电针“三阴交-悬钟”对类痛经模型大鼠血浆血栓素B2（TXB2）、六酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的影响

辛思源 杨志新 郭建恩 林凤 李春华

摘 要：本研究观察电针对类痛经模型大鼠的镇痛效应、以及血浆血栓素B2和六酮前列腺素F1α的影响，来探讨针刺对胞宫疼痛缓解作用的机制，对“三阴交-悬钟”的特异性进行初步探讨。

关键词：电针;三阴交-悬钟;痛经;扭体反应;血栓素B2;六酮前列腺素F1α

一、材料与方法

（一）实验动物与分组

本动物实验选用48只清洁级健康雌性SD大鼠，鼠龄3个月，体重为（240±20）g，性成熟且未交配。饲养期给予普通清洁级饲料和自由饮水，室温为（20±1）℃，湿度为（45±5）%，日光灯照射。采用随机方法将大鼠分为：对照组、模型组、三阴交组、悬钟组、“三阴交-悬钟”组、非穴组，共6组，每组8只。

（二）主要仪器与实验试剂

G6805-Ⅱ型电针仪;一次性针灸针;5415R高速离心机;MDF-u50A型超低温冰箱;苯甲酸雌二醇注射液;缩宫素注射液;6-酮-前列腺素F1α放免试剂盒;血栓素B2放免试剂盒;乙二胺四乙酸及抑肤酶。

（三）实验造模

选择处在动情间期的大鼠，来制备实验性类痛经大鼠模型。模型组及各电针组要连续10d于皮下注射苯甲酸雌二醇，期间第一、第10天每只大鼠为皮下给药0.5mg，余下日为0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后给予腹腔注射缩宫素0.2mL/只。对照组：每日每只大鼠皮下注射同等剂量的生理盐水，待第10天皮下注射生理盐水1h后，每只大鼠予以腹腔注射生理盐水0.2mL。

（四）实验取穴及针刺方法

实验取穴：根据大鼠的生理特点、形态以及解剖的位置，依据《实验针灸学》中穴位的定位标准，选取相对穴“三阴交-悬钟”。三阴交穴：于大鼠后肢内踝尖上10mm处;悬钟穴：于大鼠后肢外踝尖上10mm处，与三阴交穴位置相对;非穴：与三阴交、悬钟穴处于同一水平，旁开对照点，分别于两穴左侧旁开3mm处。每组皆为双侧选穴。

电针方法：三阴交、悬钟和非穴均为直刺3mm左右，相对穴“三阴交-悬钟穴”为透刺，透刺方向为三阴交透悬钟，且要于该穴位近心端约旁开2-3mm处，再行一针，浅入皮肤即可，在两针之间放置一棉球以防止发生短路，并用胶布固定。分别使两针连电针仪正极、负极，刺激频率为2/15Hz，强度为1mA，20min。在实验开始开始后的第1、3、5、7d进行实验干预，共4次。对照组与模型组以同样的方法和时间固定，不给予电针处理。

（五）大鼠扭体反应分级

扭體反应是目前公认的评价指标，将扭体行为分为0～3级。大鼠前爪平放于盒底的正常探查行为视为0级;大鼠身体斜向一边视为1级;大鼠后肢伸展、后爪背屈的同时躯体伸展、并伴有频繁盆向骨侧旋转视为2级;大鼠腹部肌肉收缩、后肢后伸视为3级。需记录实验开始20min内大鼠的扭体评分、扭体潜伏期。扭体总分为：0级×0分+1级×1分+2级×2分+3级×3分，扭体潜伏期：注射缩宫素后直至出现扭体反应的时间段。

（六）实验取材及检测方法

将大鼠断头后取血，每只大鼠取血2mL，将其血液放置于抗凝试管（30μL EDTA，40μL抑肽酶）中，经过低温离心（4℃，3500r/min），15min后，再将其血浆放置于-20℃环境中，以保存备用。血浆中TXB2及其6-keto-PGF1α的含量分别采用常规放射免疫法来测定。

（七）统计分析

本实验数据应用SPSS21.0进行分析，基础数据用均数±标准差（x±s）来表示。各组间差异采用单因素方差分析或非参数检验进行比较，以P<0.05或P<0.01作为差异有统计学意义。

二、实验结果

（一）电针对扭体的影响

与对照组相比，模型组的扭体评分值明显增高，扭体潜伏期时长明显缩短（P<0.01），证实模型大鼠已成功制备。与对照组比较，各电针组（除“三阴交-悬钟”组外）扭体评分值明显增高，扭体潜伏期时长明显缩短（P<0.01，P<0.01）。与模型组相比，各电针组的扭体评分值明显减少，扭体潜伏期时长明显延长（P<0.01，P<0.01）。

