超高效液相色谱-串联质谱法测定酱腌菜中纽甜

杨燕红，王雪蓉，杨 丽，杨金川，马义虔

(贵州省产品质量检验检测院，贵州 贵阳 550016)

纽甜，又叫尼尔甜，是一种白色结晶粉末状的功能性甜味剂。因其具有甜味协和、口感纯正、无能量、无毒害、安全性较高、甜度比蔗糖甜7000～13000倍，比阿斯巴甜甜30～60倍成本也比其他的甜味剂低，并因其能改善食品的风味与口感，而深受生产者欢迎，被广泛用于食品行业中[1]。

目前，随着生活水平的提高，人们对健康也是越来越注重，因此国家对甜味剂使用要求越来越严格，其允许添加量也在不断地降低。经查阅国家标准与相关文献，主要采用的检测方法是(GB5009.247-2016)《食品安全国家标准 食品中纽甜的测定》，该标准中的方法前处理步骤相对复杂、耗时较长，且在进入液相色谱分析的过程中，会出现较多干扰物，并因纽甜的甜度较高，添加的量较少，用高效液相色谱法判断食品中是否添加纽甜较困难，故开发出更为简单快速、灵敏度高的检测方法十分必要。本方法在GB5009.247-2016的基础上进行了改进，建立了超高效液相色谱-离子质谱联用测定酱腌菜中纽甜的方法。该方法降低了实验室的成本，简化了样品的前处理过程，缩短了样品检测时间，提高了检测的灵敏度，干扰物少，对样品中是否添加纽甜能准确地进行判断[4-5]。本人对食品中纽甜含量检测的国标方法进行优化，旨在提高纽甜检测水平。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

QTRAP 5500液相色谱-质谱联用仪，AB SCIEX公司；H1850台式高速离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；MultiReax涡旋振荡器，Heielolph公司；AL204电子天平，德国梅特勒有限公司；Chorusl超纯水系统，英国Elga公司。

1.2 材料与试剂

乙腈、NaCl均购置于Sigma公司；纽甜标准品购于北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司。

市售酱腌菜样品：高山细笋、糖醋大蒜、姜蒜糟辣椒、节节泡椒、爽口下饭菜，经粉碎机粉碎后保存于4 ℃冰箱中，待测。

2 实验方法

2.1 样品提取、净化

准确称取2.0 g(精确至0.01 g)样品于50 mL离心管中，加入10 mL水和10 mL乙腈，涡旋振荡30 min，加入2.0～3.0 g NaCl，涡旋振荡5 min，然后以8000 r/min离心5 min[5]。

取2 mL的上清液于10 mL的离心管中，加入100 mg(Bondesil-C18，40 μm，100 gm)净化剂，涡旋振荡2 min，经0.22 μm有机滤膜超滤后上机测定。

2.2 标准溶液的配制

准确称取0.010 g纽甜标准品置于10 mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容，配制成 1000 μg/mL的标准储备溶液；逐级稀释，配制一系列质量浓度为1、10、20、50、100 ng/mL的标准溶液。

2.3 加标回收试验

称取2.0 g酱腌菜于50 mL离心管中，加入 10 μg/mL的标准储备溶液50 μL(添加水平为50 ng/mL)，分别测定含量并计算加标回收率。

2.4 液相色谱串联质谱条件

2.4.1 液相条件

色谱柱：Agilent C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)，流动相A为水，流动相B为甲醇，进样量5 μL。梯度洗脱程序见表1。

表1 纽甜的流动相梯度洗脱表

2.4.2 质谱条件

电离模式：电喷雾负离子(ESI-)；扫描模式：多反应监测(MRM)；电喷雾电压：-4500 V，离子源温度：550 ℃，气帘气压力：0.088 MPa；雾化气压力：0.21 MPa，辅助气：0.062 MPa。

3 结果与讨论

3.1 线性方程和检出限

按照“2.4”方法进行测定纽甜，以1、10、20、50、100 ng/mL的纽甜标准溶液为横坐标，定量离子对峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为Y=4.94×103X-2.18×104，相关系数R2=0.9974，表明纽甜在0～100 ng/mL范围内呈良好的线性关系。色谱图见图1。

在阴性酱腌菜样品中添加目标化合物的方法，按取样量2.0 g，试样定容体积10 mL，0.001 μg/mL作为最低检测浓度计算，得到该方法的检出限为1.0 μg/kg。

图1 浓度为100 ng/mL纽甜的色谱图

3.2 净化方式的优化

加入C18净化剂20 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg，考察净化达最佳效果时的净化剂含量。当净化剂为20 mg、50 mg时，目标物虽然能检出，但回收率为60.1%、65.4%，干扰峰较多；净化剂为100 mg、150 mg时，色谱图峰型较好，回收率为93.5%、93.9%，干扰干扰峰少；净化剂为200 mg时，回收率下降；综合成本和试验结果，最佳净化剂用量为100 mg，见表2。

表2 净化剂选择的结果

3.3 方法准确度和精密度

用加标回收试验来验证方法的准确度。重复进样测定5次，结果见表3。

表3 酱腌菜基质中纽甜加标回收率结果

由表3可知，该方法测定酱腌菜中纽甜的回收率为93.2%～97.6%，相对标准偏差RSD为2.01%，表明该方法准确可靠、重现性良好，符合实验分析方法要求。

3.4 样品测定结果

从市场上购买的5份酱腌菜样品进行测定。由表4可知，5份酱腌菜中均未检测出纽甜。

表4 酱腌菜样品中纽甜的含量

4 结 论

采用超高效液相色谱-串联质谱法测定 5 份酱腌菜中纽甜的含量，用净化剂C18粉末净化样品，加标回收率为93.2%～97.6%，RSD为2.01%，线性关系良好(相关系数 R2>0.997)，与标准(GB5009.247-2016)相比，缩短了前处理和检测时间，成本较低，灵敏度更高，能够更快速、更准确地判断酱腌菜中是否添加甜味剂纽甜。结果表明5 份酱腌菜中均未检测出纽甜。消费者可能对酱腌菜风味的追求多数注重酸的口感，因此，市场上售卖的酱腌菜未添加纽甜。