超高效液相色谱——串联质谱法测定畜禽肉中多种磺胺类药物残留

向 俊

(湖南省食品质量监督检验研究院，湖南 长沙 410111)

磺胺类药物(SAs)价廉易得、抗菌力强且能迅速完全吸收，因而在畜牧业及兽医临床畜禽细菌性疾病的预防与治疗中得到广泛应用。然而，磺胺类药物会在体内存在较长的代谢时间，易蓄积在人体内，一旦超出某个值的蓄积浓度，就会危害人体健康。长时间小剂量或短时间大剂量蓄积，会引发慢性或急性中毒，导致机体免疫、泌尿系统受到影响，对肌肉、甲状腺及肾脏等组织产生损害。本文选择UPLC-MS/MS法，对畜禽肉内8种SAs残留同时进行了测定。

1 试验材料

1.1 材料

WatersXevo TQ-S超高效液相色谱——串联质谱仪；TTL-DCⅡ氮吹仪；T18均质机；Allegra 64R高速冷冻离心机；Milli-Q超纯水系统[1]。

8种磺胺类药物标准品：磺胺醋酰(STD)、磺胺甲噻二唑(STZ)、磺胺二甲异恶唑(SIX)、磺胺氯哒嗪(SCP)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺甲基异恶唑(SMZ)、磺胺噻唑(ST)、磺胺甲基嘧啶(SMR)(纯度≥99%)。异丙醇、无水硫酸钠(分析纯)；正己烷、乙腈、乙酸铵(色谱纯)；650℃环境下灼烧无水硫酸钠，持续4h，转至干燥器备用。实验室用水为Milli-Q超纯水。

猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉(当地市场购买)。

1.2 仪器条件

色谱分析条件：Waters BEH-C18色谱柱，2.1mm×100mm，1.7μm；乙腈为A相，pH=7.0、10mmol·L-1的乙酸铵水溶液为B相，柱温35℃、流速0.4mL·min-1、进样体积10μL；梯度洗脱程序，0～5.0min—95%～85%B，5.0～7.0min—85%～45%B，7.0～7.5min—45%～95%B，10min—95%B。

质谱分析条件：电喷雾电离ESI(+)(离子源)，接口电压3.5kV，温度120℃；电子倍增电压650V；脱溶剂气温度350℃；雾化气，氮气600L·min-1；碰撞气，氩气；扫描模式，多反应监测模式。

2 实验方法

2.1 标准溶液配制

配制1mg·mL-1的标准储备液：在多个10mL容量瓶内分别放入精确量取的8种SAs标准品各10.00mg，用甲醇定容至刻度，保存至冰箱(-20℃)。

配制1μg·mL-1的混合标准工作液：在同一容量瓶内放入适量的上述储备液，用甲醇稀释后，保存至冰箱(4℃)。

2.2 样品前处理

动物组织在均质机内均匀化绞碎后，精确称取5.00g放入塑料离心管(50mL)内，按先后顺序加入无水硫酸钠20g、乙腈20mL，经涡旋混匀后超声提取30min，随后进行离心，8000r·min-1，10min。收集上清液，转入鸡心瓶(150mL)，残渣用20mL乙腈(无水硫酸钠除水)清洗，收集上清液，转入鸡心瓶。将提取液合并，移至旋转蒸发器内，在水浴(50℃)条件下浓缩，约1mL时放入离心管(10mL)。鸡心瓶内的残渣用2mL乙腈溶解后，转至离心管内合并，吹干有机相(40℃氮气保护)。加入1mL初始流动相，涡旋1min后溶解残渣。乙腈饱和正己烷1mL充分涡旋，复溶液重复1～2次萃取，将脂肪去除。将上层有机相摒弃，下层清液过滤(滤膜：0.22μm)，待测。

3 结果与分析

3.1 质谱条件确定

采取流动注射方式，于正离子模式下将8种100mg·L-1浓度的磺胺类药物进行质朴参数调谐优化。扫描各种化合物母离子，将分子离子确定后，手动进行锥孔电压的调节，得到不同目标物在响应值最大的条件下所对应的锥孔电压值[2]。以此为基础对子离子碰撞能量进行优化，通过调节子离子质谱信号丰度，得到子离子碰撞最佳电压，干扰偏低、丰度较强的子离子作为定量定性离子。

3.2 色谱条件确定

SAs含有弱碱性氨基，所以对流动相pH值调节，可对弱碱离解发挥抑制作用，改变保留时间。鉴于pH>5的磺胺类药物会有负电荷，选择pH值为7.0的固定流动相乙酸钠水溶液。通过试验结果得知，11min内，8种磺胺类药物分离完全，保留时间重现性良好，且具有理想峰型。

3.3 方法线性范围及检出限

通过空白基质加标制备混合标准溶液方式的应用，可在一定程度上弱化离子化基质效应，有利于定量结果准确性的提高。精确称取5.00g阴性样品共6份，提取方法按照上述处理方法进行，获取空白基质液，配制浓度不同的混合标准溶液，分别为5ng·mL-1、10ng·mL-1、20ng·mL-1、80ng·mL-1、100ng·mL-1，构建标准工作曲线，横坐标为SAs浓度，峰面积则为纵坐标，取得线性回归方程，根据表1得知，该方法在5～100ng·mL-1范围内，线性关系较好。在空白样品内依次加入8种SAs标准溶液，得知该方法目标物的检出限和定量限分别为2μg·kg-1、5μg·kg-1。

3.4 方法回收率与精密度

表1 8种磺胺类药物残留检测方法线性范围及检出限

在空白基质内分别将8种SAs混合标准溶液加入，执行2.2中样品前处理方法后，实施添加回收率及精密度试验，对回收率及相对标准偏差进行计算[3]。根据表2数据得知，8种磺胺类药物在添加水平为10μg·kg-1、20μg·kg-1、100μg·kg-1时，分别得到84.0%～114.2%和0.73%～7.96%的平均回收率与RSD。

3.5 实际样品测定

对本地市场购买的鸡肉、猪肉、羊肉及牛肉进行抽检，实际样品内并未检测出残留磺胺类药物[4]。为对方法适用性加以验证，实施加标试验测定，试验对象为鸡肉、羊肉及牛肉，回收率不低于80%。

表2 空白基质中8种磺胺类药物添加回收率及精密度(n=6)

4 结论

超高效液相色谱——串联质谱法为一种灵敏快速、准确度高、分离范围广的检测方法，其对样品的要求较低，对化合物结构破坏小，适用有机分子和生物分子的分离。由于兽药残留的多样化及其复杂程度，检测兽药残留不仅限于一种药物残留的监测，单类监测兽药残留具有效率低、耗时长的缺点，因此超高效液相色谱串联质谱法被广泛应用于兽药的检测中。

本实验中，经乙腈提取、浓缩后的样品，正己烷脱脂下用电喷雾电离串联质谱展开测定。通过检测结果得知，该方法前处理简单，检出限低，具有较好的重现性，在畜禽肉磺胺类药物残留测定中，可最大限度满足实际工作需求。