肝素结合蛋白联合氨基末端脑钠肽前体和降钙素原在脓毒症诊断中的应用价值

余晓慧，黄莹，李静，王小中

（1.瑞昌市人民医院检验科，江西 瑞昌332200；2.瑞昌市人民医院儿内科，江西 瑞昌332200；3.瑞昌市人民医院心血管内科，江西 瑞昌332200；4.南昌大学第二附属医院检验科，江西 南昌330006）

脓毒症属于临床常见的危重急症, 是严重创伤、感染、休克以及外科大手术术后常见的并发症。脓毒症常引发多种严重并发症, 如多器官功能障碍、感染性休克等,临床病死率高,因此对脓毒症患者早期的诊断及治疗显得尤为重要[1]。通常,脓毒症患者临床表现多样化，缺乏特异性，临床上迫切需要检测方便、 快捷且准确诊断脓毒症的生物标记物。 HBP 是一种急性期时相反应蛋白，能够直接参与炎症的发生和发展。《中国严重脓毒症/脓毒性休克治疗指南(2014)》指出，血HBP 水平可作为脓毒症早期诊断标志物[2]。本研究将探讨HBP 联合传统炎症指标PCT 及心肌损伤标记物NT-Pro-BNP 在重症患者发生脓毒症的诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取江西省瑞昌市人民医院ICU2018 年11 月至2020 年4 月32 例脓毒症确诊患者为实验组（n=32）,同时期重症医学科非脓毒症患者48 例为对照组（n=48）进行回顾性研究。 排除年龄小于16 岁及入院后48 小时内死亡的患者。

1.2 观察指标采集及检测方法 采集受试者年龄，性别，原发病等一般信息；所有受试者均于入ICU后24h 内采集血标本，分离血浆和血清，分别用于检测血浆HBP、血清降钙素原（PCT）和血清BNP。⑴血浆HBP 水平检测: 建立酶联免疫吸附法检测标准曲线, 采取定量酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 检测所有患者和健康对照组血浆HBP 水平。 HBP 检测试剂由杭州中翰盛泰生物技术有限公司提供。⑵PCT 水平检测:采用Lumat LB9507 化学发光分析仪进行检测，以PCT ≥2μg/L 为阳性阈值。 ⑶血清BNP 水平检测： 分离血清， 采用酶联免疫吸附试验测定血清NT-proBNP 水平(试剂盒购自美国Rapidbio 公司公司)

1.3 统计学分析 采用SPSS 21.0 软件进行分析。所有计量资料采用非参数K-S 法进行正态性检验,其中符合正态分布的计量资料以x±s 表示，组间比较采用t 检验；非正态分布的计量资料以中位数和上下四分位数P50（P25-P75)表示，组间比较采用非参数Mann-Whitney U 检验；计数资料的组间比较采用χ2检验。 采用受试工作特征曲线（ROC）比较各指标单独及合用在脓毒症诊断中的价值。 P<0.05 为比较差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较 研究共收集脓毒症患者32例，其中男性15 例，女性17 例，年龄平均54.72±2.69 岁。 对照组患者48 例，其中男性21 例，女性27 例，年龄平均62.23±2.72 岁。 脓毒症组、非脓毒症对照组患者性别、 年龄的比较差异无统计学意义（P>0.05）。 见表1。

2.2 HBP、PCT、BNP 检 测 值 的 比 较 脓 毒 症 组HBP、PCT、BNP 水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表2。

表1 脓毒症组和对照组患者性别、年龄比较

表2 脓毒症组和对照组患者HBP、PCT、BNP 浓度比较

2.3 ROC 分析 单变量的ROC 分析结果显示，HBP、PCT、BNP 的曲线下面积分别为0.749、0.757、0.703,均与参考线曲线下面积有显著性差异(P<0.0 5),其中PCT 的预测效果最佳(AUC=0.757,95%CI:0.654~0.861)。 当进行双变量预测时, 以HBP 联合BNP 时曲线下面积最大,为0.768,高于所有变量组合的结果；3 个变量进行预测时，HBP、PCT 与BNP联合的曲线下面积为0.764。 计算结果显示，HBP、PCT、BNP 的 截 断 值 分 别 为：43.60 ng/ml、0.14 ng/ml、306.80 ng/ml。 研究结果表示，上述各指标高于截断值时，患者有更高的脓毒症发病风险。见表3。

