血清人附睾蛋白4和共刺激分子B7-H3水平对宫颈癌术后患者预后的评估价值*

徐晓芳， 程黎明， 陈樑， 黄兴华， 李怡巍， 李宗恒

(1.德阳市人民医院， 四川 德阳 618000； 2.西南医科大学， 四川 泸州 646000)

宫颈癌是妇科中发病率较高的恶性肿瘤，且发病率与死亡率每年都在增加，严重威胁女性健康[1]。近年来，临床针对宫颈癌术后患者的预后评估主要参考宫颈癌国际妇产科联盟分期(international federation of gynecology and obstetrics，FIGO)，但由于这一标准无法客观评估宫旁与盆壁累及范围，尚未纳入淋巴结转移状态[2-3]。有研究报道，FIGO分期与手术病理分期总符合率仅占60%，所以对宫颈癌患者术后预后的评估应尽早找到特异性高的指标。肿瘤生物标志物是新兴的筛查指标，是在机体恶性肿瘤发生发展或人体处于异常状态而产生的特殊物质，目前已作为癌症早期筛查、诊断、预后评估与疗效评价的有效指标[4-5]。人附睾蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、共刺激分子B7-H3(costimulatory molecule B7-H3,B7-H3)是目前妇科恶性肿瘤中新型的标志物，宫颈癌的发生及发展与HE4、B7-H3密切相关，但目前应用于宫颈癌患者术后预后评估报道较少，本研究重点分析HE4、B7-H3表达水平对宫颈癌术后患者预后的评估价值，为宫颈癌预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月—2014年1月收治的行腹腔镜宫颈癌根治术患者300例为宫颈癌组，280例宫颈上皮内瘤变患者为良性组，选择同期体检健康的女性280例为对照组。纳入标准：(1)经组织病理学确诊，符合宫颈上皮内瘤变或宫颈癌诊断标准；(2)未接受过系统抗癌治疗者；(3)年龄25～74岁。排除标准：(1)术前进行治疗者；(2)合并严重心肝肾功能不全，其它肿瘤患者；(3)HIV阳性。300例宫颈癌患者：宫颈癌组FIGO分期[6]，Ⅰ期76例、Ⅱ期88例、Ⅲ期79例、Ⅳ期57例；肿瘤细胞分化程度，低分化112例、中分化108例、高分化80例；组织病理学分类，鳞癌158例、腺癌121例、腺鳞癌21例；肿瘤直径，≥5 cm 85例、<5 cm 215例；浸润深度，浅肌层92例、深肌层208例，淋巴结转移102例；平均(48.52±6.81)岁、绝经者68例。良性组平均(48.36±6.79)岁，绝经70例。对照组平均(48.85±6.80)岁，绝经者65例。各组年龄、绝经情况等资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究所有入选者皆为自愿参与本研究、且签署知情同意书；本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1HE4水平检测 宫颈癌组、良性组在术后非月经期间采集晨起空腹静脉血3 mL，对照组在非月经期间体检时采集晨起空腹静脉血3 mL，采用酶联免疫吸附法检测血清HE4水平。

1.2.2B7-H3水平检测 在收集的静脉血中加入B7-H3单抗，标本和标准品中的B7-H3与单抗结合，PBS液体洗涤5 min，按照1 ∶500的比例，加入羊标志的一抗5 mL，4℃放置过夜，PBS缓冲液洗涤3次，5 min/次，加入鼠来源的二抗2 mL，室温放置2 h，PBS液体洗涤5 min；加入显色底物，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄，读取酶标仪(型号SpectraMax Paradigm，Molecular Devices)450 nm处吸光度(OD)值，并按照B7-H3测定的标准曲线换算为浓度值。

1.3 观察指标

观察各组被检者及不同宫颈癌临床特征(年龄、月经状态、肿瘤直径、病理类型、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、浸润深度)患者的血清HE4、B7-H3水平，宫颈癌患者随访5年分析生存情况、比较死亡与存活患者血清HE4及B7-H3水平；分析血清HE4、B7-H3水平对宫颈癌术后患者预后的评估价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 血清HE4及B7-H3水平

结果显示，宫颈癌组、良性组患者HE4、B7-H3水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，宫颈癌组HE4、B7-H3水平高于良性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组被检者血清HE4、B7-H3水平Tab.1 Levels of serum HE4 and B7-H3 in

2.2 血清HE4及B7-H3水平与宫颈癌临床特征的关系

结果显示，不同FIGO临床分期、分化程度、淋巴结转移的宫颈癌患者的HE4及B7-H3水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)；而不同年龄、月经状态、肿瘤直径、病理类型、浸润深度宫颈癌患者的HE4、B7-H3水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同临床特征宫颈癌患者血清HE4和B7-H3水平Tab.2 Levels of serum HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer of different clinical characteristics

