华支睾吸虫病诊断方法的研究进展

王贝贝 吴婉君

【摘 要】华支睾吸虫又称肝吸虫，成虫寄生于人体的肝胆管内，引起肝吸虫病，可导致患者肝部损害，严重者可致原发性胆管癌。可见肝吸虫感染对人体的伤害很严重，但肝吸虫在临床上的检出率低，因此拥有更好更为简洁的方法检测出肝吸虫就变得极为迫切，现将目前检测肝吸虫的方法做一综述。

【关键词】华支睾吸虫;诊断方法;PCR;免疫

【中圖分类号】R197   【文献标识码】A    【文章编号】1672-3783（2020）10-0247-01

Research Progress in the Diagnostic Methods of Clonorchiasis

Wang Beibei Wu Wanjun

（Liuzhou Traditional Chinese Medical Hospital，Liuzhou，545000）

【Abstract】Clonorchis sinensis， also known as liver fluke， parasites in the liver and bile duct of the human body， causing liver fluke disease.It can cause liver damage in patients， severe cases can cause primary cholangiocarcinoma. It can be seen that the infection of liver fluke is very serious to the human body， but the clinical detection rate of liver fluke is low. Therefore， it is extremely urgent to have a better and more concise method to detect liver fluke. Now this paper provides an overview on research progress in the ways of detection of liver fluke.

【Key words】Clonorchis sinensis;DiagnosticMethods;PCR;Inmunization

华支睾吸虫又称肝吸虫，成虫寄生于人体的肝胆管内，引起肝吸虫病，可导致患者肝部损害，严重者可致原发性胆管癌。1可见肝吸虫感染对人体的伤害很严重，但肝吸虫在临床上的检出率低，因此拥有更好更为简洁的方法检测出肝吸虫就变得极为迫切，现将目前检测肝吸虫的方法做一综述。

1 病原生物学方法

生理盐水涂片法是目前临床上用于检测寄生虫卵的主要方法，此法经济简便，但因其容易漏诊，且检出率不高，因此开始陆续出现其他的检测方法，如改良加藤厚涂片法、十二指肠引流法、改良酸醚离心沉淀法等。虽然十二指肠引流法检出率接近100%，但是有创检查，故而在临床上运用较少。1而有一部分学者对这些检测方法的检出率进行了比较，以选出最适于在临床上试验的方法。余一海等2比较发现改良加藤厚涂片法检出率明显高于生理盐水涂片法;李国华3、邹春霞4、陈森等5对改良加藤厚涂片法研究发现，此法操作相对简单，检出率高并且可以对虫卵进行定量，但所需粪便量较大。而且观察厚片费时费力，并不利于临床应用。胡缨6研究发现改良酸醚离心沉淀法检出率高，建议应用。笔者认为，虽然此法在看片时相比于厚片视野清晰，更利于查找虫卵，但操作费时费力，所用的盐酸和乙醚对人体伤害颇大，因此也并不适用于临床。这就迫切的需要去发现其他的检测方法，在如何提高镜检率方面显得极为迫切。

2 影像学方法

肝吸虫病影像学检测方法包括超声7、CT（电子计算机断层扫描）8、MRI（磁共振成像）、ERCP（内镜逆行胰胆管造影）等。李晓林等9对肝吸虫导致的梗阻性黄疸在ERCP、CT、B超检测方法下发现ERCP方法最好，而吴长亮、关航也做过这方面的研究，也认为ERCP对肝吸虫导致的梗阻性黄疸可作为较好的诊断及治疗方法。10-11但ERCP属于侵入性检测，患者痛苦较大，一般人难以接受，因此在临床上的应用并不广泛。而CT属于体外检测，患者容易接受，刘红山12、陆力坚8，13、郝金华14对肝吸虫病的CT表现进行了研究，发现CT检测在临床有重要的应用价值。特别是对肝吸虫所致胆道梗阻，其显像有自己的特征：胆管壁均匀增厚、较长的狭窄段、肝内外胆管轻、中度扩张并末梢小胆管"囊状、杵状"扩张，这都有助于肝吸虫所致胆道梗阻的诊断。同样属于体外检测的还有MRI，宋高业对感染者行MRI发现：感染者都有不同程度的肝胆管扩张，又对其中的几例行MRCP（磁共振胰胆管造影）发现肝吸虫性胆管炎MRI表现有一定的特征性，认识并撑握这些特征，再结合寄生虫实验室检查，对提高诊断的准确性有很大的帮助。15 但郑笑娟等16发现CT显像肝吸虫体远不及超声明显。周茂荣等17研究发现超声可以早期发现肝吸虫病，MRI 可以更明确的诊断肝吸虫病，运用 MRI 图像结合多普勒超声图像诊断肝吸虫病的准确率达到 100%。目前看来超声结合MRI成为影像学检出率高且方便的方法，但此法仅为辅助诊断方式且MRI价位相对较贵，因此具体还要依据患者的临床表现和鱼生史，以及镜检发现肝吸虫卵，才能诊断和鉴别诊断。