表3 HBP、PCT、BNP 指标对脓毒症发病风险评估分析

3 讨论

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征,病情进展迅速，如果没有得到及时的救治，会迅速发展为脓毒症休克、 多脏器功能障碍综合征(MOD S)等，严重者直接导致患者死亡。 有研究报道,重症监护病房患者中脓毒症发病率约为40%[3]。 提高脓毒症的早期诊断效率, 并及时采取有效干预措施，对降低其病死率、改善预后尤为重要。 然而脓毒症临床表现多样化，使得临床诊断有一定的困难。 此外,脓毒症可以不依赖细菌和毒素的持续存在而发生和发展，导致病原菌培养阳性率不高[4]。 因此，需要探究脓毒症诊断中有效的生物学标记物以及脏器损伤标记物，从而提高脓毒症的诊断效率，指导医生进行病情评估和疗效评价。

图1 HBP、BNP、PCT 单独及联合检测对脓毒症发病的ROC 诊断效能

HBP 主要是由多核白细胞（PMN）受外界刺激所释放，正常人血中HBP 含量很低,一般不超过10 ng/Ml。 当机体发生感染时，若细菌入侵到血管内，则菌体本身或者细菌释放的毒素等物质会刺激中性粒细胞释放HBP，从而导致血液中HBP 含量升高[5]。 既往研究显示，脓毒症患者在发展成低血压症状前10~12h 内,血浆中能检测到高浓度的HBP；除此之外，HBP 还参与软组织感染等多种感染的发生[6]。 研究结果提示，HBP 与脓毒症有紧密的关系，有可能成为脓毒症的早期诊断指标。

PCT 是一种蛋白质内生成的降钙素前体。当机体出现脏器衰竭、细菌、真菌和寄生虫感染时,血浆中的PCT 水平会显著升高,是反映感染性疾病病情严重程度的重要指标。目前，血PCT 浓度已广泛用于脓毒症的病情评估和预后判断[7]。 NT-Pro-BNP是含76 个氨基酸的多肽。 既往研究显示，脓毒症患者,尤其是合并心肌损伤的患者中,血浆NT-Pro-BNP 的浓度水平有显著升高， 且该浓度水平与患者预后密切相关[8]。Solheim 等研究发现,391 例住院治疗的脓毒症患者中,有22%的患者具有心血管病史,其次为糖尿病、慢性肾衰和免疫缺陷等，常存在心脏舒张功能不全，测定其NT-pro BNP 水平,是脓毒症早期诊断和预后死亡的独立预测因子[9]。

本研究结果显示，脓毒症患者的HBP、BNP 及PCT 指标数值显著高于正常对照组，三项指标均对脓毒症患者早期诊断有重要意义。PCT 作为传统诊断指标，在进行单指标变量诊断脓毒症发病时，曲线下面积大于HBP、BNP 的曲线下面积，提示PCT指标单独预测脓毒症发病效能相对较高。 然而，采用单一指标评估脓毒症患者预后均存在一定的局限性, 通过联合多种感染及心肌损伤生物学标记物，能在一定程度上弥补单一指标的不足。 将指标两两联合进行预测时，结果发现HBP 联合BNP 指标预测脓毒症发病效果最佳,高于传统的PCT 单独预测指标，稍高于HBP、BNP、PCT 三个指标的联合检测的曲线下面积。 除此之外，HBP、BNP 及PCT检测方便、快捷,APACHE II、SoFA 评分等预后指标的数据采集操作相对繁琐, 这也是HBP、BNP 及PCT 检测的一个优势[10]。

综上所述,血液HBP 水平、BNP 值和PCT 值能有效帮助临床医生诊断患者是否发生脓毒症，并且有助于预后判断。 由于其检测手段简单、快捷，对患者脓毒症早期的诊断以及干预治疗具有较高的参考价值。 同时HBP 联合BNP 指标预测脓毒症发病效果最佳，发病早期测定HBP 及BNP 水平对脓毒症的诊断有指导意义。