结核感染T 细胞斑点试验联合降钙素原检测对结核杆菌感染的临床意义分析

王琳

肺外结核是目前临床上常见的一种慢性传染病。近年来，环境不断恶化导致我国结核病的发病率逐年上升。肺外结核已经严重危害我国患者的健康和生活质量，因此肺外结核的诊断非常重要［1］。目前，细菌学诊断是临床诊断肺外结核较为准确的检测方法，但细菌学诊断检测过程复杂、费时，对肺外结核的诊断正确率并不高。近年来，结核感染T 细胞斑点检测是检测肺外结核的有效方法，是在QuantiFERON-TBGold试验基础上改进的新型免疫学方法。本研究在结核感染T 细胞斑点检测的基础上联合PCT 检测对患者临床意义，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2019 年1 月～2020 年1 月收治的270 例疑似结核感染患者纳入实验组，参照中华医学会结核病学分会制定的《肺结核诊断和治疗指南》［2］，对患者进行诊断，并且将结核分枝杆菌培养阳性、组织病理学检查呈干酪样坏死改变的患者纳入活动性结核组，将陈旧性结核病、结核潜伏感染患者纳入非活动性结核组。270 例实验组患者中，72 例为结核感染［活动性结核46 例(活动性结核组)，非活动性结核26 例(非活动性结核组)］，198 例为非结核感染(非结核组)。选取同期健康体检人群100 例纳入对照组。

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 ①疑似结核感染，自愿接受结核感染T 细胞斑点试验和PCT 联合检测，经痰培养明确诊断；②病历资料完整，影像学检查无肿瘤类疾病，实验室检查确认身体状态良好。

1.2.2 排除标准 ①具有肝肾功能障碍的患者，代谢系统疾病的患者；②自身免疫系统疾病的患者；③有免疫抑制剂或免疫增强类药物使用史的患者；④不愿意参加者。

1.3 方法 所有受试者均采集外周静脉血进行结核感染T 细胞斑点试验。由上海复星长征医学研究科技有限公司提供结核感染T 细胞斑点检测试剂盒，5 h 内分离外周血单个核细胞。将细胞重新悬浮于aim-v 培养基中，调整细胞浓度为2.5×106/ml 来制备标准溶液。将50 μl 的aim-v 培养基和植物血凝素分别加入到实验组以及对照组的微孔板中。依次向每个孔中加入100 μl 含2.5×105PBMC 的标准溶液，将微孔板置于36.6℃且CO2浓度5%的培养箱中25 h。洗脱后应加入60 μl 底物显色液，室温孵育6 min，用蒸馏水彻底清洗培养板停止反应。计算每个孔中色斑的数量。判定标准：阴性对照孔数＜5 个的试样作为阴性，阴性对照孔数≥5 个的试样为阳性。PCT 检测：采集受试者外周静脉血5 ml，使用PCT 定量检测试剂盒按照试剂盒使用说明书检测血清PCT 水平。

1.4 观察指标 观察结核感染T 细胞斑点试验联合PCT 的检测结果及血清PCT 水平。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示，采用t检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结核感染T 细胞斑点试验联合PCT 的检测结果 结核感染T 细胞斑点试验联合PCT 检测的灵敏度为86.11%(62/72)，特异度为91.92%(182/198)。见表1。

2.2 各组受试者PCT 水平比较 活动性结核组PCT(0.37±0.05)ng/ml 明显高于非活动性结核组的(0.20±0.11)ng/ml、非结核组的(0.09±0.06)ng/ml、对照组的(0.09±0.03)ng/ml，非活动性结核组PCT 水平明显高于非结核组、对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；非结核组与对照组的PCT 水平比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 各组受试者PCT 水平比较(，ng/ml)

表2 各组受试者PCT 水平比较(，ng/ml)