3 免疫学方法

免疫学诊断方法最常用的为ELISA（酶联免疫吸附实验），目前在临床应用广泛。18此法操作简便，特异性高。19而ELISA所使用的抗原极为重要，谭奕洲等20使用虫体粗抗原，故而假阳性率高;许学年[19]、江文才[21]、蒋守富[22]等对重组抗原进行研究发现其特异性更高，而且假阳性也随之下降，此时所使用的抗原是虫体特异性重组抗原，因此在诊断上比粗抗原的特异性更好，敏感性也更高。[23-25]但是这种结果也只是对于粗抗原，对于天然抗原，其敏感性依旧低，且与其他生物存在交叉抗原，这就迫切的需要再在重组抗原上进行进一步的研究，或是在选择多种抗原表位进行进一步的研究来提高敏感性和降低假阳性率。[26]

4 基因诊断方法

基因诊断是以病原体的核酸检测为对象。[18]近年来，分子生物学技术飞速发展，对于鉴定物种极为精确，便衍生出基因诊断技术。此种技术在医学的各种领域皆有广泛的研究，特别是在病原生物的鉴别上，显得极为重要。那么从基因的角度了解肝吸虫，并以此为方法去诊断肝吸虫感染又成为了一种新兴的技术。[27]目前基因诊断方法有PCR、实时荧光PCR等，此法具有灵敏度高、特异性强、周期短、高通量等优点，有一定的应用前景。[28-30]但现在有学者从肝吸虫的感染阶段去对第二中间宿主淡水鱼里的囊蚴进行诊断[31]，以期在此阶段阻断传播途径，从而降低肝吸虫的感染率。此法可能成为未来研究的重点。

5 展望

虽然肝吸虫的检测方式多，但在临床上运用最为广泛的依旧是生理盐水涂片法，其次为ELISA。这两者方法操作简单，经济实惠，虽然前者检出率低，但后者的特异性高，两者结合可以更进一步提高检出率。但ELISA法的灵敏度高、特异度低，这是一个亟待解决的难题。而影像学方法只能作为辅助检查，在诊断时需要参考的资料太多，这一方面也需要再研究。PCR则检出率高，在肝吸虫的各个阶段都可以检测，如囊蚴[31]。因此，目前免疫学方法和PCR在肝吸虫病的诊断上将会有很好的研究前景。

参考文献

[1] 李雍龙，管晓虹.人体寄生虫学[M].第七版.北京：人民卫生出版社，2009，93-94.

[2] 余一海，吴焜，李艳銮.两种方法检测肝吸虫虫卵的效果比较[J].检验医学与临床，2016，13 （02）：262-264.

[3] 李国华.改良加藤厚涂片法中虫卵显微镜计数的准确性探讨[J].山西医药杂志，2006（12）： 1143.

[4] 邹春霞.改良加藤氏厚涂片法在肝吸虫检测中的研究[J].检验医学与临床，2012，9（22）：2832 -2833.

[5] 陈森，蔡燕瑜.改良加藤厚涂片法虫卵计数质量控制[J].海峡预防医学杂志，2014，20（02）：42- 43.

[6] 胡缨，李艳文，卢作超.诊断华支睾吸虫病4种粪检方法的比较[J].中国热带医学，2012，12（08）： 976-978.

[7] 孙建平，张宏宇.肝吸虫病的彩色多普勒超声诊断价值[J].中国伤残医学，2014，22（10）：198- 199.

[8] 陆力坚，黄璐.华支睾吸虫病CT表现的研究现状[J].广西医学，2018，40（06）：685-686+691.

[9] 李晓林，智发朝，黄宝裕，等.三种影像学检查对华支睾吸虫所致胆胰疾病诊断的对比研究[J].中华消化杂志，2005（10）：583-585.

