三种方法测定鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性结果的比较

胡峻峰

【摘  要】目的：比较三种方法测定鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感性，比较不同方法所得结果的差异。方法：采用纸片扩散法（K-B法）、Vitek-2 Compact系统（下称Vitek-2 法）和微量肉汤稀释法检测102株鲍曼不动杆菌对替加环素（TGC）的敏感性，比较不同方法学所得结果的差异。结果：纸片扩散法、Vitek-2 法和微量肉汤稀释法检测结果显示，102株鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感率分别为：47.0%、85.3%和98.0%;中介率分别为：51.0%，12.7%和1.0%;耐药率分别为：2.0%，2.0%和1.0%。以微量肉汤稀释法结果标准，纸片扩散法结果的总误差率为53.0%，Vitek-2法结果的总误差率为14.7%。结论：纸片扩散法或Vitek-2 法结果显示鲍曼不动杆菌对替加环素非敏感时，应采用微量肉汤稀释法进行复核确认其敏感性。

【关键词】鲍曼不动杆菌;替加环素;药物敏感性实验

【中图分类号】R446      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）09-0044-01

Comparison of three methods for determining the sensitivity of Acinetobacter baumannii to tigecycline

Junfeng Hu

（Qing Bai Jiang Maternal And Child Health Hopital，Chengdu，Sichuan 614000，China）

【Abstract】Objective：To compare three methods to determine the sensitivity of the acycolide and compare the results of different methods .Methods：Using disc diffusion method（K-B method），2 Compact Vitek system（hereinafter referred to as Vitek-2 method）and trace the broth dilution test for 102 strains of acinetobacter baumannii to add ring element （the TGC） sensitivity ，comparing the difference between the results and the methodology .Results：disc diffusion method，Vitek-2 method and trace the broth dilution test，according to the results of 102 strains of acinetobacter baumannii to add ring element for sensitive rate is respectively：47%，85.3% and 98.0%;The intermediate rates were：51.0%，12.7% and 1.0%.The tolerance rate was 2.0%，2.0% and 1.0%;The total error rate of the paper diffusion method was 53.0%，and the total error rate of the Vitek-2 method was 14.7%.Conclusion：disc diffusion method or Vitek-2 test results show that the acinetobacter baumannii to add ring element for the sensitive， should be used in audit and confirm its sensitivity to trace the broth dilution method.

【Keywords】A.baumannii;Tigecycline;Drug susceptibility testing

替加环素属于新一类超广谱甘氨酰环素类抗生素，由于其抗菌谱广，抗菌活性强，不易产生耐药性，不良反应少而且轻，临床使用方便，节约医疗资源^[1]。由于其对多重耐药革兰阴性杆菌具有强大的抗菌作用，目前已成为治疗多重耐药鲍曼不动杆菌（MDR-AB）感染的重要选择。但是替加环素理化性质较活泼，易氧化降解，不宜在光线及空气中久置，高温及受潮环境下易形成差向异构体，从而导致替加环素有效抗菌活性降低，造成实验误差，该实验操作过程很难标准化，直接影响检测结果^[2]。为此，本研究比较纸片扩散法、Vitek-2法和微量肉汤稀释法三种方法在测定鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性时结果的差异，为检测其敏感性时药敏方法的选择和结果的解释提供参考。

1 材料与方法

1.1 菌株

四川省人民医院临床分离的102株鲍曼不动杆菌，剔除同一患者分離的重复菌株，所有菌株均经VITEK-2-Compact 微生物分析仪鉴定确认。

1.2 仪器与试剂

Vitek-2-Compact 全自动鉴定仪及配套药敏AST-XN04、AST-GN 16卡（法国梅里埃公司），替加环素纸片（ 15μg /片，温州市康泰生物科技有限公司），替加环素药敏试剂（微量肉汤稀释法 ， 0.25-32μg/ml， 温州市康泰生物科技有限公司）

1.3方法

1.3.1纸片扩散法

按美国CLSI推荐的操作进行。对于鲍曼不动杆菌，抑菌圈直径>=16mm为敏感（S），13-15mm为中介（I），<=12mm为耐药（R）。（参考美国FDA药敏标准）

1.3.2 Vitek-2 法

用Vitek-2-Compact 全自动鉴定仪配套GN药敏卡进行药敏试验，具体操作参考说明书，仪器自动给出MIC值。对于鲍曼不动杆菌，MIC<=2μg/ml为敏感（S），MIC=4μg/ml为中介（I），MIC>=8μg/ml为耐药（R）。（参考美国FDA药敏标准）

1.3.3 微量肉汤稀释法

严格按照CLSI及替加环素体外药敏试验操作规程的方法进行操作，对于鲍曼不动杆菌，MIC<=1μg/ml为敏感（S），MIC=2μg/ml为中介（I），MIC>2μg/ml为耐药（R）。（参考美国FDA药敏标准）

1.4质控

替加环素（Tigecycline）纸片含量15μg，质控菌株：ATCC 25923（20-25mm）、ATCC 27853（9-13mm）

1.5 误差分析

以微量肉汤稀释法为参考标准，分析其他2种方法与微量肉汤稀释法测试结果的一致率。微量肉汤稀释法药敏结果为R，而其他方法为S，判为重大误差。微量肉汤稀释法药敏结果为S，而其他方法为R，判为重要误差。微量肉汤稀释法药敏结果为R或S，其他方法为I;或微量肉汤稀释法药敏结果为I，而其他方法为R或S，判为次要误差。

