的防治措施。有条件的养殖户、养殖场应该进行病毒性腹泻病的筛查工作，淘汰阳性牛，同时对健康牛进行疫苗接种。发病牛采取隔离治疗，治疗原则以抗病毒、调节胃肠功能和酸碱平衡、清热、解毒、强心、补液、消炎、止血等对症治疗和综合疗法为主[7-8]。

实验结果显示不同乡镇之间牦牛病毒性腹泻病血清抗体阳性情况差异较大，阳性率在0～20%。产生这种现象的原因可能是各乡镇采样具有随机性，样本量不够大或者不具有代表性，导致检测结果差异较大。也可能是因为班戈县各乡镇辖区面积较大，相互之间牦牛交易较少，各乡镇之间疾病的流行情况存在一定的差异。

刘梦媛[9]等人在2011年采集了西藏的287头份牦牛血清进行了牛病毒性腹泻抗体检测，结果检出阳性血清样品145头份,阳性率为53.65%；程少龙[10]等人2014-2016年期间先后从西藏不同地区采集牦牛血清920份,采用ELISA法进行血清抗体检测。结果显示西藏牦牛病毒性腹泻血清平均抗体阳性率48.70%。罗润波[11]等人2017年对西藏184头份牦牛血清进行了抗体检测，结果显示阳性血清数11头份，阳性率5.98%。以上文献数据显示，西藏牦牛病毒性腹泻病各地血清抗体阳性率差异较大。这可能与各地牦牛感染情况、检测时间、动物身体状况及所使用的检测试剂盒有关。但结果均显示 西藏牦牛群中有该病的流行。

表1 班戈县牦牛病毒性腹泻病抗体检测结果