优化液质联用法对氟喹诺酮类药物残留的检测

□ 戴菲菲 广东省惠州市质量计量监督检测所

氟喹诺酮（fluoroquinolones，FQs）类药物具有6-氟-7-哌嗪-4-诺酮环的特征结构，且具备酸碱两性，因其具有机体吸收快、组织浓度高、杀菌效果好、抗菌谱广等优势，故在治疗家禽感染性疾病中的应用十分广泛。氟喹诺酮类药物对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、细胞内病原菌、霉形体及某些耐药菌株都有很好的抗菌活性，常用药物包括恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、沙拉沙星等。但是，随着氟喹诺酮类药物的广泛应用，其被滥用的问题也逐渐引起各方重视—长期食用氟喹诺酮类药物超标的肉类、蛋类等食物会致使人体内的抗生素蓄积，进而导致内分泌系统、消化系统、生殖系统等损伤，甚至产生细菌耐药性。当前，农业部制定了《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650-2019），发布《在食品动物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种兽药的决定》(农业部公告第2292号)等，以规范氟喹诺酮类药物的使用。

目前，适用于检测氟喹诺酮类药物残留的方法包括免疫分析法、微生物法、高效毛细管电泳分析法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等，在《国家食品安全监督抽检实施细则》中采用的方法主要有《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20366-2006）、《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21312-2007）等。由于GB/T 20366-2006中不使用固相萃取柱，且提取过程需使用大量乙腈和正己烷，并存在旋蒸耗时长等问题，导致实验不够简便快捷。因此，笔者从提取、旋蒸、定容等方面对GB/T 20366-2006的方法进行了优化，以期为动物源食品中氟喹诺酮类药物残留的测定提供参考。

1 仪器设备

1.1 检测仪器

液相色谱-串联质谱仪：AB SCIEX API 4000，配有电喷雾离子源；

ZORBAX Eclipse Plus C18 600Bar （3×100mm，1.8μm）。

1.2 前处理设备

均质器、旋转蒸发仪、氮吹仪、涡旋混匀器、离心机、分析天平、移液器、聚四氟乙烯离心管等。

1.3 试剂

甲酸，优级纯；乙腈、正己烷，色谱纯；一级水。

1.4 氟喹诺酮类药物标准品

恩诺沙星（Dr.）、环丙沙星（Dr.）、诺氟沙星（Dr.）、恩诺沙星（Dr.）、氧氟沙星（Dr.）、沙拉沙星（Dr.）。

用乙腈配制成1000mg/L的标准溶液，并逐级稀释配制成混合标准工作液。

2 实验方法

参照《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20366-2006）。

3 结果与分析

3.1 优化提取体积

分别用5、10、20mL甲酸-乙腈溶液提取待测样品2次，使用提取溶液总体积为10、20、40mL，其余步骤按照GB/T 20366-2006进行。结果显示，提取溶液体积与回收率呈正相关，依次为40.3%～50.6%、66.8%～75.2%、69.5%～77.4%。当提取溶液总体积为20mL时，既能得到较好的回收率，又可以降低有机溶剂的使用量。因此，将甲酸-乙腈溶液20mL作为优化后的提取体积，同时正己烷的用量相应减少。

3.2 优化旋转蒸发

在进行旋转蒸发操作时，经常因提取溶液中的水分较多不易蒸干而耗费大量时间。本实验在正己烷除脂后，于下层提取溶液中加入适量无水硫酸钠以除去提取溶液中的水分，同时提高旋蒸温度以减少蒸干时间。如表1所示，添加无水硫酸钠的同时提高旋蒸温度对回收率无显著影响，且旋蒸用时缩短了6～8分钟。因此，将添加无水硫酸钠、50℃旋蒸作为优化后的旋蒸条件。

表1 不同旋蒸条件的用时和回收率

3.3 优化定容液

GB/T 20366-2006使用的定容液为甲酸-乙腈（2+98），由于乙腈比例太高，导致峰形不好，响应不高，定量不准确。本试验将定容液改为乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2∶10）溶液后，峰形和响应都得到明显改善，回收率为85.1%～113.7%。因此，将乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2∶10）溶液作为优化后的定容条件。

4 结论

研究结果显示，采用10mL甲酸-乙腈溶液提取2次，并相应减少正己烷用量，添加无水硫酸钠后于50℃旋蒸，用乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2：10）定容，其余按照GB/T 20366-2006步骤进行，不仅能够在减少有机溶剂使用量的同时缩短实验用时，更可以改善峰形，提高响应值，进而得到令人满意的回收率。