注：与对照组比较，aP＜0.05；与非结核组比较，bP＜0.05；与非活动性结核组比较，cP＜0.05

3 讨论

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，且结核杆菌可以侵袭人体的各种器官，但结核杆菌主要侵犯患者肺部，称为肺结核，临床高发［3］。其中呼吸道传播是肺结核感染的一种主要途径。患者感染途径是患者接触到结核杆菌排放的肺结核患者。在临床上，发现更有效的诊断方法已成为了一种趋势，由于该病影像学特征不明显，痰细菌的阳性率较低，诊断率不高，但是有着较高的漏诊率与误诊率。结核菌素纯蛋白衍生物试验在临床上应用比较多，是临床上主要的诊断结核感染的指标，其缺点为假阳性率较高，在临床应用上局限性比较大。应用结核感染T 细胞斑点试验对结核病进行早期诊断已经成为一种新的趋势，该检测准确率比较高，但是结核分枝杆菌培养仍是结核病诊断的金标准，结核分枝杆菌培养其诊断的局限性和误诊率高，主要是由于结核分枝杆菌的培养时间长，但是敏感性低，已经渐渐被新技术淘汰。血清结合抗体检测其假阳性比较高，主要的假阳性群来自于既往感染过结核杆菌，但是已经痊愈，或者对结核菌已获得免疫力的群体，也会造成假阳性，有些患者体质特殊，还会造成假阴性，影响临床诊断［4］。因此，临床上探索一种有效的结核病诊断方法具有重要意义。

结核感染T 细胞斑点试验是在细胞荧光技术单细胞水平检测基础上发展起来的一种新型细胞免学检测技术，细胞荧光技术具有较高的敏感性和特异性，临床准确率高。主要的工作原理是感染结核分枝杆菌，机体会出现记忆性T 淋巴细胞，如果再次受到结核分枝杆菌的感染，记忆性T 淋巴细胞会快速繁衍，效应性T淋巴细胞形成，抗干扰素-γ 分泌增多，因此通过检测抗干扰素-γ 的淋巴细胞数目，可以准确的判断是否感染结核分枝杆菌［5］。由于结核病患者的不同阶段，体液免疫与细胞免疫之间存在一定的失衡。此时，体液免疫和细胞免疫的检测可以从不同角度反映结核病的诊断效果，在一定程度上提高了结核感染T 细胞斑点试验诊断的准确性。在临床上联合应用结核感染T 细胞斑点试验对结核病的诊断具有较高的敏感性和特异性，并且可以排除假阳性，结合结核感染T 细胞斑点试验可显著提高结核病的诊断水平以及检出率。由于我国患者结核病感染以及隐性结核病感染例数较多，因此，一些国外文献报道的数据只能作为参考，不能完全符合我国的实际情况。作者在试验中发现，结核感染T 细胞斑点试验特异性较高，特别是抗原A 孔和B 孔的斑点数＞25 时就强烈提示患者具有结核感染，但对结核杆菌敏感性较低。

本研究也具有一定的局限性，本研究的不足之处在于入选病例数少，非结核健康人与非结核肺疾病患者没有分离。因此，在后期，需要继续增加研究样本的数量，进一步研究结核病的诊断。另一点局限性为在敏感性评价中，部分受试者可能是临床怀疑度高和缺乏细菌学证据的肺结核患者。特异性评价中没有一名受试者有明确的活动性肺结核接触史，但经临床证实为其他感染疾病。由于对潜伏性肺结核感染的诊断没有“金标准”。PCT 无激素活性，是降钙素前肽物质，非疾病状态下血清中含量非常低，当机体出现严重感染的情况下才会增加，当机体出现严重细菌感染，会迅速分泌大量PCT。有研究显示，当机体处于结核杆菌感染活动期是，其PCT 水平会高于非活动期结核组，这与本研究的结果相同。分析原因，主要是因为随着机体结核感染的加重，机体转化生长因子β1、肿瘤坏死因子-α、C 反应蛋白、PCT 等多种细胞因子水平显著上升，他们之间相互诱导，促进结核疾病的进展，导致结核结节和干酪样坏死的发生发展。此外，叶绥艳等［6］使用结核感染T 细胞斑点试验联合PCT检测结核感染发现，结核感染T 细胞斑点试验检测准确率明显高于其他检测方法，血清PCT 水平变化与结核感染患者预后呈显著负相关，说明对结核病的诊断和预后判断，以上研究与本研究相同。本试验结果显示，结核感染T 细胞斑点试验联合PCT 检测的灵敏度为86.11%(62/72)，特异度为91.92%(182/198)。活动性结核组PCT(0.37±0.05)ng/ml 明显高于非活动性结核组的(0.20±0.11)ng/ml、非 结核组的(0.09±0.06)ng/ml、对照组的(0.09±0.03)ng/ml，非活动性结核组PCT 水平明显高于非结核组、对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；非结核组与对照组的PCT 水平比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

综上所述，对结核患者采取结核感染T 细胞斑点试验检验的意义显著，特异性、敏感性强，结合血清PCT 检测能够辅助判断病情发展及预后，两种检验同时应用，具有较高的临床诊断价值，临床医生可以联合应用，值得进一步研究。