改良高效液相色谱法 快速测定豇豆中灭蝇胺

周杨 陈悦

灭蝇胺，又名环丙氨嗪，是一种高效、低毒的生态农药，针对双翅目昆虫有非常强的选择性。该药具有触杀和胃毒作用，内吸传导性强、持效期长，但作用速度较慢。目前，《食品安全国家标准？食品中农药最大残留限量》中规定，测定豇豆中灭蝇胺残留限量值不得超过0.5mg/kg，每日允许摄入量0.06mg/kg？bw。为保障食品安全，需要不断探寻更优质、便捷的检测方法。

一、实验部分

1.仪器、试剂和标准品。仪器：电子天平、高效液相色谱仪。试剂：甲醇、乙腈、乙酸铵、盐酸、氨水。标准品：见表1。

2.分析步骤。（1）标准溶液配制。①标准储备液：称取环丙氨嗪标准品0.100g（精确至0.0001g），用甲醇水（体积比为1： 1）溶解，转移至100mL容量瓶中并定容至刻度，贮存于-20℃至-16℃冰柜中备用。②标准系列工作液：吸取一定体积的环丙氨嗪标准储备液，用水将其稀释成标准系列工作液，现用现配。

（2）试样制备。称取试样10g（精确至0.01g）于100mL烧杯中，加入25mL乙酸铵-乙腈溶液（0.05mol/L，乙酸钠：乙腈=1： 5），用均质器混匀，静置10min，超声提取20min。过滤，再用约15mL乙酸铵-乙腈溶液（0.05mol/L，乙酸钠：乙腈=1： 5）提取，重复上述操作，收集流出液，滤入50mL具塞比色管中，并用乙酸铵-乙腈（0.05mol/L，乙酸钠：乙腈=1：5）溶液定容。盖上塞子，将滤液混合均匀。

准确吸取5mL提取液至圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上40℃浓缩至近干，加入0.1mol/L盐酸溶液约2mL，待净化。

用甲醇5mL、水5mL活化SCX萃取柱，将所得待测液转移至SCX柱中。用-5mL？的0.1mol/L盐酸溶液将圆底烧瓶中的残余物洗入SCX柱中，并重复一次。然后用水5mL、甲醇5mL淋洗SCX柱，弃去所有流出液并将小柱抽干。

用5mL氨水-甲醇溶液（氨水：甲醇=5：95）洗脱SCX柱，重复上述操作两遍，收集洗脱液于圆底烧瓶中。在旋转蒸发仪上40℃浓缩至近干，氮气吹干后用1.00mL乙腈-水（30：70）溶液溶解蒸残物，过膜，待测。

（3）仪器参数条件。色谱柱：ZORBAX？ SB-C18？4.6×150mm；流动相：甲醇：水=1：1；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；检测器：紫外检测器。

（4）以豇豆为试验对象进行研究。依据NY/T？ 1725-2009，对改变液相条件、色谱柱条件得到的数据进行比较。通过对样品本身及实验全过程进行比较，分析豇豆中灭蝇胺残留量的测定思路。对方法中以下几点进行改良：①NH2不锈钢柱改成C18柱；②流动相由乙腈+水（体积比，97+3）改为甲醇+水（体积比，50+50）；③标准品用甲醇+水（体积比，50+50）溶解。

二、结果与讨论

1.实验数据分析。以环丙氨嗪的浓度（ng/mL）作为横坐标，响应度（峰面积）作为纵坐标，进行线性回归分析（如表2所示）。

2.加标回收试验。将标准系列工作液配置成20ng/mL、200ng/mL、600ng/mL工作液。称取10g阴性样品，分别加入工作液1mL，同时进行低、中、高三个水平加标回收，每个水平测定3次，同时取20g空白基质同步处理，作为空白对照。表3为三个水平下，加标回收试验（n=6）的回收率的具体结果。

三、讨论

NH2不锈钢柱可以同时用于正相条件和反相条件，但是正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，如果保存溶剂和使用的流动相极性不同的话，需要用异丙醇过渡。并且NH2不锈钢使用寿命较短，易损坏，将NH2不锈钢柱改成C18柱，维护较为便利，且通用性佳，這一改变大大节省了实验成本。

标准品用甲醇水（体积比为1：1）进行稀释，可降低溶剂效应，确保目标峰不被溶剂峰影响，增加准确性。

对比230nm、220nm和215nm波长下相同小瓶的数据可以发现，在215nm波长下，环丙氨嗪的响应度最佳、灵敏度最好，根据光谱图可以看出最大吸收峰在206nm处，与数据结果相吻合。

流动相由乙腈+水（体积比，97+3）改为甲醇+水（体积比，50+50），降低溶剂效应，节约实验成本。

综上，通过数据比对发现改进后的方法稳定性好，可满足检测需求。