2.3 血清HE4、B7-H3水平与宫颈癌术后患者预后的关系

结果显示，300例宫颈癌术后患者持续随访5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡组血清HE4、B7-H3水平高于存活组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 宫颈癌术后5年存活或死亡患者血液HE4、B7-H3水平Tab.3 Levels of blood HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer survival or

2.4 血清HE4、B7-H3单独或联合检测对宫颈癌患者预后的评估价值

结果显示，300例宫颈癌术后患者的HE4、B7-H3指标分析发现，HE4、B7-H3对宫颈癌术后患者预后均有良好的预测价值，但HE4、B7-H3单一指标的预测价值低于2项指标联合的预测价值。见表4。

表4 血清HE4、B7-H3单独或联合检测对宫颈癌患者预后的评估价值Tab.4 Evaluation value of serum HE4 and B7-H3 alone or in combination for the prognosis of cervical cancer patients

图1 血清HE4、B7-H3单独或联合检测对宫颈癌患者预后的ROC曲线Fig.1 ROC curve of serum HE4 and B7-H3 alone or combined detection for the prognosis of cervical cancer patients

3 讨论

临床治疗宫颈癌首选方式为根治手术，切除宫颈癌患者的肿瘤组织而控制恶性肿瘤细胞扩散，由于大部分宫颈癌患者就诊时已为中晚期，病情危重，手术治疗后预后较差[7-9]。近年来。临床中评估预后主要依赖于影像学及血清学检查，但由于影像学手段对病灶或淋巴结转移诊断效果不理想，并且受到影像学诊断结果敏感度、特异度等多方面局限而影响应用[10-11]。

HE4为新型、潜在的肿瘤标志物。临床研究报道，在健康或良性瘤变组织或血清中含量不高，但在宫颈癌患者血清中水平升高，是目前作为宫颈癌早期筛查的有效指标[12]。关于HE4与宫颈癌术后预后的报道较少，近年来基础与临床研究提示，HE4可能与宫颈癌肿瘤生物学行为具有相关性，但该对患者术后预后的临床价值仍在研究中[13-14]。研究报道，在健康组织中HE4来源于输卵管、子宫内膜及宫颈中，而在恶性肿瘤的血清与组织中表达明显升高[15-16]。Stella等[17]研究报道中检测HE4标记物发现在宫颈癌中呈现高表达，并且发现HE4在宫颈癌中有预测价值，且发现HE4表达与宫颈癌病理类型、临床分期、分化程度及淋巴结转移密切相关。本研究结果发现，宫颈癌组、良性组HE4表达水平高于对照组，宫颈癌组HE4表达水平高于良性组，提示在宫颈癌术后患者HE4水平仍高于良性肿瘤及健康者。同时本研究进一步分析发现，随着不同FIGO临床分期、淋巴结转移HE4表达水平明显升高，而分化程度越高，HE4表达水平下降，分化程度越低恶性程度越高，说明HE4可作为预测宫颈癌术后预后评估具有重要意义。B7-H3是B7免疫共刺激分子超家族的成员。大量研究报道，B7-H3在大量肿瘤组织中均呈现高表达，譬如前列腺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、血液系统恶性肿瘤等等，B7-H3表达水平高低与肿瘤预后与病程进展密切相关，B7-H3表达水平升高提示不良预后或疾病进一步发展[18-20]。近年来，B7-H3在宫颈癌发生与发展的参与机制并未有准确的定论。本研究结果发现，宫颈癌组、良性组B7-H3表达水平高于对照组，宫颈癌组B7-H3表达水平显著高于良性组，随着不同FIGO临床分期、淋巴结转移、B7-H3表达水平明显升高，而分化程度越高，B7-H3表达水平下降，分化程度越低恶性程度越高，提示B7-H3高表达加快了宫颈癌的进展。本研究随访5年分析其生存情况发现，300例宫颈癌术后患者持续随访5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡组HE4、B7-H3表达水平高于存活组，提示HE4、B7-H3呈高表达水平加快患者疾病复发或转移，宫颈癌患者预后变差。与既往研究报道宫颈癌患者术后疾病进展时大量肿瘤标志物表达上调相符[21-22]。Jose等[23]研究报道，B7-H3在乳腺癌细胞中异常高表达是加快肿瘤进展的危险因素之一，同时与淋巴结转移密切相关。Cong等[24]报道B7-H3高表达是预测前列腺癌扩散与预后不良的独立预测因子。本研究结果发现，HE4、B7-H3单一预测的价值低于HE4联合B7-H3预测宫颈癌术后临床预后。HE4、B7-H3及HE4联合B7-H3诊断宫颈癌术后预后的灵敏度及特异度分别为88.89%和87.45%、89.02%和87.64%、94.44%和90.45%，提示联合检测预后评估效果更准确。

综上所述，HE4、B7-H3表达水平对宫颈癌术后预后评估具有重要意义，可作为辅助诊断宫颈癌术后进展的有效指标，HE4联合B7-H3检测可提高宫颈癌术后诊断的价值。