荧光定量RT-PCR 快速检测乙型流感病毒核酸的价值分析

王瑾

乙型流感作为一种传播性极广的病毒，有明显可区分的季节性，一般在冬季11 月份到来年2 月份期间，发病率呈直线上升，而且在人口密集的地区，流感的发病率也明显增高［1］。流感病毒是仅次于呼吸道合胞病毒的RNA 病毒，是一种常见的病毒病原体。现在临床上检测乙型流感病毒常用的是荧光定量RT-PCR，该方法操作简单，诊断符合率高［2］，以往临床上采用的是免疫学检测，因为这种方法操作繁琐，准确度低逐渐被放弃，本次研究就是探讨用荧光定量RT-PCR 快速检测乙型流感病毒核酸的临床价值，具体情况如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年11 月～2020 年1 月间本院乙型流感患者104 例作为此次研究的对象，所有病例均采集咽拭子，均符合乙型流感的诊断标准，且此次研究获得了伦理委员会的同意与支持。根据对乙型流感病毒检测方式的不同分为对照组和观察组，每组52 例。

1.2 方法 标本的采集：操作者在患者同一侧的鼻处采集，用无菌的棉棒进行采集，操作要严格按照标本采集的要求进行，待标本采集完成后再进行检测［3］。

1.2.1 对照组采用免疫学检测。采用抗原有血凝素和神经氨酸酶的检测方法。

1.2.2 观察组采用荧光定量RT-PCR 检测。提取乙型流感病毒采用上海之江核酸自动提取仪EX2400，①操作者将采集好的标本放置到振荡器内，震荡10 min；②然后拿出预装板，把6 μl RNA 沉剂和300 μl 标本放入相应的板槽内；③再把预装板放入核酸自动提取仪的卡槽内，设置，开始运行；④待运行结束后再取出预装板，进行检测或者放置在-20℃的环境下保存；⑤配制荧光定量RT-PCR 检测［4］。

1.3 观察指标 ①对比两组的检测敏感性，敏感性=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%。②对比两组的检测时间。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示，采用t 检验；计数资料以率(%)表示，采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的检测敏感性对比 观察组的检测敏感性为98.08%，高于对照组的82.69%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组的检测敏感性对比［n(%)］

2.2 两组的检测时间对比 观察组的检测时间为(11.2±2.1)min，短于对照组的(17.5±2.4)min，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 两组的检测时间对比(，min)

表2 两组的检测时间对比(，min)

注：与对照组对比，aP＜0.05

3 讨论

乙型流感主要是由流感病毒引起，属于呼吸系统疾病。当患者患有乙型流感时，常会有全身乏力、腰酸背痛、高热以及呼吸道症状，严重影响患者正常的工作与生活，而且该病还有极强的传染性，传染速率极快，身体素质低下的人极有可能被传染［5］。这种病毒在人体的潜伏期较短，致病因素强，近年来就有学者提出用荧光定量RT-PCR 检测乙型感染病毒，荧光定量RT-PCR 检测相比传统RT-PCR 检测来说，有敏感性更高、准确度更高、更干净卫生、更节省实验周期等优点，而且操作简单［6］。该方法的检测原理就是在PCR 的反应中加入了荧光基因，然后利用荧光信号监测产物的数量，最后定量分析根据标准曲线得出的模板。所有的操作过程中都应在密封的封闭管中进行，由于操作环境有所限制，避免了很多的交叉感染，整个操作过程干净整洁，不破坏原有的结果，提高了检测结果的准确度，对流感病毒核酸的检测，可以知道不同的毒株有不同的基因，从而可以知道用核酸检测具有更快更准的优点。而在以往临床上采用的免疫学检测方法也分为传统免疫学检测和快速免疫学检测。传统免疫学检测最常用的方法就是红细胞凝集和凝集抑制试验，该方法是医学上最常用的用来诊断流感病毒感染的方法，实验结果准确度高，且操作简单，但是不能发现未知的病毒感染，而且要求有熟练的技能操作；快速免疫学检测最常见的方法是胶体金免疫层析，这是一种新型的检测方法，利用了抗原和抗体的反应原理，把胶体金定为检测的标记物，检测速度快，操作容易，但该方法局限性大，准确度和特异度低［7］。本次研究结果显示，观察组的检测敏感性高于对照组，检测时间短于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述，荧光定量RT-PCR 检测乙型流感病毒核酸可以明显提高对乙型流感病毒的检测敏感性，且检测时间短于免疫学检测，值得在临床上大力推广。