大肠不同部位恶性上皮肿瘤中错配修复蛋白表达及意义

段运动,代俊利

(河北省承德市中心医院重症医学科， 河北 承德 067000)

大肠癌是消化道比较常见的恶性肿瘤之一，2014年WHO在世界癌症大会上指出，大肠癌发病率位于恶性肿瘤发病率的第三位，2012年世界癌症协会统计大约有69万人死于大肠癌[1]。大肠癌的发病有很多因素，由于其发病机理较为复杂，截止到现在还没有一个共性的说法，根据相关的文献资料可知，大肠癌的发病与微卫星不稳定有很大的关系，错配修复基因是造成微卫星不稳定的主要因素，也就是说是由于错配修复蛋白(Mismatch repair, MMR)的表达缺失造成的[2]。本研究通过免疫组化SP方法研究MMR的表达，并分析其表达情况对大肠癌发病率和死亡率的影响，希望可以找到该种蛋白是如何影响大肠癌的发病及在不同部位大肠癌中的表达意义。

1 资料与方法

1.1临床资料:收集的资料来源于承德市中心医院。病例为2017年6月至2018年12月确诊的大肠癌患者，患者的年龄在37岁到71岁(平均57+6.41岁)，共计168例。在这168例患者中右半结肠癌、左半结肠癌和直肠癌的人数分别是47人、92人和29人。所有病例的诊断均是按照2015年中国结直肠癌诊疗标准进行判定的，而且这些患者在进行诊断之后均没有接受过放化疗及生物治疗，而且具有详细的临床病理资料，其中选用的对照组为与肿瘤相距5cm的正常大肠黏膜(78例)。

1.2方法：本研究中采用免疫组织化学染色法对MMR进行分析和研究， MLH1、MSH2、MSH6、PMS2这四种错配修复蛋白，全部正常表达，认为MMR正常。若只要有一种不表达，就可以认MMR缺失，也就是错配修复出现缺陷。免疫组化试剂均购于北京中杉金桥生物有限公司。

1.3结果判定：四种错配修复蛋白(MMR)：MLH1、MSH2、MSH6、PMS2，阳性表达均位于细胞核。为了试验的完整性和科学性，以阳性肿瘤细胞周围的正常上皮细胞、淋巴细胞作为对照。肿瘤细胞核呈现棕黄色为阳性表达。

1.4统计方法:本次研究数据处理使用SPSS19.0统计学软件，计数资料以构成比描述，组间比较采用χ2检验，P<0.05具有统计学意义。

2 结 果

2.1在168例大肠癌组织中MMR蛋白表达缺失组(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白无缺失组(pMMR)为141例(83.93%)，78例癌旁正常大肠黏膜组织MMR蛋白表达缺失组(dMMR)56例(71.79%)，MMR蛋白无缺失组(pMMR)为22例(28.21%)，MMR蛋白在大肠癌中与正常肠黏膜中的表达具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 MMR蛋白在大肠癌及正常肠黏膜组织中的表达n(%)

2.2在168例大肠癌组织中MMR蛋白表达缺失组(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白无缺失组(pMMR)为141例(83.93%)。在47例右半结肠癌中，dMMR为19例(40.42%)，在左半结肠癌和直肠癌中dMMR分别为5例(5.43%)和3例(10.34%)，dMMR在不同部位大肠癌具有统计学意义(P<0.05)。并且有淋巴结转移组和侵透肌层组dMMR要明显低于无淋巴结转移组及侵犯肌层组(P<0.05)，见图1、表2。

表2 MMR蛋白表达与大肠癌临床病理特征的关系n(%)

图1 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2在大肠癌中的表达

3 讨 论

恶性肿瘤的病因不明确，发生与多种因素有关，正常的人体中存在一套完整的DNA修复系统，如果修复机制出现异常，可引起基因突变导致癌变。作为消化道常见肿瘤之一的大肠癌，根据不同的分子变异基础，可以将病因分成两种类别。第一，就是染色体不稳定(CIN)，第二，就是与dMMRT相关[3,4]，这其中有大约15%大肠癌的发生与微卫星不稳定(MSI)相关，而错配修复基因的改变是导致MSI的直接原因。MMR蛋白在修复机制中发挥着重要作用，可识别DNA复制过程中出现的错配碱基，并进行水解和修复，从而维持遗传物质的稳定性[5]。研究[6]发现如果大肠癌患者处于MSI的Ⅱ和Ⅲ期，那么采用5-氟尿嘧啶对其生存期的意义并不是很大，所以在使用该药物来分析病症的时候可以利用MSI作为预后和疗效预测的一个基本生物指标。而且MSI机制引起的大肠癌，相对于其它原因引起的大肠癌来说预后相对较好，在机体中发生转移的概率也比较低，并且该机制引起的大肠癌对一些化疗药物的敏感度不高，比如5-氟尿嘧啶和顺铂等，但是对伊利替康比较敏感，放疗敏感性也会较高[7]。现在对于子宫内膜癌也进行错配修复蛋白检测，如果MMR基因的胚系发生了突变，那么很有可能是Lynch综合征的病因，而且在这个过程中就可能会引起大肠癌、卵巢癌等衍生病症，所以检测MMR蛋白不仅可以筛查Lynch综合征，还可以进一步降低患者家族的致病率。目前免疫组化方法已被广泛应用于MMR蛋白检测，其准确率与PCR技术相似，而且操作相对简便，费用更低，因此被科研机构和医院所用[8]。对于dMMR结直肠癌的病例，其具有的典型特征有：发病年龄早；右半结肠多见；黏液腺癌为常见组织学类型；Crohn's样淋巴细胞反应常见；一般预后较好等[9]。本研究采用免疫组化SP方法来分析MMR蛋白在大肠癌中的表达，其中在168例患者中，MMR无缺失141例(83.93%)，MMR缺失27例(16.07%)，同时也显示MMR蛋白表达与肿瘤发生部位相关，MMR蛋白缺失组中右半结肠(17/47,40.42%)、左半结肠(5/92,5.43%)、直肠(3/29,10.34%)，很明显右半结肠癌MMR蛋白缺失明显高于其它部位，而且从病例来看右半结肠癌淋巴结转移率低及侵犯深度浅，这可能说明，发生右半结肠癌的途径与左半结肠癌和直肠癌的病因有差异，并且相对来说右半结肠癌预后可能会更好。