老年获得性免疫缺陷综合征患者Th17/Treg失衡对继发真菌感染的影响

张亚武 (武汉市金银潭医院感染四科，湖北 武汉 430012)

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种传染性较强的传染病，可经性接触、血液、母婴传播等途径感染，于感染科较为多见，对社会具有较大危害性〔1〕。该病既往多发于青壮年，但随着独居老人的增多，老年AIDS发病率呈逐年增长趋势，而老年群体因自身免疫力低下，且多合并基础疾病，若其长期应用抗生素易发生继发性真菌感染，进而增加临床治疗难度，影响预后〔2,3〕。辅助性T细胞(Th)17、调节性T细胞(Treg)是CD4T细胞中功能相反的2个亚群，其于真菌感染、肿瘤、自身免疫系疾病发展过程中均具有重要作用。有学者指出，Th17/Treg失衡与老年AIDS患者继发真菌感染存在一定相关性〔4〕。但该观点尚未得到临床证实，且相关研究报道较少，本研究旨在探讨老年AIDS患者Th17/Treg失衡对继发真菌感染的影响，为临床诊治提供有效指导。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性收集武汉市金银潭医院2018年4月至2019年10月就诊的87例老年AIDS患者临床资料，其中男47例，女40例；年龄64～82岁，平均(73.46±3.45)岁；纳入条件：均符合《中国艾滋病诊疗指南(2018版)》〔5〕中AIDS诊断标准，且经实验室蛋白印迹实验法检查证实血清人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体为阳性；无心、肝、肾等重要脏器功能不全；近期未使用抗菌药物；临床资料完整。排除条件：合并其他感染性疾病；合并自身免疫系统疾病；合并中枢系统疾病；合并严重心脑血管疾病；精神异常，交流障碍。根据所有老年AIDS患者继发真菌感染情况，将其分为单纯AIDS组(n=53)与继发真菌感染AIDS组(n=34)，选取同期于我院正常体检的32例老年群体作为对照组。3组年龄、性别、体重、不良嗜好、婚姻状况、文化程度对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组基线资料对比

1.2方法 统计所有老年AIDS患者病原菌检查结果，检查方法：取患者血液、尿液、痰液、皮屑、粪便等同一标本进行真菌培养，若一个标本内连续2次及以上均检出同1种真菌或经涂片检查可见大量真菌孢子或菌丝，结合继发性真菌感染临床症状，并依据《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则(第三次修订)》〔6〕中相关标准分组。Th17、Treg检测方法：取患者清晨空腹肘静脉血10 ml，置于肝素抗凝管内，以聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC)备用；①Th17检测：取1×106PBMC，加入5 μg/L佛波醇乙酯(PMA)与1 mg/L离子霉素，于37℃环境下孵育5 h后，磷酸盐缓冲液(PBS)洗2遍；分别加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC，于4℃避光环境下进行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；将洗好后标本应用Fix/Prem medium A 液固定，待固定15 min后，分别添加Fix/Prem medium B 液、FITC-IL-17A破膜进行染色，于室温避光环境下孵育20 min后，PBS洗2遍，应用美国BD公司生产的FACS Calibur流式细胞仪，采用Flowjo软件评估Th17含量；②Treg检测：取1×106PBMC，分别加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC、20 μg CD25-PE，于4℃环境下进行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；将洗好后标本加入1 ml Foxp3固定/破膜工作液，于4℃环境下孵育30 min，待孵育结束后，离心去除上层清液，并应用Foxp3破膜缓冲液洗1遍；最后添加20 μl FITC-Foxp3抗体，于4℃环境下进行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍，并进行重悬细胞，应用美国BD公司生产的FACS Calibur流式细胞仪，以Flowjo软件分析Treg含量，比较3组Th17/Treg差异，分析Th17/Treg对老年AIDS继发真菌感染的影响。

1.3统计学方法 采用SPSS18.0软件进行t检验、单因素方差分析、LSD-t检验、一般线性回归检验、χ2检验，作线性回归方程。

2 结 果

2.13组Th17/Treg对比 对照组Th17/Treg(1.16±0.34)最高，其次为单纯AIDS组(0.58±0.13)，继发真菌感染AIDS组最低(0.21±0.07)，3组差异有统计学意义(F=189.636，P=0.000)。

2.2Th17/Treg比值与老年AIDS患者继发真菌感染的线性回归结果 将Th17/Treg比值作为自变量，将老年AIDS患者继发真菌感染作为因变量，线性回归检验结果显示，Th17/Treg失衡可能对老年AIDS患者继发真菌感染存在影响(P<0.05)，得到线性回归方程：Y=2.919-1.429 X。见表2。

表2 Th17/Treg比值与老年AIDS患者继发真菌感染的线性回归结果

3 讨 论

老年AIDS属于感染科常见疾病，主要因HIV病毒感染所致，具有较高致死率，对患者身心健康及生命安全具有严重影响〔6，7〕。因HIV入侵机体后易攻击CD4T淋巴细胞，破坏免疫功能，故老年AIDS继发性感染发生率较高，而继发真菌感染易导致产生耐药性，增加临床治疗难度，影响患者预后，而有研究显示，早期予以合理抗生素可有效扼制疾病发展，延长患者生存时间，因此尽早明确继发性真菌感染发生情况对临床诊治至关重要〔8，9〕。

Th17、Treg是CD4T淋巴细胞中主要的2个亚群，其中Th17是由Th0细胞于细胞白细胞介素(IL)-6、IL-23刺激下分化而来，具有分泌IL-17、IL-22等促炎因子作用，而IL-17可激活T细胞，刺激多细胞分泌炎症因子，加剧机体炎症反应，严重可诱发自身免疫性疾病〔10，11〕。Treg属于调节性T细胞的一种，除来源于胸腺外，还可由外周细胞诱导产生，于外源性抗原诱导下，可通过分泌相应细胞抑制因子与细胞间接触发挥免疫抑制功能，经大量研究显示，该细胞于肿瘤感染免疫、微生物感染免疫、免疫稳态维持等方面均具有重要作用〔12，13〕。而老年AIDS患者若发生继发性真菌感染，病原菌进入机体后易对免疫信号通路中胱天蛋白酶募集域蛋白9产生依赖性，进而促使Th17细胞分化，同时可通过特异性识别受体激发Th17细胞反应，抑制Th17细胞功能，同时据相关研究显示，Th17及其分泌的IL-7对真菌感染具有保护作用，故Th17于老年AIDS患者继发性真菌感染发展中具有重要作用〔14，15〕。研究指出，Treg于真菌感染导致的炎症反应早期可促进细胞增殖、活化，大量分泌IL-10及调节细胞毒性T细胞参与免疫反应过程，抑制机体炎症反应程度，同时于炎症反应晚期可抑制Th2细胞介导的免疫应答或变态反应，以减轻炎症作用，扼制疾病发展〔16〕。正常情况下，Th17与Treg细胞功能与分化过程呈相互对抗状态，且其比例相较平衡，但当两者比例失衡，易紊乱机体免疫稳定状态，增加真菌感染率，进而易导致老年AIDS患者继发真菌感染，而临床针对Th17/Treg失衡者，需对其进行病原菌检测，以了解病情发展，尽早予以临床治疗〔17，18〕。但本研究因纳入样本量较少，故研究结果存有一定局限性，临床仍需加大样本量探讨，以证实本研究结果真实性。

综上，Th17/Treg失衡可能对老年AIDS患者继发真菌感染存在影响，临床需密切监测老年AIDS患者Th17、Treg水平变化，并予以相应治疗措施，预防继发性真菌感染发生。