沙棘糖浆对食积症模型小鼠的消食化滞作用

梁国栋，吴启进，娜黑芽

(1.内蒙古盛唐国际蒙医药研究院有限公司，内蒙古自治区蒙药新药研发企业重点实验室，内蒙古自治区 呼和浩特 010010；2.中国药科大学，江苏 南京 211198；3.内蒙古农业大学，内蒙古自治区 呼和浩特 010010)

沙棘糖浆是基于蒙药古籍《饮膳正要》中赤赤哈纳(即沙棘)处方记载，以蒙药古籍《蒙药正典》中所述“沙棘祛痰，融化血，治巴达干病”等临床适应证为研究基础[1]，通过将沙棘果压榨成汁，经提取、过滤、浓缩等一系列工序得到药用沙棘果汁，加入蔗糖浆稀释，最终形成以沙棘果汁为单方的原研糖浆剂。主治止咳祛痰，消食化滞，用于咳嗽痰多，消化不良，食积腹痛。本品疗效显著且剂型口感好，不仅能够止咳祛痰，对消化不良、厌食症等均有很好的疗效。针对小儿食积咳嗽共病，沙棘糖浆通过双重应对，止咳祛痰的同时治疗消化不良，临床疗效快速稳定[2-3]。目前关于沙棘止咳祛痰作用的研究报道较多[4-5]，对消食化滞功能的药理实验研究很少。胃动素(motilin，MTL)、胃泌素(gastrin，GAS)是常见的胃肠激素，其和胃蛋白酶(pepsin)能促进胃肠运动，帮助消化，在食积者体内含量均会下降[6-7]。本实验通过观察沙棘糖浆对食积症模型小鼠排便量及胃液pH、胃蛋白酶、MTL、GAS的影响，初步探索其治疗食积症的作用机制，综合评价沙棘糖浆消食化滞作用。

1 材料

1.1 药品与试剂 沙棘糖浆(生药量4.5 g·mL-1，自行制备，批号：17012101-42)；吗丁啉(西安杨森制药有限公司，批号:180711928)；高热量高蛋白饲料(江苏美迪森生物医药有限公司，定制：将鱼松、豆粉、面粉、奶粉按1∶2∶1∶1的比例混合，加水做成，批号:MD20190715-ZGYK)；胃蛋白酶试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司，批号:201909)；MTL试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司，批号:201909)；GAS试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司，批号:201909)；精密pH试纸(0.5～5.0)(上海三爱思试剂有限公司，批号:20190604)。

1.2 动物及饲料 SPF级昆明种小鼠60只，雌雄各半，3～4周龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号：SCXK(京)2016-0011，使用许可证号：SYXK(苏)2018-0019。所有动物实验均符合动物伦理委员会标准。小鼠生长繁殖饲料(江苏省协同医药生物工程有限责任公司，批号：20190910)。

1.3 仪器 TD10001C电子分析天平(天津天马衡基仪器有限公司)；2300型多功能酶标仪(PerkElmer公司)；Allegra X-30R台式高速冷冻离心机(Beckman公司)。

2 方法

2.1 分组、造模及给药 动物适应期结束以后，空白对照组饲喂常规饲料，其余各组饲喂定制的高热量高蛋白饲料，实验第2天开始，加喂52%的牛奶溶液[0.2 mL·(10 g)-1，灌胃]，每天两次，食积后小鼠精神不振，活动减少，蜷缩扎堆，皮毛色黄无光泽，食量明显减少；腹部膨隆胀满，尿色黄，粪便黏腻质软，呈棕黄色。第14天后各组平均摄食量低于正常组20%以上为判定造模成功[8]。造模成功后按体重将小鼠随机分成5组，分别为模型对照组，阳性对照组，沙棘糖浆高、中、低剂量组。高、中、低剂量组分别按18、6、2 g·kg-1剂量灌胃给药，阳性对照组按4 mg·kg-1灌胃吗丁啉，每天1次，连续给药7 d，空白组和模型对照组灌胃动物饮用水，上述给药体积均为10 mg·kg-1。

2.2 检测指标

2.2.1 代谢笼收集粪便，统计排便粒数，称重粪便。

2.2.2 小鼠胃液pH、胃蛋白酶活性及MTL、GAS水平测定 末次给药后，小鼠禁食不禁水24 h，麻醉后放血处死，立即剖腹，结扎贲门、幽门，剪取全胃，用蒸馏水洗去表面血污，滤纸吸干水分。将小鼠胃置于培养皿内，沿胃小弯剖开胃腔，将胃转入试管中，蒸馏水浸洗胃壁，浸洗液转入同一试管中，后3 000 r·min-1，离心10 min收集胃液上清。精密pH试纸测定胃液pH值，试剂盒检测胃蛋白酶、GAS、MTL。

3 结果

3.1 沙棘糖浆对小鼠排便的影响 本实验采用给小鼠饲喂高热量高蛋白饲料，并加喂52%的牛奶，造食积症动物模型，造模2周后小鼠行动缓慢，食欲下降，模型对照组平均摄食量比空白组下降了34.2%(已低于正常组20%以上)，判定造模成功。将50只小鼠按体重随机分为模型对照组，阳性对照组，沙棘糖浆高、中、低剂量组。沙棘糖浆对小鼠排便粒数和粪便重量的影响见表1，结果显示沙棘糖浆高剂量和阳性对照组均能增加小鼠的排便粒数(与模型对照组相比，P<0.05)，且有增加排便的重量的趋势，但无统计学差异(与模型对照组相比，P>0.05)。