2 结果

2.1三种方法检测药物敏感性结果（表1）

微量肉汤稀释法检测结果显示，鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感率达98%。微量肉汤稀释法检测敏感率高于其他两种方法，Vitek-2法和纸片扩散法结果敏感率分别为85.3%和47.0%。Vitek-2法和纸片扩散法结果的中介率亦远高于微量肉汤稀释法，分别为12.7%和51.0%。

2.2  Vitek-2法与纸片扩散法检测结果差异性比较

以微量肉汤稀释法为参考标准，Vitek-2法和纸片扩散法重要误差率均为1.0%，未产生重大误差。Vitek-2法检测结果与微量肉汤稀释法的一致率（85.3%）高于纸片扩散法与微量肉汤稀释法的一致率（47.0%），Vitek-2法检测结果与微量肉汤稀释法的次要误差率（13.7%）低于纸片扩散法与微量肉汤稀释法的次要误差率（52.0%）。

2.3 K-B法与微量肉汤稀释法实验数据分析（图1，图2）

由图1.可见K-B法检测替加环素抑菌环直径大多在14mm（24.5%），而由美国FDA药敏标准判断为中介（I）;由图2.微量肉汤稀释法MIC分布图可见MIC大多<=0.25μg/ml（42.2%），由BSAC判读标准判断为敏感（S），微量肉汤稀释法测定鲍曼不动杆菌替加环素的敏感率远超过K-B法。

2.4 三种方法中介结果比较分析

本次试验102株临床分离的鲍曼不动杆菌中13株Vitek-2 法检测和K-B法检测结果为中介（I），但其中12株菌株用微量肉汤稀释法复查结果均显示为敏感（S）。当Vitek-2 法和K-B法检测鲍曼不动杆菌替加环素的敏感性为非敏感时，应用微量肉汤稀释法复核，从而给予临床正确的用药意见。

3 讨论

鲍曼不动杆菌在医院内分布广，易感染且可长期存活，是院内感染的一大重要的病原菌，其临床症状严重且危急，尤其对免疫力低下、病情危重患者威胁极大。如今耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌更是发展迅速，已引起临床及微生物人高度警惕。

替加环素体外药敏试验包括K-B法、E-test法、琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和细菌药敏鉴定仪器等，不同方法学所得的药敏结果有所差别。目前尚无CLSI推荐的纸片药敏折点。2013年专家共识的出台意在使临床实验室对替加环素的体外药物敏感性检测能简单易行地开展，以及药敏检测结果具有可比性，必须统一替加环素体外药敏检测结果与临床需求之间的匹配度^[4];检测鲍曼不动杆菌菌株对替加环素的敏感性，纸片扩散法和Vitek-2仪器法检测结果与微量肉汤稀释法一致性较低时，应以微量肉汤稀释法为推荐方法^[3]。

不同检测方法的比较：微量肉汤稀释法为参考方法，Vitek-2法在检测替加环素对鲍曼不动杆菌的MIC_S值与微量肉汤稀释法存在较大误差，但操作简便;纸片扩散法对于鲍曼不动杆菌的非敏感性比例高，操作简便，成本低。

本实验中三种不同方法檢测的102株临床鲍曼不动杆菌菌株对替加环素的敏感性发现，三种方法符合性不好，与2013年专家共识结论一致;纸片扩散法与Vitek-2法极易高估替加环素的非敏感率。因此对于纸片扩散法和Vitek-2法检测为非敏感的菌株应通过定量实验再次检测药敏结果，以免造成临床用药选择和剂量不当，加重患者负担，增加病原菌的耐药性。

TEST（tigecycline evaluation and surveillance trial）检测结果表明，近年来替加环素对鲍曼不动杆菌的敏感性并无太大变化，但Venezia等报道在国外替加环素对鲍曼不动杆菌的耐药率居高不下^[4]，目前国内鲍曼不动杆菌多重耐药形势亦严峻，TGC成为了临床重要的选择，微生物室提供准确的抗菌药物体外药敏结果对临床选用药物及剂量至关重要，由于替加环素药敏试验操作中影响因素较多、不同方法学所得结果存在差异，本实验验证了

2013年专家共识的专家组推荐TGC体外药敏检测流程的可行性：

参考文献

[1]  张静，周万青，张之烽，缪素红. 碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌替加环素体外药敏分析[J]. 江苏医药，2017，（03）：208-210.

[2]  秦又发，吴雷，朱永坤，张扬. 替加环素联合头孢哌酮-舒巴坦治疗广泛耐药鲍曼不动杆菌医院获得性肺炎临床疗效观察[J]. 中国感染与化疗杂志，2015，（05）：430-433.

[3]  闻海丰，秦瑾. 替加环素等常用抗生素对鲍曼不动杆菌体外药敏结果分析[J]. 中国抗生素杂志，2015，（07）：538-542.

[4]  王康椿，李满元，余晓腾，刁艳丽. 替加环素、多粘菌素和头孢哌酮舒巴坦对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌活性的研究[J]. 中国医学创新，2015，（18）：17-20.