黔产凤仙花中2-甲氧基-1，4-萘醌的含量测定*

吴海燕，李春宁，胡成刚▲

(1贵州中医药大学，贵州 贵阳 550002；2贵州中医药大学，贵州 贵阳 550002)

凤仙花，为凤仙花科植物凤仙花ImpatiensbalsaminaL.的全草。凤仙花主要含黄酮醇类及萘醌衍生物，如2-甲氧基-1，4-萘醌、山奈酚-3-鼠李糖基双葡萄糖苷、2-羟基-1，4-萘酚等[1]，凤仙花的根含有指甲醌(lawsone)、2-甲氧基-1，4-萘醌(2-methoxy-1,4-naphthoquinone)、东莨菪素、异嗪皮啶、菠菜甾醇(spinasterol等，具有抗真菌、抗过敏、抗炎镇痛、促皮透析等作用，其中2-甲氧基-1，4-萘醌(2-methoxy-1,4-naphthoquinone)为其主要的抗真菌成分，贵州省凤仙花资源分布较广，大部分为栽培品，鉴于该药材中2-甲氧基-1，4-萘醌具有广泛的抗真菌的效果[2]，为了更好的研究黔产凤仙花药材，该实验建立了以2-甲氧基-1，4-萘醌的含量测定方法，为后续的研究提供一定的理论及实验基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-2030C液相色谱仪系统，恒温水浴锅(型号：HWS-24型，厂家：上海一恒科学仪器有限公司)、打粉机(型号：CS-700，厂家：永康市天祺盛世有限公司)、圆底烧瓶 500 mL、冷凝管400mm、电子天平。

1.2 试药

2-甲氧基-1，4-萘醌对照品(批号：S20F719925，厂家：上海原叶生物科技有限公司，含量以98%计)，娃哈哈饮用纯净水，乙腈为色谱醇，乙醇、甲醇为分析醇，药材样品共10个批次，均采自贵州省，见表1。

表1 药材样品信息表

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

COSMOSIL Cholester色谱柱(4.6×250 mm，5 μm)，流动相：A相为水，B相为乙腈；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μL，进行梯度洗脱，见表2。

表2 梯度洗脱程序表

2.2 溶液的制备

对照品溶液制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5 mg，加入甲醇100 mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液[3]。

供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末1 g，加入100 mL的甲醇溶液，称定重量，在90 ℃下回流提取1 h，放冷至室温，称定重量[4]，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45 μm的微孔滤膜过滤后即得供试品溶液[5]。

2.3 专属性试验

在2.1色谱条件下，对照品和供试品均峰形良好，对照品的保留时间为14.445 min，样品的保留时间为14.447 min。

图1 2-甲氧基-1，4-萘醌对照品色谱图

图2 凤仙花样品溶液色谱图

2.4 线性关系的考察及标准曲线的制作

精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品6 mg，加入甲醇100 mL配成0.06 mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品母液。精密吸取上述对照品溶液0.5 mL、3 mL、5 mL、7 mL、9 mL于10 mL容量瓶中，按拟定的色谱条件测定峰面积，以峰面积对进样浓度进行线性回归，得回归方程y=6*107x-16256(r=0.9997)。结果表明，2-甲氧基-1，4-萘醌浓度在0.0034～0.054 mg·mL-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系。结果见表3。

表3 线性关系考察

图3 线性关系图

2.5 精密度试验

精密吸取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品溶液(0.04 mg/mL)，按2.1项下的色谱条件，连续进样6次，每次进样10 μL，测定2-甲氧基-1，4-萘醌成分峰面积，结果6次峰面积RSD=0.22%，符合质量标准技术要求(RSD在3%以内)，精密度良好。结果如表4所示。

表4 精密度考察(n=6)

2.6 重复性试验

取同一批号药材，按2.2项下的供试品溶液制备的方法制备6份，以2.1项下的色谱条件，每次10 μL分别测定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面积，计算得2-甲氧基-1，4-萘醌的含量平均值为0.497 mg/g，RSD值=0.55%，结果见表5，表明供试品溶液重复性较好。

表5 重复性试验(n=6)

2.7 稳定性试验

按2.2项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，以2.1项下的色谱条件，按0 h、2 h、6 h、4 h、8 h、10 h、12 h分别进样10 μL，测定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面积平均值为291735，RSD=1.1%，结果见表6所示，表明供试品溶液在12 h内稳定。

表6 稳定性试验

2.8 加样回收率试验

精密称定凤仙花药材粉末0.5 g共6份，精密加入对照品0.3 mg，提取供试品溶液按2.1项下的色谱条件测定，每次10 μL分别测定2-甲氧基-1，4-萘醌成分的峰面积，按2015年版《中国药典》四部附录9101计算出回收率。结果见表7所示，该加样回收平均值为100.05%，RSD=0.73%，表明该加样回收率结果良好，符合定量分析要求。

表7 加样回收率试验

2.9 样品含量测定

分别精密称取对照品与10个批次的凤仙花样品各1 g，按2.2项下供试品溶液的制备方法提取并测定2-甲氧基-1，4-萘醌的含量，实验结果见表8。

表8 黔产凤仙花的含量测定

3 讨论

1)实验对凤仙花的提取溶剂进行了考察对比，发现相同的样品称样量及提取方法等条件一致的情况下，提取溶剂甲醇比乙醇的提取效果较好。

2)在对黔产凤仙花药材的目标化学成分2-甲氧基-1，4-萘醌的含量测定中，实验结果显示凤仙花生长环境比较好的地方，2-甲氧基-1，4-萘醌的含量较高，反之，凤仙花生长环境污染较严重的地方，2-甲氧基-1，4-萘醌的含量较低。后续的研究中可以针对环境对凤仙花药材的影响以及凤仙花是否对污染环境中的有害物质有一定的吸附作用进行研究。

3)本实验对贵州省部分产地的凤仙花中主要的抗真菌成分2-甲氧基-1，4-萘醌的含量测定，可以对后期进行黔产凤仙花的含量测定以及其他有关黔产凤仙花的研究提供一定的参考依据。