各电针组之间比较，“三阴交-悬钟”组、三阴交组的扭体评分较悬钟组、非三阴交-悬钟组明显降低（P<0.01），“三阴交-悬钟”组、三阴交组、悬钟组扭体潜伏期较非三阴交-悬钟组明显延长（P<0.05，P<0.01）。详见表1。

（二）电针对血浆TXB2、6-keto-PGF1α的含量以及二者比值的影响

和对照组相比，模型组血浆TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值显著增高（P<0.01），血浆6-keto-PGF1α的含量显著降低（P<0.01）;各电针组的血浆TXB2（除“三阴交-悬钟”组）、TXB2/6-keto-PGF1α的比值显著增高（P<0.01），血浆6-keto-PGF1α的含量显著降低（P<0.01）。

和模型组相比，各电针组血浆TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值（除“三阴交-悬钟”组）显著降低（P<0.01），“三阴交-悬钟”组6-keto-PGF1α的含量显著增高（P<0.01），其他各电针组血浆6-keto-PGF1α的含量无明显变化（P>0.05）。

各电针组间相比较，“三阴交-悬钟”组、三阴交组、悬钟组血浆中TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值较非三阴交-悬钟组显著降低（P<0.01）;“三阴交-悬钟”组TXB2的含量较三阴交组显著降低（P<0.05）;“三阴交-悬钟”组血浆TXB2/6-keto-PGF1α的比值较三阴交组和悬钟组显著降低（P<0.01）;“三阴交-悬钟”组和三阴交组血浆中6-keto-PGF1α的含量较非三阴交-悬钟组显著增高（P<0.01），“三阴交-悬钟”组血浆6-keto-PGF1α的含量较三阴交组、悬钟组显著增高（P<0.01）。详见表2。

三、讨论

文献研究显示，痛经是针灸治疗妇产科疾病中应用最多的病种[1]，且三阴交-悬钟的联合应用对于痛经具有较好的治疗效果。本实验结果提示：在痛经大鼠的血液中，其内在的血小板存在激活、释放反应的相对增强，从而可以导致血浆中TXB2升高，致使二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α也随之失衡，以致子宫内缺血缺氧，痛经发生。

各电针组血浆中TXB2的含量、及其二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α显著降低，可能是由于电针可以降低血浆中TXB2的含量，从而调节二者的比值以抑制血浆中血小板的聚集，使血管痉挛状态得以改善，以缓解疼痛。“三阴交-悬钟”组中TXB2的含量较三阴交组较明显著降低，可能是由于电针相对穴“三阴交-悬钟”可调节血管收缩和血管舒张，并通过血管的舒缩物质对TXB2和6-keto-PGF1α两者的平衡加以调节，使其作用效果较单纯针刺单一穴位更为明显。

有研究结果表明：相对穴“三陰交-悬钟”具有协同增效作用[2]。电针三阴交-悬钟能够较为明显的降低TXB2的含量以及TXB2/6-keto-PG F1α的比值，从而调整子宫内在的微环境，以缓解痛经。

本实验初步证实：电针相对穴“三阴交-悬钟”可调节血管舒张、收缩物质，且与其他单穴相比，相对穴具有一定的特异性，从而进一步证实经穴效应的存在，且“三阴交”“悬钟”二者在解剖位置上阴阳表里相对，“三阴交-悬钟”属相对穴。故在实验层面进一步提示“相对穴”与“经穴效应”的内在关系。

参考文献：

[1]辛思源，庞嘉，郭建恩，等.从经穴效应角度探讨相对穴三阴交-悬钟的内在关系[J].辽宁中医杂志，2017，44（12）：2631-2633.

[2]赵雅芳，李春华，嵇波，等.电针三阴交、血海对痛经模型大鼠子宫微循环的影响[J].微循环学杂志，2011，（2）：10-14.

基金项目：2018年4月河北省高等学校科学技术研究项目：基于三阴交-悬钟对疼痛的调控作用探讨相对穴与经穴效应的相关性（No.NQ2018082）

作者简介：辛思源（1986—），女，汉族，河北承德人，硕士，讲师，研究方向：经穴主治规律研究。

通讯作者：李春华（1982—），女，汉族，河北保定人，博士，副主任医师，研究方向：穴位效应特异性研究。