不同提取方法对刺五加嫩叶中黄酮类成分含量的影响

陈华　关颖丽

【摘要】 目的：分析比较不同提取方式对刺五加嫩叶中黄酮类成分含量的影响.方法：以刺五加嫩叶为原料，用微波提取法和超声提取法分别提取其中总黄酮，并利用HPLC法测定其含量.结果：超声提取法所得芦丁的含量为0.3905mg/g，微波提取所得芦丁的含量为0.3822mg/g.结论：超声提取法更有利于芦丁的提取，本方法操作简便易行、准确.

【关键词】 刺五加嫩叶;不同提取方法;芦丁

【中图分类号】R9 【文献标志码】A 【文章编号】1005-0019（2020）12-099-02

本文旨在利用HPLC法对刺五加嫩叶中总黄酮的含量进行测定，并比较不同提取方式对其含量的影响，为此后进一步研究和开发刺五加嫩叶的药用价值奠定基础[1]。

1 材料、仪器和试剂

刺五加，采自吉林省通化市地区，摘取刺五加嫩叶部分，粉碎，备用。

Agilent-G1322A型高效液相色谱仪，ACStation色谱工作站（华谱科仪北京科技有限公司）;JA2003P电子分析天平（上海越平科学仪器有限公司）; KQ-500超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;G70D.20CNIP-D2型微波仪（广东兰仕-微波生活电器制造有限公司）等。

芦丁对照品（购置国药集团化学试剂有限公司，批号F20090702，纯度98%）;95%乙醇;石油醚;水为娃哈哈纯净水;甲醇;乙腈。所用试剂为分析纯或色谱纯。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：乙腈-0.3%磷酸（17：83），流速：0.8 mL·min-1;检测波长：300nm;柱温：常温;进样量：20μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定芦丁对照品粉末3.3mg，加入合适量甲醇，制备成浓度为0.1042mg·mL-1的对照品储备溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 微波提取[2]

精密称取2g刺五加嫩叶，浸泡于石油醚中，室温下静置2h，过滤，滤去浸提液，重复操作数次，至浸提液无色以除去叶绿素。将处理后的药材置于通风处干燥后，加入60mL 70%乙醇，放入微波炉中，微波功率为500 W，提取时间为65s，取出放至室温，定容至50mL，备用。

2.3.2 超声提取[3]

精密称定1g刺五加嫩叶，加入10mL甲醇溶液浸泡30min，加甲醇溶液定容至50mL。精密称定，记录质量。60℃超声提取两次，每次30min，抽滤，合并滤液，称重，加入甲醇溶液至超声前的质量，备用。

2.4 线性关系考察

精密称取上述对照品溶液，依照上述色谱条件进行测定，进样量依次为4μL、8μL、10μL、15μL、20μL，得色谱图。以进样量为横坐标，色谱的峰面积为纵坐标，绘制芦丁的标准曲线。所得回归方程如下：y=14.909x-29.303，R=0.9997。研究表明，芦丁在4.168×10-4mg ～ 2.084×10-3mg范围内有较好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取芦丁对照品溶液，连续分别进样5次，进样量为10μL，记录峰面积，测定其峰面积的RSD值为2.94%。结果表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

分别精密吸取两种方法制备的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h的时间间隔，进样20μL，记录测定出的峰面积，据此测定RSD值，计算得出超声提取的RSD值为2.82%，微波提取的RSD值为1.14%，说明在12小时内供试品溶液的稳定性较好。

2.7 加样回收试验

2.7.1 微波提取法加样回收试验

分别精密称取6份已知含量的刺五加嫩叶粉末各2.0g，精密加入芦丁对照品溶液，根据2.3.1项下制备供试品溶液，得色谱图，并据此计算加样回收率。得出微波提取法所得芦丁的平均回收率为98.2%，RSD值为2.21%，结果表明加样回收良好。

2.7.2 超声提取法加样回收试验

根据2.7.1项及2.3.2项下制备供试品溶液，得出超声提取法所得芦丁的平均回收率为98.5%，RSD值为2.10%，结果表明加样回收良好。

2.8 样品含量测定

分别精密吸取微波提取法和超声提取法制备的供试品溶液，各20μL，进样，按上述色谱条件测定，得色谱图，计算峰面积，得出样品含量。其中保留时间在19min左右的为芦丁的峰信号。如图1～3所示。

3 结果

微波提取法中测得刺五加嫩叶中芦丁的含量为0.3822mg/g，超声提取法中测得刺五加嫩叶中芦丁的含量为0.3905mg/g。

4 讨论

刺五加嫩叶中黄酮类成份芦丁的提取方式有较多，本文主要研究了超声提取法和微波提取法这两种方法对提取刺五加嫩叶中芦丁含量的影响。对比两种方法的提取效果，微波提取法相较超声提取法省时，但是通过数据显示超声提取法提取的芦丁含量较高，微波提取法提取的芦丁含量较低。因此綜合各因素，建议采用超声提取法作为刺五加嫩叶中芦丁提取的方法。

参考文献

[1]白雪，胡文忠，姜爱丽，等.刺五加活性成分的研究进展[J].食品工业科技，2016，4（37）：378-381

[2]刘忠英，晏国全，胡秀丽，等.中药刺五加中总皂苷的微波辅助提取方法研究[J].药物分析杂志，2007，27（1）：25-28.

[3]罗虎捷，杨宜婷，黄寿根，等.超声提取法与索氏提取法提取陈皮黄酮类有效成分的分析比较[J].中药材，2016， 39（2）：371-374.

基金项目：吉林省大学生创新创业项目（201710202093）

通讯作者：关颖丽（1974-9），女，汉族，吉林通化人，副教授，硕士，主要从事中药化学成分的活性研究，邮编134002。