[10] 吴长亮，唐星火.肝吸蟲感染的胆道梗阻患者行内镜逆行胰胆管造影（ERCP）术治疗的有效性及安全性观察[J].中国地方病防治杂志，2018，33（01）：119-120.

[11] 关航，杨军雄，甘兆义.治疗性ERCP在肝吸虫病梗阻性黄疸中的临床应用[J].微创医学，2017，12（05）：689-690.

[12] 刘红山，方竞，廖锦元.华支睾吸虫病及其合并症的CT表现[J].新发传染病电子杂志，2018，3（02）：106-110.

[13] 陆力坚，黄璐.肝吸虫所致胆道梗阻的CT表现[J].临床放射学杂志，2019，38（01）：101-104.

[14] 郝金华，孙小影，王涛，等.肝吸虫病继发肝实质炎症的CT表现[J].中国中西医结合影像学杂志，2018，16（02）：163-165.

[15] 宋高业，陈小龙.华支睾吸虫性胆管炎的MRI表现[J].海南医学，2018，29（13）：1842-1845.

[16] 郑笑娟，陈永兴，黄雪兰，等.超声波成像与CT比较华支睾吸虫所致肝胆损害[J].中国人兽共患病学报，2008（08）：792+791.

[17] 周茂荣，苏宁，马利军，等.超声与MRI在诊断肝吸虫中的价值研究[J].世界最新医学信息文摘，2016，16（76）：141+146.

[18] 梁萍.华支睾吸虫病诊断概述[J].菏泽医学专科学校学报，2013，25（04）：82-84.

[19] 许学年，周岩，张鸿满，等.华支睾吸虫特异性富甘氨酸2a类抗原基因的克隆、表达和免疫学诊断价值评价[J].中国人兽共患病学报，2011，27（2）：91-96.

[20] 谭奕洲，陈伟烈，李穗芬.肝吸虫抗体的检测[J].现代临床医学生物工程学杂志，2005（03）： 230-232.

[21] 江文才，徐祥珍，沈明学，等.华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶ELISA检测方法的建立及其应用效果评价[J].中国病原生物学杂志，2013，8（11）：1011-1013.

[22] 蒋守富.重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展[J].中国病原生物学杂志，2007（02）：155-158.

[23] Choi BI，Han JK，Hong ST，et al.Clonorchiasis and cholangiocarci-noma： etiologic and imaging diagnosis[J].Clin Microbiol Rev，2004，17（3）：540- 552.

[24] Zhao QP，Moon SU，Lee HW，et al.Evaluation of Clonorchis sinensis recombinant 7-kilodalton antigen for serodiagnosis of clonorchiasis[ J].Clin Diagn Lab Immunol，2004，11（4）：814-817.

[25] Lee M， Chung YB， Lee SK， et al. The identification of a Clonorchis sinensis gene encoding an antigenic egg protein[J].Parasitol Res，2005，95（3）：224- 226.

[26] 朱慕春，刘劲峰，陆忠奎，等.华支睾吸虫排泄分泌抗原McAb的制备及双抗夹心ELISA的初步建立[J].中国人兽共患病学报，2018，34（10）：873-877.

[27] 刘越，郭永晨，潘峰，等.华支睾吸虫分子生物学研究进展[J]. 中国人兽共患病学报，2009，25（10）：1014-1016.

[28] PangX，LeeB，Cl，etal.Evaluationandvalidationofreal-timereversetranscription-PCR assayusingth eLightCyclersystem fordetectionandquantitationofnoroviru[J].JClinMimnbiol，2004，42（10）：4679 -4685.

[29] Bustin SA.Quantification ofmRNA using real-time reversetranscriptionPCR（RT-PCR）：trend sandproblems[J].JMol Endoerinal，2002，29（1）：23-39.

[30] 张媛，童睿，郑秋月，等.PCR和实时荧光PCR方法检测华支睾吸虫[J].寄生虫病与感染性疾病，2008（01）：9-11.

[31] 王真瑜，江莉，张耀光，等.淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴PCR检测技术的建立及应用分析[J].热带医学杂志，2018，18（11）：1435-1439+1546.

作者简介：

王贝贝（1989-），女，湖北仙桃，初级技师，研究方向：寄生虫病。

吴婉君（1986-），女，广西河池，初级技师，研究方向：流行病与统计学。