表1 沙棘糖浆对各组小鼠粪便粒数及粪便重量的影响

3.2 沙棘糖浆对小鼠胃液pH值的影响 沙棘糖浆对小鼠胃液pH值的影响见表2，结果显示沙棘糖浆高剂量可降低胃液pH值，与模型对照组相比有显著差异(P<0.05)，其余各剂量组有降低pH值的趋势，但无统计学差异(与模型对照组相比，P>0.05)。结果表明，沙棘糖浆具有可降低胃液pH值，调节胃液的总酸度的功能。

表2 沙棘糖浆对各组小鼠胃液pH值的影响

3.3 沙棘糖浆对小鼠胃功能(MTL、GAS、胃蛋白酶)的影响 与空白组比较，模型对照组小鼠胃液MTL水平显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，沙棘糖浆中剂量组胃液中MTL水平显著升高，有显著性差异(P<0.05)，高低剂量组和阳性对照组有升高的趋势，但无统计学意义(P>0.05)，详见表3。

与空白组比较，模型对照组小鼠胃液GAS有下降的趋势，但差异不显著(P>0.05)；与模型对照组相比，阳性对照组胃液中GAS有上升的趋势，但无统计学上差异；沙棘糖浆各剂量GAS与模型对照组相比均无显著差异(P>0.05)，提示沙棘糖浆对提升胃液GAS水平不显著，详见表3。

与空白组比较，模型对照组无显著差异，提示该模型未能导致胃液中胃蛋白酶的变化；与空白组比较，阳性对照组中胃液中胃蛋白酶有上升的趋势，但无统计学差异(P>0.05)；与模型对照组和空白组相比，沙棘糖浆各剂量组胃液中胃蛋白酶水平均无上升趋势，亦无统计学上差异(P>0.05)，详见表3。

表3 沙棘糖浆对各组小鼠胃功能(MTL、GAS、胃蛋白酶)的影响

4 讨论

食积又称食滞、饮食积滞，由饮食不当(暴饮暴食、饮食不洁)为外因，脾胃功能失调为内因，造成食物积滞的一种胃肠道疾病[9]。研究显示食积症患者胃肠道动力障碍与MTL释放减少有关[10]。而胃肠动力障碍，可引起粪便排泌障碍，胃肠道微环境的改变，有研究显示，GAS水平降低可能是胃排空延迟的病理生理机制，另有报道胃动力障碍患者GAS含量与正常人无明显差异，可能与多元发病机制有关[10]。GAS为兴奋性脑肠肽，能刺激胃蛋白酶的分泌。中医学的食积症相当于西医学的功能性消化不良，西医治疗方案采用抑制胃酸分泌药、胃黏膜保护药、促胃肠动力药等。中医治疗有着方法多样，安全性高，疗效确切的独特优势[11]。

沙棘糖浆具有止咳化痰、消食化滞的作用，用于咳嗽痰多，消化不良，食积腹痛的治疗[12]。从中医角度分析，依据《中成药临床用药指南—儿科分册》所述，厌食和功能性消化不良以健脾开胃为治疗的基本原则。沙棘药物性温，味酸、涩，归胃经、脾经，具有消食化滞的作用，对于厌食、消化不良的症候表现具有很好的辨证治疗作用[3]。现代药理学研究表明，沙棘中含有大量氨基酸、有机酸等多种营养成分，还有酚类化合物，其可以促进胃酸的生物合成，刺激胃液分泌。对于消化不良、厌食具有很好的疗效[13]。纯沙棘油富含维生素E、类胡萝卜素、不饱和脂肪酸等活性成分，这些物质能够抑制胃蛋白酶的活性和降低游离酸浓度[14]。

本研究以饲喂高热量，高蛋白饲料建立小鼠食积，胃肠障碍动物模型。由于吗丁啉为外周多巴胺受体阻滞剂，直接作用于胃肠壁，增强胃蠕动，促进胃排空，协调胃十二指肠运动，本实验选用吗丁啉为阳性对照品，改善胃胀障碍，恢复胃肠道微环境，同时对比评价沙棘糖浆对改善粪便排泌障碍和胃肠道环境的效果。

小鼠排便粒数减少和重量降低说明食积导致了便秘，实验结果显示，与模型对照组比较，阳性对照组具有增加小鼠粪便粒数的作用，说明有改善便秘的效果(P<0.05)，沙棘糖浆高剂量组有增加小鼠排便粒数的作用(P<0.05)，粪便重量增加不明显(P>0.05)，证明沙棘糖浆高剂量有改变粪便体积的效果，可能由于高剂量组沙棘糖浆提高肠道对水分的吸收，促进肠蠕动所致，但未能改变肠道对食物的利用率。对胃液pH值的检测显示沙棘糖浆高剂量有降低胃内pH值作用，说明沙棘糖浆有改善食积导致胃内pH升高的作用，使胃液恢复正常酸度。

通过对胃液MTL检测，结果发现沙棘糖浆中剂量组和高剂量组能提高胃液中MTL的水平，其中沙棘糖浆中剂量组有显著差异(与模型对照组相比，P<0.05)。实验结果显示模型组胃液中GAS水平有降低的趋势，但未达到统计学的差异，沙棘糖浆各剂量组未能提高胃液GAS素的水平。对胃蛋白酶的检测发现，各组胃蛋白酶的水平无差异，显示此模型未能引起胃蛋白酶的变化，且沙棘糖浆对胃液胃蛋白酶的水平无调节效果。

综上所述，沙棘糖浆可以改善小鼠胃液酸度，增强胃液中MTL水平。表明沙棘糖浆具有消食化滞作用，与临床主治功能一致，本研究为沙棘糖浆的临床应用及推广提供了一定的实验依据。